免疫诊断与免疫治疗课件

免疫诊断

Immunodiagnosis

p229-240

免疫诊断与免疫治疗1免疫诊断(Immunediagnosis)概念

利用免疫学原理进行临床疾病的诊断或辅助诊断免疫诊断与免疫治疗2

抗原抗体反应的特异性

抗原抗体反应的可见性一、抗原或抗体的检测（一）、抗原抗体反应的特点利用已知抗体检测病人的未知抗原，如HBVsAg利用已知抗原检测病人的抗体，如抗HIV抗体、抗核抗体等免疫诊断与免疫治疗3抗原抗体反应的影响因素：亲和力（affinity)亲合力(avidity）YKeq=104AffinityY106AvidityYYYYY1010Avidity免疫诊断与免疫治疗4抗原抗体比例合适温度酸碱度电解质抗原抗体反应的影响因素：免疫诊断与免疫治疗5（二）、检测抗原或抗体的方法1.凝集反应（agglutination)：颗粒性抗原与相应抗体结合形成凝集团块直接凝集反应：颗粒性抗原+相应抗体间接凝集反应：可溶性抗原+颗粒载体+相应抗体免疫诊断与免疫治疗6免疫诊断与免疫治疗72.沉淀反应(precipitation)：可溶性抗原与相应抗体结合出现沉淀物单向免疫扩散：可用于检测血清中Ig的含量双向免疫扩散：抗原抗体的定性分析免疫电泳：常用于血清蛋白种类分析免疫比浊：免疫诊断与免疫治疗8AgConcentrationDiameter2AgAgAgAgAbingel单向免疫扩散免疫诊断与免疫治疗9双向免疫扩散免疫诊断与免疫治疗10Ag+-AgAb免疫电泳免疫诊断与免疫治疗114.用标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应免疫诊断与免疫治疗12免疫荧光法：荧光素与抗体连接荧光抗体直接免疫荧光：荧光素标记的抗体直接作标本染色

间接免疫荧光：一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色免疫诊断与免疫治疗13AgYFluorochromeLabeledAbTissueSection直接免疫荧光免疫诊断与免疫治疗14AgYYFluorochromeLabeledAnti-IgTissueSectionUnlabeledAb间接免疫荧光免疫诊断与免疫治疗15酶免疫测定：酶标记抗体进行的抗原抗体反应

酶联免疫吸附试验(ELISA)：将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。它将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。双抗体夹心法检测待测抗原间接法检测待测抗体BAS-ELISA（生物素-亲和素系统-ELISA）酶联免疫斑点试验(ELISPOT)免疫组化技术免疫诊断与免疫治疗16免疫诊断与免疫治疗17免疫诊断与免疫治疗18免疫诊断与免疫治疗19免疫诊断与免疫治疗20二、免疫细胞的测定分析免疫细胞的数量和功能，评价病人的免疫功能包括CD分子测定、淋巴细胞转化、吞噬实验、细胞毒实验等免疫诊断与免疫治疗21（一）、淋巴细胞的分离与类型鉴定分离方法：密度梯度离心单个核细胞磁珠分离：抗体与磁珠交联免疫吸附分离法：将已知抗体包被培养皿，加入淋巴细胞悬液荧光激活细胞分选仪分离法（FACS）抗原肽-MHC分子四聚体技术免疫诊断与免疫治疗22磁珠分离法免疫诊断与免疫治疗23流式细胞分选仪（FACS）免疫诊断与免疫治疗24RedFluorescenceIntensityGreenFluorescenceIntensityTwoParameterHistogramGreenFluorescenceIntensityGreenFluorescenceIntensityUnstainedcellsNumberofCells流式细胞仪免疫诊断与免疫治疗25免疫诊断与免疫治疗26（二）、免疫细胞功能测定：T细胞功能测定B细胞功能测定吞噬细胞功能测定免疫诊断与免疫治疗27T细胞功能测定T细胞增殖试验细胞毒试验细胞因子检测皮肤试验免疫诊断与免疫治疗28淋巴细胞转化，镜下观察3H-TdR掺入法：氚标记的胸腺嘧啶核苷2.MTT法

