肺康方对金黄地鼠肺动脉高压的影响

肺康方对金黄地鼠肺动脉高压的影响

本实验在阜外医院病理室张家宝的基础上，结合吸烟，建立了肺压和动脉高压模型。我们以copd的高压模拟了肺压，并研究了肺康乃馨对金黄地鼠肺压和动脉高压的预防和治疗。1实验动物动物实验动物:金黄地鼠购自天坛生物制品研究所,等级为Ⅰ级,年龄为2月,体重在95g~100g的健康雌性动物。实验药物:肺康方煎剂:生黄芪30g,山茱萸15g,丹参12g,葶苈子15g,黛蛤散12g(包),水蛭3g,白前10g。试剂:弹性蛋白酶(Elastase,德国勃林格公司生产,岳泰公司提供)、大前门烟(中国上海卷烟厂生产)。2学习方法2.1血清弹性蛋白酶液制备联合用药组40只动物随机分为4组,每组10只,造模周期为40d。正常组:常规饲养10d后气管内一次性注入生理盐水0.3ml,之后每日2次生理盐水灌胃,每次1ml,不烟熏。模型组:适应环境2d后予烟熏,每次1支,每日连续烟熏6h,8d后造模,参照张旭晨法,将金黄地鼠用10%水合氯醛按0.3ml/100g腹腔注射麻醉后,经气管将弹性蛋白酶液(40u/100g)注入肺内。之后仍每日烟熏6h。每天给予生理盐水1ml灌胃。每日2次。中药组:造模方法与模型组同,气管内注入弹性蛋白酶后,予肺康煎剂每次1ml(含生药1g/ml),每日灌胃2次。西药组:造模方法同模型组,每天予心痛定0.3mg/1ml/次灌胃,每日2次。2.2测试项目和方法气管内注入弹性蛋白酶30d后进行血流动力学测定和标本取材,具体操作如下。2.2.1血流动力学指标将金黄地鼠用12%乌拉坦(1ml/100g)腹腔麻醉,参照孙波法用右心导管测量血流动力学指标。将聚乙烯动脉插管经颈外静脉向近心端插入,插管另一端经换能器连接于生理记录仪上,依次经过上腔静脉、右心房、右心室,进入肺动脉,分别描记肺动脉收缩压、平均压和右心室收缩压。2.2.2固定两肺测量完血流动力学指标后,迅速经正中胸骨切除术暴露心肺,气管插管,用10%多聚甲醛经气管插管灌注两肺,直至两肺膨胀,肺胸膜面光滑后结扎气管,取出完整心肺,游离心脏,将两肺浸入10%多聚甲醛液中固定2周。参照Fulton等方法将动物心脏分离后放血,剪去心房,分离右心室(RV),游离右室壁、左室壁+室间隔(LV+S),用电子天平对右心室壁(RV)和左室壁+室间隔(LV+S)分别称重,计算右室肥大指数(RV/LV+S)。2.2.3肺小动脉盗血指标取固定的左肺组织,在同一水平取材,常规脱水,石蜡包埋后,切5μm切片,HE和弹力纤维染色,光镜下观察肺组织。切片用图像分析仪(美国TN8502)测量与呼吸性支气管及肺泡管伴行的肺小动脉外径(TD)、管壁厚度(WD)、管壁面积(WA)、管总面积(TA),计算WD/TD(%)WA/TA(%)。在光镜下计数各组肺血管环肌型动脉(MA)、部分肌型动脉(PMA)、无肌型动脉(NMA)的百分比,进行对比分析。2.3数差异显著性检验本实验统计数据均为计量资料,多组间均数差异显著性检验用单因素方差分析(OneWayANOVA),全部数据输入计算机,使用SPSS10.0统计软件。3结果3.1造模成功与否模型组与正常组比较,SPAP、MPAP、RVSP均显著升高,表明模型组肺动脉高压造模成功。而中药组和西药组SPAP、MPAP、RVSP值比病理组低,且差异显著,表明肺康方和心痛定都有降低肺动脉高压的作用(见表1)。3.2两组右室基肥比较右室肥大指数(RVHI)模型组和西药组与正常组比较有显著性差异(*P<0.01),表明两组都存在右室肥厚,而中药组和西药组与模型组比较显著降低,说明两组都有抑制右室肥厚的作用(见表2)。3.3肌型动脉的特点缺氧作用可使泡内动脉中膜平滑肌细胞增生肥大,细胞外基质增多,导致中膜增厚。由于动脉的力学性质主要决定于中膜,因此中膜肥厚严重减少血管的顺应性,增加了血管阻力,肌型动脉属阻力型血管段,随着肌型动脉数量的增加,无肌型动脉的减少,肺动脉的阻力将不断增大。实验显示,光镜下计数肌型动脉、部分肌型动脉和无肌型动脉结果提示模型组和西药组MA比正常组显著增多,而NMA比正常组显著减少,说明两组均存在无肌型动脉肌型化,中药组与模型组、西药组相比环肌型动脉显著减少,无肌型动脉显著增多,更接近正常组,表明中药可阻抑肺无肌型动脉肌化(见表3)。3.4肺血管重建总wa/ta%模型组管壁厚度/血管外径WD/TD(%)、管壁面积/血管总面积WA/TA(%)比正常组显著增高,说明模型组存在肺小动脉管壁增厚,肺血管重建,而中药组比模型组、西药组显著降低,接近正常组,表明中药组可阻抑肺血管重建(见表4)。3.5呼吸性细呼吸道结构病理切片显示,正常组与肺泡管、肺泡囊、肺泡壁结构完整,肺泡上皮结构正常,肺泡膈完整。与呼吸性细支气管伴行的肺小动脉结构清晰,管腔通畅。模型组肺泡融合,形成肺大泡,肺泡膈断裂,肺泡塌陷,呼吸性细支气管伴行的肺小动脉管壁显著增厚,结构模糊,管腔狭窄。中药组呼吸性细支气管结构较完整,肺泡管无明显扩张,肺泡囊结构基本正常,未见肺泡膈断裂,但可见局灶性肺气肿、肺泡膈增宽现象,与呼吸性细支气管伴行的肺小动脉管壁轻度增厚,管腔通畅。西药组表现为肺泡管消失,形成肺大泡,呼吸性细支气管扩张,管壁结构不完整,上皮脱落,伴随呼吸性细支气管的小动脉管壁增厚。4肺康方对金黄地鼠肺动脉高压的作用中医学认为,COPD与肺、脾、肾关系密切。武维屏教授依据多年经验,认为该病从病机而言,虚、痰、瘀为关键,治法补虚、化痰、行瘀、理肺四法多用,依据此法创制出治疗具有气虚血瘀痰阻证候的COPD有效方剂肺康方。通过研究表明,该方能抗炎,提高机体免疫功能,改善血液流变学,改善肺功能和机体缺氧状态。本实验在既往工作的基础上,以目前比较公认的降低肺动脉高压的药物心痛定为对比,从肺动脉高压的角度研究肺康方对金黄地鼠肺气肿合并肺动脉高压的作用。结果表明,肺康方对金黄地鼠肺气肿并肺动