疏肝饮煎剂对肝郁脾虚型肠易激综合征大鼠的治疗作用及对mo、cck的影响

疏肝饮煎剂对肝郁脾虚型肠易激综合征大鼠的治疗作用及对mo、cck的影响

肠易激综合征（ibs）是一种肠动力学和内脏感觉异常的胃肠功能疾病。这是一组临床表现为排便习惯改变（腹泻和便秘）、粪便特性异常（稀疏便、粘膜便）、腹胀和腹痛的临床表现的综合征，其症状可能继续存在或延迟。目前认为它是一种生物-心理-社会病证,发病与内脏感觉过敏、脑-肠轴的改变、胃肠动力学的异常和精神行为的异常有关。目前治疗缺乏确切而有效的办法。中医认为腹泻型IBS发病和肝郁脾虚、脾胃虚弱有关,疏肝健脾的中药复方疏肝饮煎剂在临床上治疗本病已取得较好疗效。本实验以血浆和结肠黏膜中的胃动素(MOT)、胆囊收缩素(CCK)为主要测定指标,以得舒特为阳性对照药,观察复方疏肝饮煎剂对腹泻型IBS模型大鼠的作用。1材料和方法1.1动物和食物Wistar大鼠48只,清洁级,雄性,体重(200±20)g。所有动物在有恒定温度、湿度及昼夜光线的房间里饲养,自由进食、进水。1.2抑肽酶、agtrin肝素钠注射液、25%乌拉坦(氨基甲酸乙酯)、甲醛溶液、冰醋酸,均为上海化学试剂一厂生产(批号分别为:000830,c20010110,990812,T20020710);抑肽酶(Aprotinin),美国Amresco(批号:3212B60);得舒特(匹维溴安),法国苏威制药(批号:0020)。胆囊收缩素试剂盒由第二军医大学神经生物学教研室提供,胃动素试剂盒由中国人民解放军海军放免技术中心提供。疏肝饮煎剂:由防风、白芍药、白术、陈皮、柴胡等药物组成,按一定比例制成生药浓度分别为1.50、0.75、0.45g/ml,备用;番泻叶在沸水中浸泡15min后双层纱布过滤,滤液减压浓缩成生药含量为0.6g/ml,备用。1.3实验方法1.3.1灌胃量ld50大鼠随机分组为正常组、模型组、西药组,以及大、中、小剂量中药组,每组8只。正常组:正常喂食,自由饮水,不予任何处理;模型组:以蒸馏水灌胃(10ml/kg);西药组:以1.5mg/ml的得舒特灌胃(15mg/kg);大剂中药组:以1.50g/ml的疏肝饮煎剂灌胃(15g/kg);中剂中药组:以0.75g/ml的疏肝饮煎剂灌胃(7.5g/kg);小剂中药组:以0.45g/ml的疏肝饮煎剂灌胃(4.5g/kg)。1.3.2棉绳束缚大鼠的或排粪IBS动物模型为脾虚加局部束缚刺激。所有动物单只单笼饲养1周,开始实验。正常组不以任何处理,其余各组动物以番泻叶水煎剂(浓度为0.6g/ml,按15ml/Kg)灌胃,每日1次,持续两周。从第二周起,给以束缚刺激。用粗制棉绳束缚大鼠的双后肢,影响其正常行动,但不完全限制自由,被束大鼠可以拖后肢缓慢爬行。束缚持续1周,每天5h。束缚的最后两天,束缚后将大张滤纸垫于笼下,计算5h内的排便数以及粪便污染滤纸的直径。药物干预各组在第二周开始用药,持续1周,束缚刺激在给药后进行。1.4指标和方法的检测检测大鼠粪便的稀便级,血浆中MOT、CCK的含量,结肠黏膜中MOT、CCK的含量,降结肠组织形态学检测。1.4.1本例第4段1.4.2动脉血与抑肽酶时间的测定大鼠以25%乌拉坦(0.5ml/100g体重)腹腔注射麻醉后,从腹主动脉中采集动脉血5ml,加入预冷的、加有1%肝素100μl(每毫升动脉血20μl)和抑肽酶2500U(每毫升动脉血500U)的塑料试管中,充分混匀后,立即在4℃以3000r/min离心15min。