3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑免疫诊断与免疫治疗29细胞毒实验：细胞形态：台盼蓝染色51Cr的释放LDH释放凋亡细胞检测法：细胞形态：琼脂糖电泳FACSTUNEL免疫诊断与免疫治疗30免疫诊断与免疫治疗31细胞因子的检测生物活性检测法CTLL细胞株——

IL-2依赖免疫学检测：ELISAELISPOT免疫诊断与免疫治疗32免疫诊断与免疫治疗33免疫诊断与免疫治疗34B细胞功能测定Ig定量：单向琼脂扩散、免疫比浊法、ELISA

B细胞增殖试验抗体形成细胞测定：溶血空斑实验ELISPOT免疫诊断与免疫治疗35吞噬细胞功能测定趋化功能测定（Boyden小室）吞噬功能测定（硝基蓝四氮唑NBT、荧光标记的生物颗粒）免疫诊断与免疫治疗36三、免疫学检测方法的应用疾病的诊断：感染性疾病超敏反应性疾病自身免疫病免疫缺陷病肿瘤免疫学监测：免疫诊断与免疫治疗37

第二十三章

免疫学防治

Immunoprophylaxisandimmunotherapy

p241-251免疫诊断与免疫治疗38

一、免疫预防疫苗的基本要求:

安全有效实用自然免疫：机体感染病原体后建立的特异性免疫，包括胎儿或新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体。疫苗（vaccine）：一些能够诱导机体产生特异性免疫的人工主动免疫制剂如细菌性制剂、病毒性制剂以及类毒素等统称为疫苗。人工主动免疫:

用疫苗接种机体使之产生特异性免疫,从而预防感染的措施。人工被动免疫：给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。免疫诊断与免疫治疗39灭活疫苗：狂犬病、伤寒、流感疫苗减毒活疫苗：脊髓灰质炎、麻疹、风疹、腮腺炎疫苗类毒素：细菌的外毒素经0.3%-0.4%甲醛处理白喉、破伤风亚单位疫苗：重组乙型肝炎病毒表面抗原疫苗结合疫苗：b型流感杆菌疫苗、脑膜炎球菌疫苗、肺炎球菌疫苗DNA疫苗：重组载体疫苗：麻疹、疱疹、肿瘤疫苗、甲乙型肝炎

疫苗的种类免疫诊断与免疫治疗40新型疫苗合成肽疫苗：疟疾疫苗、肝癌疫苗处于临床试验阶段转基因植物疫苗：将编码有效免疫原的基因导入可食用的植物细胞基因组中，使其在植物的可食用部分稳定表达，通过摄取食物达到免疫接种的目的。免疫诊断与免疫治疗41疫苗的现状：常规使用的疫苗的成功率：

脊髓灰质炎、麻疹、风疹、腮腺炎疫苗

BCG

百日咳疫苗免疫诊断与免疫治疗42许多疾病无有效疫苗：

病毒：HIV，疱疹病毒细菌：葡萄球菌，A组链球菌真菌：假丝酵母原生动物：疟疾，利什曼病

蠕虫感染：血吸虫病免疫诊断与免疫治疗43人工被动免疫:给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂,以治疗或紧急预防感染的措施.

种类：抗毒素免疫球蛋白细胞因子与单克隆抗体免疫诊断与免疫治疗44佐剂（adjuvant)：预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强物质。增加局部抗原浓度刺激单核-巨噬细胞系统，增强抗原处理和提呈能力刺激淋巴细胞增殖分化常用佐剂：

氢氧化铝

ISCOMs（免疫刺激复合物）

含CpG寡核苷酸细胞因子免疫诊断与免疫治疗45我国计划免疫程序疫苗名称第一次第二次第三次加强预防传染病卡介苗出生肺结核乙肝疫苗出生1月龄6月龄乙型病毒性肝炎脊灰疫苗2月龄3月龄4月龄4周岁脊髓灰质炎百白破疫苗3月龄4月龄5月龄18-24月龄，6周岁百日咳白喉破伤风麻疹疫苗8月龄麻疹麻腮风疫苗18-24月龄风疹流行性腮腺炎乙脑疫苗8月龄2周岁流行性乙型脑炎A群流脑疫苗6-18月龄（1、2次间隔3个月）流行性脑脊膜炎A+C群流脑疫苗3周岁6周岁甲肝疫苗18月龄甲型肝炎以上为儿童免疫规划疫苗，以下为重点人群接种疫苗出血热双价纯化疫苗出血热炭疽减毒活疫苗炭疽钩体灭活疫苗钩体病免疫诊断与免疫治疗46疫苗的应用传染病抗肿瘤计划生育免疫诊断与免疫治疗47二、免疫治疗（Immunotherapy）

