宫颈局部微环境中il-12、il-4、ifn-浓度变化与宫颈高危型人乳头瘤病毒感染的关系

宫颈局部微环境中il-12、il-4、ifn-浓度变化与宫颈高危型人乳头瘤病毒感染的关系

癌症是女性最常见的生殖肿瘤，其发病率低于乳腺癌。这是世界上第二次女性死亡。自从Zur等［2］在1976年提出HPV可能是宫颈癌发生的关键因素,HPV与宫颈癌的关系就成为了肿瘤研究热点。目前,研究认为HPV持续性感染是宫颈癌发生最主要的因素［3］,不同的HPV型感染率也不尽相同,其中HPV16感染率最高,HPV18次之,而在中国特别是广西地区HPV58型检出率明显增高［4，5］。HR-HPV持续性感染,造成宫颈微环境中的免疫炎症因子,如:IL-12、IL-4、IFN-γ等发生改变,即辅助性T细胞(helperTcell,Th)1型细胞因子向Th2型改变,特别是在宫颈癌患者Thl型反应模式处于弱势状态,Th2型反应模式处于优势状态,Thl/Th2平衡失调,Thl/Th2平衡向Th2方向漂移［6］。可见这些免疫因子在肿瘤免疫应答中起到了调节作用,并且免疫因子的浓度改变,有助于HR-HPV逃避细胞免疫,发生免疫逃避机制［7］。本研究将采用ELISA对宫颈灌洗液IL-12、IL-4、IFN-γ进行检测,以探讨它们的浓度改变对宫颈病变发生发展的影响以及在不同HPV型中变化程度的改变。1患者年龄及测定1.1研究对象收集2012年7月至2013年6月在广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科住院并进行了HPVDNA分型检测的患者宫颈灌洗液共180例。根据患者组织病理结果将宫颈灌洗液分组为:1HPV(-)的非宫颈病变组25例,2HPV(-)的宫颈炎组24例,3HPV16/18/58(+)的实验组131例。其中试验组包括31例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及100例宫颈癌患者,研究对象的年龄为23~77岁,平均(47.57±0.65)岁。1.2试剂、仪器1ELISA试剂盒(humanIL-12、IL-4、IFN-γELISAkit)购于深圳欣博盛;2酶标检测仪(型号:MULTISKANMK3,购于美国Thermo公司);3低温高速离心机(购于美国Thermo公司)。1.3方法1.3.1标本采集1宫颈灌洗液:对入选患者暴露宫颈口,用5mL灭菌生理盐水冲洗宫颈口及宫颈表面,于后穹隆吸出灌洗液4mL,混匀后分装入1.5mL无菌EP管中,3000r/min,4℃离心5min。取上清分装后-80℃保存备用,标本采集均经研究对象同意。1.3.2免疫炎症因子的检测采用ELISA双抗夹心法检测上清中的IL-12、IL-4、IFN-γ因子,按照说明书步骤进行操作,在酶标仪上读取各个孔相对应的OD450值。结果判读为:每个标准品和标本的OD值应减去空白孔的OD值;以不同浓度的标准品所对应的OD450值做纵坐标,以标准品的浓度做横坐标,用软件绘制标准曲线,求出相应的位置样本中的细胞因子的含量。2cin及妊娠合并用药后各免疫因子的变化2.13组患者宫颈灌洗液中免疫炎症因子水平的测定结果显示:3组中IL-12、IL-4、IFN-γ浓度均有差异(P﹤0.05),其中在CIN及癌变组中IL-12、IFN-γ的浓度明显低于非宫颈病变组及宫颈炎组的含量(P﹤0.05),且非宫颈病变组的浓度低于宫颈炎组的浓度(P﹤0.05);IL-4在CIN及宫颈癌组中的浓度明显高于非宫颈病变组及宫颈炎组,但非宫颈病变组与宫颈炎组中的浓度差异无统计学意义(P﹥0.05)。详见表1。2.2CIN及癌变组中HPV16/18/58(+)不同型别的患者宫颈灌洗液中细胞因子水平的测定各个免疫因子在试验组中HPV16(+)组、HPV18(+)组、HPV58(+)组之间差异有统计学意义(P﹤0.05),其中IL-4在HPV16(+)组中的浓度明显高于HPV18(+)组、HPV58(+)组(P﹤0.05);IL-12、IFN-γ在HPV16(+)组中的浓度明显低于HPV18(+)组、HPV58(+)组(P﹤0.05);而各指标在HPV18(+)组、HPV58(+)组中浓度差异无统计学意义(P>0.05)。