MCVRBC脆性灵敏度特异度-广州医科大学教育技术中心课件

血液学指标﹑Hb电泳、RBC脆性

在地贫患者与缺铁性贫血的诊断价值

医学检验系2005届李蔼文

指导老师：孙筱放李少英

广州市第二人民医院妇产科研究室

毕业论文11/27/20231摘要目的

探讨红细胞的MCV，MCH，MCHC，RDW等血液学指标、红细胞脆性、HB电泳，对地中海贫血患者及缺铁性贫血的诊断价值。方法

健康对照组30例;地中海贫血患者100例(其中α地中海贫血患者60例，β地中海贫血患者40例)，缺铁性贫血30例。全部用血细胞计数仪仪血常规测定、红细胞脆性的检测、血红蛋白电泳仪进行血红蛋白电泳分析、地贫基因检测、血清铁蛋白检测。结果

病人组血红蛋白电泳HBA，HBA2，HBF异常，其MCV，红细胞脆性均降低，与正常对照组比较有显著差异（P<0.05），MCV，RBC脆性对地贫的灵敏度和特异度分别为为98%，93%及77%，80%。HBA2对α地贫，β地贫灵敏度分别为83.3%,95%。而RDW基本正常,灵敏度为73%，但缺铁性贫血的RDW升高，灵敏度为70%。结论1.MCV，血红蛋白电泳，红细胞脆性应用对地贫有诊断意义，可作为其简单，方便，快速，较准确的筛查方法；2.对于缺铁性贫血

，RDW可作为先于血清铁蛋白的初筛试验，值得推广应用。2关键词地中海贫血；MCV；MCH；RDW；红细胞脆性；血红蛋白电泳

3英文摘要

[Abstract]ObjectiveTOstudythevalueofmeancorpuscularvolume(MCV),meancorpuscularhemoglobin(MCH),meancorpuscularHemoglobinconcentration(MCHC),redbloodcellvolumedistributionwidth(RDW),redcellosmoticfragilitytest(RCOF)andHemoglobinelectrophoresisforthediagnosisofthalassemiaandtocomeparewithIDA.Methods30samplesofthehealthypeoplewithoutIDAorortheranemia,and60samplesofα-thalassemia,40samplesofβ-thalassemia,30samplesofIDA,weredetectedbyhermoatologyanalyzer,redcellosmoticfragilityandHbelectrophoresis,genes’testofthalassemia.4

ResultBytheHbelectrophoresis,patients’HbA,HbA2,HbFwerechanged,MCV,RCOFwerealsodecending,havingobviousdiffenercecomparedwithhealthypeople(P<0.05),thesensitivityoftestwereasfollow:MCVwas96%,HBA2was83.3%forαthalassemia,95%forβthalassemia.RDWbelongednormalrange,it’ssensitivitywas77%.However.IDA’sRDWascended,andit’ssensitivityforIDAwas70%.ConclusionThetestofMCV,RCOFandHbelectrophoresisincreasesthesensitivityinthediagnosisofthalassemia,beingabletobecomesample,quick,truetestsofbolting,IDAandThalassemiaarediffentfromRDW,andRDWcanbeusedtoasascreeningmethodbeforethemeasurementofserumferritin,suittobeusedwidely.5[Keywords]Thalassemia;MCV;MCH;MCHC;RDW;redcellosmoticfragility;