利用免疫学原理，针对疾病的发生机制，人为地调整机体的免疫功能，达到治疗疾病目的所采取的措施。

免疫抑制、免疫增强

主动或被动

特异或非特异

免疫诊断与免疫治疗48（一）、分子治疗分子疫苗：合成肽疫苗、重组载体疫苗和DNA疫苗抗体3.细胞因子4.微生物抗原疫苗5.基因治疗免疫诊断与免疫治疗49

1）多克隆抗体在临床应用的多克隆抗体包括：胎盘球蛋白、丙种球蛋白、破伤风抗毒素、白喉抗毒素、抗淋巴细胞抗血清、抗Rh抗体、抗SARS病毒抗体等2）鼠源单克隆抗体

在临床应用的鼠源单克隆抗体：抗CD3（OKT3）：抗器官移植排斥

抗CD20：治疗B细胞淋巴瘤3）基因工程抗体基因工程抗体已经成为治疗性抗体的主流产品。包括：嵌合抗体（chimericAb)人源化抗体（humanizedAb）

人抗体

抗体药物免疫诊断与免疫治疗50基因工程抗体

鼠源单克隆抗体治疗存在的主要问题是HAMA（Humananti-mouseantibody）反应，导致疗效下降，副作用增加。免疫诊断与免疫治疗51抗细胞因子及其受体抗体

抗TNF

及其受体的抗体治疗类风湿关节炎抗IL-2及其受体治疗自身免疫病和抗移植排斥抗VEGF抗体治疗肿瘤抗EGFR2、EGFR1抗体治疗肿瘤免疫诊断与免疫治疗52抗CD分子抗体抗CD20嵌合抗体治疗B细胞淋巴瘤抗CD33治疗急性髓性白血病抗CD52治疗淋巴瘤抗CD11a治疗银屑病免疫诊断与免疫治疗53抗体靶向治疗

（Antibody-targetedTherapy）以抗体为载体，携带同位素、毒素、药物等分子，选择性杀伤靶细胞的技术。免疫诊断与免疫治疗54I131标记抗CD20单抗治疗B细胞淋巴瘤抗癌药物（calicheamicin）偶联的抗CD33治疗白血病I131标记鼠源抗HAb18（CD147）单抗治疗肝癌（四军医大）免疫诊断与免疫治疗55抗体药物的主要问题临床用量大成本高，价格昂贵生产工艺复杂，硬件设备高投入治疗性免疫靶标的鉴定有很大难度存在临床风险免疫诊断与免疫治疗56治疗性抗体名称（括号内为商品名）适应症肿瘤抗CD20（Rituxan，Zevalin，Bexxar，Arzerra）

非霍奇金淋巴瘤抗HER2/CD340（Herceptin）

转移性乳腺癌抗CD33（Mylotarg）

急性髓样细胞白血病抗CD52（Campath）B细胞白血病、T细胞白血病和T细胞淋巴瘤抗EGFR（Erbitux，Vectibix）

转移性结肠直肠癌和头颈部肿瘤抗RANKL（Prolia/Xgeva）预防已经转移并损害骨质的肿瘤患者的骨骼相关事件

急性移植排斥反应抗CD3（OrthocloneOKT3）

肾移植后急性排斥反应抗CD25（Zanapax，Simulect）

肾移植后急性排斥反应自身免疫病和过敏性疾病抗TNFα（Remicade，Humira，Simponi）Crohn病，类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、溃疡性结肠炎、强直性脊椎炎抗IgE（Xolair）