详见表2。3不同典型的pv感染的机制以及相应的免疫因子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,好发于子宫颈鳞状上皮或腺上皮的一种肿瘤［8］。而宫颈癌的病因一直为国内外专家所研究的热点,目前认为HPV的持续感染是引起宫颈癌及CIN的主要原因［9，10］。人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属,是球形DNA病毒,能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。HPV持续性的感染宫颈组织后,存在免疫逃避的现象即逃避适应性免疫应答的清除病毒的作用,从而出现Th1向Th2漂移现象［11］,有利于病毒的感染并幸存下来。有研究显示,随着宫颈病变程度的增加,这种漂移越明显［12］。本研究表明,由于试验组中均为HPV16/18/58(+)的CIN及宫颈癌患者的宫颈灌洗液,HPV造成Th1/Th2比例失调,在HPV(-)的非宫颈病变组、宫颈炎组中,IL-12、IFN-γ的浓度明显高于试验组(P﹤0.05),IL-4的浓度明显低于试验组(P﹤0.05)。其原因可能是HPV的持续感染,影响了宫颈局部的免疫调节功能,造成免疫功能下降,以IL-12、IFN-γ为代表的Th1型细胞免疫应答向IL-4为代表的Th2型细胞应答漂移,IL-4可以促进癌变组织产生IL-10,后者可以降低提成细胞的表达,维持II型淋巴细胞在肿瘤组织中的浸润,帮助肿瘤细胞的免疫逃避［14］。CIN及宫颈癌组织中可能通过上述机制,进一步促进了肿瘤的进展。Lee等［15］研究发现HPV感染的不同程度病变的宫颈组织,随着宫颈病变程度的增加,Th1型细胞因子也随之出现明显的下降。在HPV(-)的非病变宫颈组中IL-12、IFN-γ浓度较HPV(-)宫颈炎组中明显增高(P﹤0.05),IL-4的表达没有明显差异(P>0.05),可能由HPV未感染,宫颈炎组中以Th1细胞介导的免疫应答为主,IL-12、IFN-γ浓度升高,激活巨噬细胞杀灭病原体,起到抗肿瘤作用。3.2不同HPV型的宫颈微环境中免疫因子的变化全球范围内,不同型别的HPV的感染率不同。已经证实,HPV16是最常见的致病亚型,约半数以上的宫颈癌是由其引起［16］。在中国主要以HPV16型为主,居第1位,HPV18居第2位,HPV58和HPV52分别居第3和第4位［17］。本研究显示:HPV16(+)组中IL-4浓度明显高于HPV18(+)组、HPV58(+)组(P﹤0.05),而IL-12、IFN-γ明显低于HPV18(+)组、HPV58(+)组(P﹤0.05)。这3种细胞因子的浓度变化在HPV18(+)组、HPV58(+)组之间差异无统计学意义(P>0.05)。由于HPV16感染的宫颈灌洗液中IL-4浓度明显升高,IL-12、IFN-γ浓度明显降低,导致Th1/Th2细胞比例失衡更加明显,机体抗肿瘤免疫能力下降,促进宫颈癌变的发生与发展［18］,这也许是造成HPV16感染率较其他HPV型感染率高原因之一。以往的试验,大部分检测的是患者外周血中的免疫因子浓度的变化,本次研究直接检测宫颈局部微环境中的免疫因子的变化,更能直观了解宫颈局部免疫环境的改变。并且由于HPV感染与宫颈癌的发生密切相关,所以对患者进行常规HPV分型检测及宫颈灌洗液中Th1/Th2检测是十分必要的。有报道显示运用重组IL-12腺病毒作为HPV16疫苗的佐剂,可将肿瘤体积缩小,增加疫苗抗肿瘤的时间［19］。所以我们通过宫颈微环境中免疫因子浓度差别,对疗效的判断,预后的估计,以及在HPV疫苗中使用Th1型细胞因子为佐剂的研究,值得在今后的试验研究中进一步深入了解。1.4统计学方法所有数据采用Excel与SPSS16.0软件包进行统计学处理,计量资料采用均值±标准差(ue003±s)表示,应用方差分析、SNK-q检验对数据进行分析,P﹤0.05为差异有统计学意义。3.1宫颈不同病变微环境中免疫因子的变化HPV持续感染导致Th1向Th2漂移会造成相应的细胞免疫因子浓度发生改变。IL-12、IFN-γ