Hemoglobinelectrophoresis.6正文地中海贫血（简称地贫），是我国南方常见的遗传性溶血性疾病，该病系遗传的珠蛋白基因缺失或突变，使血红蛋白中一种或一种以上珠蛋白链合成缺如或不足所致。广东省统计，在70338人群中，α-地贫杂合子为7.3%[12],它除了有轻度贫血，或比较容易疲劳外，一般无明显症状，但当他们的配偶也为同一种类型的地贫杂合子时，就有可能出现由于基因缺失导致妊娠晚期死胎或新生儿死亡。β-地贫为单基因隐性遗传病，146994人中β-地贫杂合子为1.83%--3.36%[12]，若父母均为轻型地贫携带者时，可育出重型β-地贫患儿。重型β-地贫患儿，长期靠输血为生，到一定年龄也会死亡。7基因诊断虽能明确诊断，但耗时长，费用高，一般基层单位难以做到。若能用简单，快速，方便，较准确的方法，在婚前、孕前检查中筛查出地贫杂合子携带者，则尽早对婚育青年进行优生指导，制定产前诊断的措施，避免重型地贫患儿的出生。小细胞低色素贫血的分类指标（MCV，MCH，MCHC），RDW，RBC脆性，血红蛋白电泳这几种方法对地中海贫血贫血敏感性与特异性不同，因此对它们的测定值进行分析对比，以评价它们在地中海贫血诊断过程的不足及其临床价值。由于缺铁性贫血与地贫均属小细胞贫血，故引入RDW作比较，并且可探讨是否可优于血清铁蛋白作为缺铁性贫血初筛试验的指标。

8对象与方法一、对象

共160例，其中正常对照30例，为健康体检者，血常规及血清铁蛋白均正常的人群，用基因诊断确诊α地中海贫血患者60例，β地中海贫血患者40例，用血清铁蛋白确诊缺铁性贫血患者30例。9

二、方法与诊断指标1．MCV，MCH，MCHC，RDW测定：取EDTA-K2抗凝静脉血2ML，采用美国COULTERMICRODIFF型全自动血细胞计数仪进行测定。每日用该公司提供的室内血细胞全血质控物进行质控。正常参考值MCV82—94fl,MCH26—32pg,MCHC318—345,RDW11.6—14.6%.2.红细胞脆性试验：采用中山医科大学遗传教研室的红细胞脆性一管定量法试剂，每批检测均设正常对照，选取血常规检测中MCV，MCH，MCHC均正常的全血标本作正常对照。正常值为溶血百分率>60%.103.血红蛋白电泳：取EDTA或肝素抗凝全血2ML，采用美国HELENALABORATORIES公司spife3000型全自动电泳仪进行血红蛋白电泳分析。正常参考值成人男女HBA22.5—3.5%,HbA>95%,HbF<2%,没有异常血红蛋白带出现。4．血清铁蛋白检测：取空腹不抗凝血3ML采用固相放免法，正常参考值成人男性15-200微克每升，成人女性12-150微克每升。5．地贫的基因诊断：提取外周血白细胞DNA后，а珠蛋白基因分析采用深圳益生堂生物试剂，应用单管四重PCR扩增后再行琼脂糖电泳检测。в珠蛋白基因分析采用深圳益生堂生物试剂，用膜反向杂交技术，采用24条探针，同时检测中国人群常见的8个位点和9个少见的位点突变（41-42，654，28，71-72，17，31，27/28点突变）。11SpifeAlkalineHemoglobin操作点样全自动血红蛋白分析仪固定染色12电泳琼脂片与扫描定量不同类型电泳区带正常电泳扫描图13β-地贫基因膜杂交结果判定●●●●●●●41-42N41-42M654N654M-28N-28M71-72N71-72M17N17MBENBEN31N31M43M-32M-29M-30M14-15MCAPIntM27/28MIVS1-1MIVSA-5M14三、数据检测分析：

1.

根据全国临床检验操作规程，血液学指标中的MCV临界值为82fl，RBC脆性的临界值为60,因此，表5，6中的MCV阳性数和敏感数均为<82fl,阴性数和不敏感数均为»82，RBC脆性阳性数和敏感数均为<60,阴性数和不敏感数均为»60。

2.

诊断检测评价指标：灵敏度=a/(a+c)*100%,特异度=d/(b+d)*100%,其中a为检测方法检测地贫患者的阳性数，b为检测方法正常组的阳性数，c为检测方法检测地贫患者的阴性数，d检测方法正常组的阴性数。3.卡方检验公式：X2=（AD-BC）2*（A+B+C+D）/（A+B）（C+D）（A+C）（B+D），若B+C<40时，需对其X2值进行效正，其效正公式为X2=(│B-C│-1)/B+C15