抽取上清液-70℃低温保存待测。1.4.3移动法提取距肛门5cm处向上剪取降结肠一段,长约5cm,沿肠系膜剪开,4℃0.9%NaCl溶液中漂洗干净,再置于沸腾的0.9%NaCl溶液中煮5min。刮取适量肠黏膜,称重后将黏膜置于匀浆器内,并加入冰醋酸1ml充分匀浆,后转入试管中,室温下(25℃)静置2h后加入氢氧化钠1ml,中和醋酸。在4℃以3000r/min离心15min。抽取上清液-70℃低温保存待测。1.4.4大鼠结肠黏膜组织病理学检测每组随机选取2只大鼠,取其降结肠10%甲醛溶液固定,常规脱水,石蜡包埋,切片,HE染色,光学显微镜下观察大鼠结肠黏膜组织形态学的变化。1.5比较owolsyndr机构间差异的显著性实验结果以表示。用t检验IrritableBowelSyndrome比较两组数据间差异的显著性,one-wayANOVA检验比较多组数据间差异的显著性,P<0.05表示具有显著性差异。2结果2.1药物治疗后血浆中mot、cck表达变化实验过程中,共死亡4只大鼠,分别为西药组2只、中剂量中药组1只、小剂量中药组1只,其余存活状况良好。结果表明,番泻叶灌服联合束缚刺激可明显增加大鼠的稀便级,与正常组相比有显著性差异(P<0.01),表明该法可以制成大鼠腹泻模型。经得舒特治疗后,稀便级有明显下降,与模型组相比有显著性差异(P<0.05)。大剂量和中剂量疏肝饮药物治疗后稀便级得到改善(P<0.05),小剂量的治疗效果不明显。大剂量和中剂量的疏肝饮煎剂对稀便级的影响与西药组相似(P>0.05)(表2)。2.2各组大鼠血浆中MOT、CCK含量的变化经过束缚-制动刺激联合番泻叶灌胃后,大鼠动脉血血浆中MOT的含量几乎没有变化,与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05);药物治疗后各组对MOT含量变化的影响亦很小,正常、模型和各用药组间没有统计学差异(P>0.05)。造模后大鼠血浆中CCK的含量大幅度降低,与正常组相比有显著性差异(P<0.05);经药物治疗一段时间后CCK含量较模型组明显降低(P<0.05),疏肝饮煎剂各剂量间CCK含量的变化没有显著性差异,CCK含量降低的程度与疏肝饮用药剂量间不存在明显的依赖关系(表3)。2.3药物治疗对mot含量不高干预的疗效判定经过束缚-制动刺激联合番泻叶灌胃后,大鼠结肠黏膜中MOT的含量亦几乎没有变化,药物治疗对MOT含量无明显干预作用。而结肠黏膜中CCK模型组的含量较正常组明显升高(P<0.05);经得舒特和疏肝饮治疗后CCK在黏膜中的含量下降,与正常组比较无显著性差异(P>0.05),说明药物有明显的疗效(表4)。2.4间质及病理变化正常组结肠黏膜结构完好,上皮无剥脱,固有腺体无异常,间质无充血、水肿、炎细胞浸润等;模型组与正常组比较,除个别动物间质轻微充血、炎细胞浸润略明显外,其余无特殊病理变化;各用药组肠黏膜结构基本完好,未见明显充血水肿。3苦微寒—讨论临床上IBS的发生和心理精神的异常关系密切,异常精神生活可能通过中枢神经系统活动的改变导致胃肠道等由自主神经控制的器官的功能紊乱,出现焦虑、强迫、抑郁等各种临床症状。