稳定转染Dicer基因对HELF细胞功能的影响的开题报告

稳定转染Dicer基因对HELF细胞功能的影响的开题报告题目：稳定转染Dicer基因对HELF细胞功能的影响一、研究背景与意义Dicer作为一种RNaseIII内切酶，在RNA干扰和microRNA（miRNA）通路中起着重要作用，其功能异常可能导致许多疾病的发生与发展。为了更好地研究Dicer在正常细胞中的功能以及其与不同疾病的关系，研究人员需要建立Dicer的高效稳定表达体系。本研究将采用稳定转染Dicer基因的方法，研究Dicer在HELF细胞中的功能特性及其对细胞的影响。该研究旨在揭示Dicer在细胞中的重要性质及其在多种疾病中的作用机制，为相关疾病的治疗和预防提供新的理论和实验依据。二、研究目的和内容1.建立Dicer基因稳定表达的HELF细胞株。2.用Westernblot检测Dicer基因稳定表达HELF细胞中Dicer的表达水平。3.对比稳定转染Dicer基因的HELF细胞株与对照组细胞株的增殖情况，并绘制细胞生长曲线。4.检测Dicer基因稳定表达HELF细胞株的miRNA水平变化，分析Dicer的表达与细胞miRNA表达水平的相关性。5.采用基因组学、转录组学和蛋白质组学等技术手段，探究Dicer基因稳定表达HELF细胞株中不同信号通路的变化。三、研究方法1.通过LENTI-UNC系统，用质粒载体pLenti-C-Myc-DDK-Dicer(Cat.#RC217090,OriGene)构建Dicer基因稳定表达系统。2.用Westernblot检测Dicer基因稳定表达HELF细胞中Dicer的表达水平，并对比对照组细胞株。3.选取稳定转染Dicer基因的HELF细胞株和对照组细胞株，采用MTT法检测细胞增殖情况并绘制生长曲线。4.提取稳定转染Dicer基因的HELF细胞株和对照组细胞株中的总RNA，并用qRT-PCR技术检测miRNA的表达水平。5.采用基因组学、转录组学和蛋白质组学等技术手段，探究Dicer基因稳定表达HELF细胞株中相关信号通路的变化。四、进度与时间安排1.第一阶段（1月-3月）：实验方案设计，构建Dicer基因稳定表达体系。2.第二阶段（4月-6月）：转染细胞并筛选肿瘤细胞株，Westernblot检测Dicer基因表达水平。3.第三阶段（7月-9月）：检测稳定转染Dicer基因的HELF细胞的增殖情况并绘制增殖曲线。4.第四阶段（10月-12月）：检测Dicer基因稳定表达HELF细胞株与对照组细胞株中miRNA水平的变化。5.第五阶段（1月-3月）：整理数据，写作毕业论文，撰写实验材料和方法部分。五、预期成果1.成功建立稳定转染Dicer基因的HELF细胞株，证实表达Dicer基因对细胞的生长和增殖具有一定的影响。2.检测Dicer基因稳定表达HELF细胞株与对照组细胞株中的miRNA水平，分析Dicer在miRNA通路中的作用机制。3.分析Dicer与不同信号通路的关系，挖掘miRNA及Dicer在多种疾病中的作用机制。4.撰写毕业论文并得到所在学院的学位授予。六、参考文献1.Gu,S.,Jin,L.,Zhang,F.,Sarnow,P.,&Kay,M.A.(2009).BiologicalbasisforrestrictionofmicroRNAtargetstothe3'untranslatedregioninmammalianmRNAs.NatStructMolBiol,16(2),144-150.2.Vazquez-Pianzola,P.,&Suter,B.(2012).Dicer-dependentandindependentArgonaute2ProteinInteractionNetworksinMammalianCells.MolCellProteomics,11(11),M111.01101.3.Chen,J.F.,&Wang,W.X.(2013).EmergingrolesofmicroRNAsinthepathogenesisofkidneydiseases.ChinMedJ(Engl),126(11),2144-2153.4.Chekulaeva,M.,&Filipowicz,W.(2009).MechanismsofmiRNA-mediatedpost-transcriptionalregulationinanimalcells.CurrOpinCellBiol,21(3),452-460.5.Kim,I.,Shin,J.H.,Jeong,S.,&Kim,S.J.(2011).MicroRNA-mediatedregulationofDiceranditsroleindif