四、统计学方法采用独立样本T检验，比较同一种方法正常与异常的均值及有没有显著差异。采用X2（卡方）检验，比较两种方法灵敏度是否一致。

16结果1，

1.各种方法检测正常人，地贫（α1-地贫α杂合子，静止型α地贫，HbH病，β地贫），缺铁的均值与标准差，及各自与正常值比较有无显著性差异（P>0.05—无显著性差异，P<0.05—有显著性差异），见表1，2。2，

2.从表3，4，5可得RDW对缺铁性贫血的灵敏度为70%,MCV对地贫的诊断灵敏度为98%，特异度为93%，RBC脆性对地贫的灵敏度为77%，准确度为80%，HBA2对α地贫,β地贫的诊断灵敏度分别为83.3%,95%。3.从表6可根据卡方检验P〈0.05,认为MCV与RBC脆性对地贫诊断有差异，MCV灵敏度高于RBC脆性

17

表1各组血液学指标结果比较（x±s，P）

MCV

MCH

MCHC

RDW

HBA2

脆性nx±spx±spx±spx±spx±spx±sp正常人3088.1±2.529.4±1.3333±9.412±2.43.1±0.370±4.4

地贫10066.5±10.40.0024.2±170.10316±580.1213.0±2.10.123.8±0.70.0441.7±12.40.00

缺铁3069.6±7.50.0022..8±2.90.00321±48.50.2215.5±3.00.003.02±0.90.6263±7.60.0718表2不同类型а地贫及в地贫的血液学指标及比较

MCV(fl)

MCH(pg)

MCHC

HBA2nx±spx±spx±spx±sp正常人3088.1±2.529.4±1.3333±9.43.1±0.3

α1-地贫4474.4±8.20.0024.3±30.00322.2±14.90.012.15±0.690.04α杂合子静止型α1074.4±8.20.0024.32±3.10.00328.6±21.90.52.68±0.170.06地贫HbH病664±4.70.0020.6±2.80.00321±5.650.001.19±0.490.00

β地贫4064.4±5.90.0021.1±2.10.00328±14.10.195.1±1.30.00

19表3RDW单项检测地贫与缺铁的结果

组别RDW>14.611.6<RDW<14.6合计地中海贫血2377100缺铁性贫血21930

20表4HBA2单项检测地贫的结果

组别<2.52.5-3.5>3.5 合计正常对照组 126 330α-地中海贫血50 10 060β-地中海贫血023840

21表5MCV﹑RBC脆性单项检测地贫的结果

MCV

RBC脆性

灵敏度

特异度

组别 总例数阳性数阴性数阳性数阴性数MCV脆性MCV脆性地贫组10098（a）2(c)77(a)23(c)正常组302（b）28(d)8(b)24(d)98%77%93%80%