在中医学理论中肝脾关系密切,肝的疏泄功能对脾胃的升清降浊之间的平衡有重要意义。一旦肝木有病,则“肝病必犯土,是侮其所胜也。克脾则腹胀,便或溏或不爽……木郁不达,风木冲击而贼脾土,则痛于脐下”(《临证指南医案》)。《医方考》认为:“泻责之于脾,痛责之于肝,肝责之于实,脾责之于虚,脾虚肝实,故令痛泻。”腹泻型IBS最主要的症状是泻前腹痛、泻后痛减,基本病机在于肝郁脾虚。由此我们采用以番泻叶灌胃建立大鼠脾虚模型,结合束缚刺激而成的IBS动物模型以泄泻为主要症状,且伴有烦躁、抑郁、焦虑等变化,与腹泄型IBS临床症状相似。本实验使用的疏肝饮煎剂是以疏肝健脾为法,在古代名方痛泻要方的基础上加一味柴胡按一定比例组成。历代医家均以痛泻要方治疗肠鸣腹痛、泻后痛减的痛泻之症。中医临床上治疗肝郁脾虚型IBS多选本方。其中白术有“湿去而泻止,泻止而脾健,脾健而胃亦健”之功。白芍药酸苦微寒,平肝柔肝缓急止痛,“其功全在平肝,肝平则不克脾胃,而脏腑各安……泻痢自去,痢痛自安矣”。防风辛温,散肝醒脾,且有胜湿之功。陈皮辛温,理气健脾燥湿,尚能行气止痛。在上述药物的基础上,加入苦微寒之柴胡一味,功在疏肝解郁和中。胃肠运动主要受肠神经系统的支配及体液因素的影响。胃肠激素是调节胃肠运动的重要激素,它通过干扰胃肠道的动力与分泌吸收功能,以及对中枢神经系统的作用而对IBS产生一定的影响。目前认为与IBS关系较为密切的胃肠激素有MOT、CCK、血管活性肠肽(VIP)、生长抑素(SS)、P物质(SP)、五羟色胺(5-HT)等。产生MOT的细胞成为M0细胞,主要存在于十二指肠和近端空肠黏膜隐窝,以及消化道组织的黏膜下层和肌层的神经组织中。它的生理功能是调节胃肠、胆囊、食管的运动,促进胃肠运动和胃肠道对水、电解质的运输,主要通过直接作用于消化道平滑肌细胞上的受体,导致细胞内Ca2+浓度增高进而引起强烈的刺激上消化道的机械运动和电活动的作用而实现。MOT和IBS的关系各家说法不一,这可能与胃动素分泌影响因素的众多以及空腹时血中含量呈周期性变化有关。实验结果表明,血浆中MOT的含量在正常大鼠和应激大鼠之间并无明显异常,但在降结肠黏膜组织中,正常组和各用药组都可以测到MOT的存在,但各组间没有显著性差异。本实验的各组动物中血浆和结肠黏膜中MOT的变化没有很好的规律性,可能是与MOT的周期性变化和影响因素众多有关。CCK以多种激素形式存在于血浆和胃肠组织中,它的主要作用是促使胆囊和胃肠平滑肌兴奋收缩。国内学者对CCK的具体作用机制研究不多,国外有报道称IBS患者空腹时血浆中CCK水平明显高于正常人,而局部结肠组织中含量几乎为零。我们的实验结果表明,模型组CCK在血浆中含量较正常组为低(P<0.05)。同时结肠黏膜组织中各组CCK含量均不为零,模型组反而较正常组为高,两者之间有显著性差异。血浆中和肠道黏膜组织中CCK的含量变化的不一致性,可能是由于两者产生来源的不同所致。肠道黏膜中含有CCK的释放细胞,对于应激等外来刺激可以直接产生反馈,使大鼠肠道敏感性增加,CCK分泌增多,这种反馈性增多主要在局部组织起作用,所以血浆中含量的影响相对较小。得舒特作用是否与调整胃肠激素的水平有关尚无完整报道,本实验中得舒特可以改善IBS患者某些激素水平升高的情况,尤其是结肠黏膜中的CCK的含量。疏肝饮可以降低结肠黏膜中CCK的含量,但大中小各剂量之间,没有呈现出很好的量