液相色谱法基本原理

液相色谱法根本原理岛津LC-2023AHT简介JiangXue液相色谱法简介1.色谱法及其起源2.液相色谱法根本原理及其应用3.液相色谱仪根本构造4.样品前处理JiangXue色谱法起源石油醚（流动相）碳酸钙颗粒（色谱柱）色素混合物（试样）色谱分离组分JiangXue液相色谱根本原理色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行别离的技术流动相：携带样品流过整个系统的流体，如甲醇，乙腈等固定相：静止不动的一相，色谱柱色谱是一种别离技术.色谱的主要目的是对混合物中的目标物别离和定量JiangXue液相色谱应用范围以液体作为流动相的色谱别离方法适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析。如广泛应用于食品分析，环境分析，农业分析，石油化工分析等领域。JiangXue液相色谱根本原理液相色谱方法的分类液相色谱别离方法大致可以分为正相色谱、反相色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱、体积排除色谱、亲和色谱以及手性色谱。在高效液相色谱法中，目前应用得最广泛的是正相色谱和反相色谱，其中反相色谱是重点应用。

色谱别离原理正相色谱的别离原理：根据溶质极性的不同而产生的溶质在吸附剂上吸附性强弱的差异而别离。反相色谱的别离原理：根据因溶质疏水性的不同而产生的溶质在流动相与固定相之间分配系数的差异而别离。JiangXue液相色谱根本原理反相液相色谱柱C18(ODS)C8(octyl)C4(butyl)苯基TMS氰基流动相极性大于固定相极性，流动相具有运载样品分子和选择性别离的双重作用。-Si-C18H37Si非极性色谱柱JiangXue液相色谱根本原理分析条件柱

:Shim-packCLC-ODS流动相

:MeOH:H2O=7:3流速

:1.0mL/min温度

:40C进样体积

:10uL检测器

:UV-254nm峰1.苯甲酸甲脂2.苯甲酸乙脂3.n-苯甲酸丙酯4.n-苯甲酸丁酯ODSC8TMSJiangXue液相色谱根本原理流动相的选择不改变固定相任何性质高纯度〔HPLC，无机械杂质〕较低粘度对样品溶解度适宜水的等级与检测器相匹配JiangXue液相色谱根本原理水的等级纯化水蒸馏水去离子水波长(nm)纯化水去离子水吸光率使用纯水机或超纯水机制备的HPLC用水应为18.2MΩ的超纯水，并通过0.22μm的滤膜，除去热源、有机物、无机离子等。去离子水重蒸；二次或三次重蒸水；JiangXue液相色谱根本原理溶剂的前处理过滤：0.45um或更小孔径滤膜脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：☼泵中气泡使液流波动，改变保存时间和峰面积☼色谱柱中气泡使流动相绕流，峰变形☼检测器中的气泡产生基线波动方法：超声脱气，减压脱气，在线脱气JiangXue液相色谱根本原理常用检测器紫外检测器〔包括二极管阵列检测器〕荧光检测器示差折光检测器电导检测器蒸发光散射检测器质谱检测器JiangXue液相色谱根本原理紫外检测器♥原理：基于被分析组分对特定波长的选择性吸收♥定量根底：朗伯-比耳定律，A＝kCL♥优点：1〕灵敏度高2〕对温度和流速不敏感3〕可用于梯度洗脱♥注意：仅适用于测定有紫外吸收的物质JiangXue液相色谱根本原理梯度洗脱♥流动相由几种不同极性的溶剂组成。♥通过在某些时间段改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性。♥使样品中的各组分可在最短时间内实现最正确别离。如：0-3min使用40%水+60%甲醇，3-15min40%水→10%，同时60%甲醇→90%JiangXue液相色谱根本原理

不同组成的流动相对样品别离有很大的影响。20%H2O+80%甲醇

30%H2O+70%甲醇

40%H2O+60%甲醇JiangXue岛津LC-2023AHT简介ShimadzuLC-2023AHT色谱柱：Shim-PackVP-ODS150mmΦ4.6mm检测器：UV200nm-650nm 流动相：甲醇(HPLC)，水分析物质：酚类〔五种〕，邻苯二甲酸酯类〔两种〕JiangXue岛津LC-2023AHT简介由流动相组成的溶剂在输液泵的作用下，通过管道输入系统内，并保持稳定而准确的流速。进样器是样品进入液相色谱仪的地方，在流动相的带动下，样品进入色谱柱，柱温箱可以为色谱柱保持恒定的温度，样品经过别离最后进入检测器。检测器记录下来的数据由专门的数据处理工作站完成。输液泵进样器

色谱柱柱温箱检测器溶剂数据处理JiangXue岛津LC-2023AHT简介

A泵进样器色谱柱柱温箱检测器

B

泵AB时间

浓度JiangXue岛津LC-2023AHT简介流动相JiangXue岛津LC-2023AHT简介酚类标准物质色谱图1、苯酚2、间甲酚3、2,4-二氯酚4、2,4,6-三氯酚5、五氯酚JiangXue液相色谱法根本原理岛津LC-2023AHT简介结束JiangXueJiangXue岛津LC-2023AHT简介JiangXu