22表6MCV﹑RBC脆性对100例地贫的各自诊断价值

RBC脆性

MCV+-合计х2P+77（A）21(B)98-0(C)2(D)2合计7723100190.00

23讨论小细胞低色素贫血是由于珠蛋白合成障碍（血红蛋白病）或缺铁不足引起血红蛋白合成障碍（缺铁性贫血）所致，地贫与缺铁性贫血均属小细胞低色素贫血。在我国地贫主要分布于海南，广东，广西，湖南，湖北，江西，四川，贵州，云南等省，是现阶段我国南方地区常见的遗传性疾病之一。地贫是由于珠蛋白基因缺失或突变导致珠蛋白肽链合成障碍，α或β链失衡的遗传性血红蛋白病。除HB成分改变外，幼红细胞利用铁也发生障碍，呈小细胞低色素性,地贫MCV，MCH均降低，但RDW多为正常，这与同是小细胞低色素贫血的缺铁性贫血性不同。另外，由于多余的珠蛋白链沉附于胞膜内面，使红细胞变得僵硬，故红细胞对渗透溶解的抵抗性增加（即脆性降低）。血红蛋白电泳作进一步分析，若HBA2<2.5%可作α基因分析了解类型和HBA2>3.5%可作β基因分析了解类型。24近年来由于全自动血细胞分析仪的推广应用，国内外学者对MCV及RDW的认识不断加深，MCV,RDW用于IDA的筛查屡有文章报道[7]，1983年Bassmen[1,2]等报道MCV，RDW对不同病因所致的贫血可进行新的形态学分类，该法根据MCV，RDW二个参数实验结果将贫血分为小细胞均一性，小细胞不均一性等六项[6]。用此分类法分类：地贫属于小细胞均一性贫血（MCV↓/RDW正常），IDA属小细胞不均一性贫血（MCV↓/RDW↑）[3]。从表1可看出缺铁性贫血MCV↓（P<0.05）RDW↑(P<0.05),与正常对照比较有显著差异，而地贫RDW正常，与正常对照比较没有显著差异（P>0.05）。因此地贫可从外周血血液指标与缺铁性贫血鉴别。而RDW对缺铁的灵敏度为70%,可作为先于血清铁蛋白对缺铁的初筛指标，为病人省下不少的抽血麻烦。25从表1看MCH，MCHC，RDW，对地贫的筛选与正常比较没有显著性差异（P>0.05），敏感性不十分理想。而MCV，红细胞脆性测定值与正常比较有明显的显著性差异（P<0.01），HBA2的P值在0.01--0.05之间，也存在一定的差异。因此，结合MCV，RBC脆性与血红蛋白电泳的三项检查可减少漏诊，而且MCV对地贫的灵敏度为96%，特异度为93%，（见表5）所以MCV降低是地贫患者的特征之一。且目前国内外已较普遍应用MCV为首选筛查地贫携带者[4,9]，它的结果在血细胞分析时可一次获取，符合出筛的指标。

26分析表2结果中发现，а1地贫а杂合子从血液学检查MCV，MCH，MCHC结果看，均有不同程度的降低，且有显著性差异，静止型а地贫由于只有一个基因缺失，从外观上难以发现，通过MCV，MCH可以看出降低，但MCHC属于正常范围下限特异性不高，HBA2不太明显，与正常人比较没有显著性差异。HBH病由于缺失三个基因，贫血严重，MCV，MCH，MCHC均明显降低，HBA2<2.5%,可见快速带。这提示了基因受损程度与红细胞之间有对应的关系。同时也表明应用血红蛋白电泳检测对血红蛋白H病能进行有效的诊断，但对静止型а地贫不能进行有效诊断，符合血液研究[10]。在в地贫中，电泳区带明显异常，HbA2>3.5%,MCV，MCH均降低有显著差异。从表4看出，HBA2对α地贫,β地贫的诊断灵敏度分别为83.3%,95%，β-地贫的诊断价值较高。

27RBC脆性试验操作简单且经济，考虑医院经济影响，在某些基层单位缺乏血细胞分析仪的情况下不失为一种筛查方法。然而，从表5可看出RBC脆性对地贫的灵敏度为77%，特异度为80%，低于MCV对地贫的灵敏度与特异度，通过表6卡方检验可显著地发现MCV的诊断价值优于RBC脆性（卡方检验得P〈0.001〉,且在贫血严重的标本由于溶血产生的红细胞碎片或网织红细胞增加[8]，或标本不新鲜影响RBC脆性的结果，且是手工操作，易产生假阴性>60，使一部分地贫携带者没被检查出来，会导致地贫患儿的出生造成严重的后果，因此建议在婚检中取消RBC脆性。28从上面表1，2可看出过去人们一直把MCV，MCH，MCHC三项指数作为贫血类型的分类（大细胞贫血，正细胞贫血，小细胞贫血），但实践证明MCHC的意义不大，不能全面反映红细胞的病理变化。也有文章报道MCV，血红蛋白电泳，红细胞脆性联合检测地贫[11]，但从表3，4，5，6可看出MCV，HBA2各自对地贫的灵敏度颇高，单独作为对地贫的诊断有一定的价值。而在小细胞低色素贫血中，缺铁性贫血RDW一般升高，有助于缺铁的快速筛选及与地贫的比较。血清铁蛋白是早期缺铁性贫血实验诊断的金指标，但再抽血，需要放免仪器或生化仪器，许多基层无法开展。所以用RDW是一个廉价，快速而又灵敏度较高的指标，应在基层给予推广。因此临床医