持续性哮喘抗CD（Raptiva）

斑状牛皮癣抗α4整合素（Tysabri）

多发性硬化症抗VEGF（Lucentis）

年龄相关性黄斑病变抗CD45RO+（Amevive）银屑病及其他自身免疫紊乱疾病抗TNF（Cimzia）类风湿性关节炎抗IL-1β（Ilaris）自身炎症性疾病抗IL-12/IL-23（Stelara）成年患者中度至严重的斑块性银屑病人源型抗C5（Soliris）阵发性睡眠性血红蛋白尿症

其他抗gpⅡb/Ⅲa（ReoPro）预防冠状动脉血管成形术中发生血栓抗呼吸道合胞病毒（Synagis）预防儿童在高危期呼吸道合胞病毒感染抗IgGⅠ（OncoScint）检测结直肠腺癌和卵巢上皮细胞癌，诊断乳房癌、肺小细胞癌、胰腺癌、胃癌和食管癌抗PSMA（ProstaScint）评估疑有复发的前列腺患者、用于患者的分期抗CEA（CEA-Scan）检测原发性、结直肠癌转移，乳腺癌淋巴转移抗肌凝蛋白单株（Myoscint）心肌梗塞引起的胸痛定位、心肌梗塞和心肌炎的造影抗SCLC抗体片段-NR-LU-10-Fab（Verluma）诊断常规方法检查经常无效的小细胞肺癌抗CD15（NeutroSpec）用于阑尾炎疑似患者的鉴别诊断美国FDA已批准生产和临床使用的单克隆抗体（截至2011年）免疫诊断与免疫治疗57

批准上市的重组细胞因子药物

IFNα

白血病、肝炎、Kaposi肉瘤

IFNγ 类风湿关节炎、慢性肉芽肿、生殖器疣

G-CSF

自身骨髓移植、化疗导致的粒细胞减少症、再生障碍性贫血

GM-CSF自身骨髓移植、化疗导致的血细胞减少症、再生障碍性贫血

Epo

慢性肾衰导致贫血、癌症或癌症化疗导致的贫血、失血后贫血

IL-2 癌症、免疫缺陷、疫苗佐剂

IFNβ多发性硬化症

IL-11放化疗所致血小板减少症

SCF与G-CSF联合应用与外周血干细胞移植

PDGF糖尿病导致的皮肤溃疡

EGF外用药治疗烧伤、溃疡（仅在中国上市）

bFGF外用药治疗烧伤、外周神经炎（仅在中国上市）

TNF

局部灌注治疗晚期骨髓瘤（仅在德国上市）

TNF

突变体晚期肿瘤（仅在中国上市）

Tpo治疗血小板减少症（仅在中国上市）重组蛋白质药物免疫诊断与免疫治疗58

批准上市的重组可溶性受体药物

可溶性TNF受体-Ig（Enbrel）：治疗类风湿关节炎（Amgen),2006年销售额超过45亿美元

可溶性CD152-IgCTLA4-Ig）:商品名Abatacept，治疗自身免疫病（Bristol-MyersSquibb）,2005年12月批准上市免疫诊断与免疫治疗59重组蛋白质药物的主要问题半衰期短，需要反复给药能够诱导抗体产生免疫诊断与免疫治疗60基因治疗将正常人体基因通过

invivo或exvivo的途径导入病人体内，通过体内表达正常基因治疗疾病。免疫诊断与免疫治疗61AshantideSilva,wasthefirstpatienttobetreatedwithgenetherapy.重症联合免疫缺陷（SCID）的基因治疗腺苷脱氨酶（ADA）基因治疗(1990)免疫诊断与免疫治疗62免疫诊断与免疫治疗63

XSCID的IL-2受体链基因治疗性联SCID的发病是由于IL-2R基因缺陷2000年法国科学家在Science首次报道2例成功基因治疗的结果；至2002年法、英、美共治疗14例，12例成功。第一例成功接受IL-2R基因治疗的男孩RhysEvans免疫诊断与免疫治疗64XSCID基因治疗原理免疫诊断与免疫治疗65基因治疗的主要问题病毒载体的安全性靶基因选择基因导入效率基因的可调控表达免疫诊断与免疫治疗66（二）、免疫细胞治疗将