浅谈开展血小板抗体检测项目的体会陈秉宇课件

2023/11/24浙江省人民医院输血科1浅谈开展血小板抗体

检测工程的体会陈秉宇浙江省人民医院输血科2023/11/24浙江省人民医院输血科2一血小板抗体的简介二开展血小板抗体检测的目的和意义三血小板抗体检测技术的简述四我院开展血小板抗体检测的简况五如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会六血小板抗体检测技术的应用拓展

六大方面2023/11/24浙江省人民医院输血科3一血小板抗体的简介〔一〕血小板抗体的内涵：〔二〕目前杭州省级医院开展情况：〔三〕三点思考：〔四〕我们的观点：2023/11/24浙江省人民医院输血科4一血小板抗体的简介〔一〕血小板抗体的内涵：1白细胞特异性和组织相容性抗体：1〕针对HLA-Ⅰ类抗原〔HLA-A、HLA-B抗原和少量HLA-C抗原〕的HLA-Ⅰ类抗体〔50-80%〕。2〕物价收费目录：编码—260000016；工程名称—白细胞特异性和组织相容性抗体检测；价格—90元/次。3〕现医保限定支付范围：无限定支付范围；甲乙分类—甲。2血小板特异性和组织相容性抗体：1〕针对血小板特异性抗原〔HPA抗原〕的HPA抗体〔17-25%〕。2〕物价收费目录：编码—260000017；工程名称—血小板特异性和组织相容性抗体检测；价格—90元/次。3〕现医保限定支付范围—限列入支付范围的器官移植；甲乙分类—甲。参考文件：?浙江省根本医疗保险医疗效劳工程名称?，浙江省劳动和社会保障厅，2005年版，第65页。?浙江省医疗效劳价格手册?〔修订版〕，浙江省物价局、浙江省卫生厅，2021年12月版，第44页。

2023/11/24浙江省人民医院输血科5一血小板抗体的简介〔二〕目前杭州省级医院开展情况：

1〕血小板抗体检测试剂注册时间：国家药监局，2021年4月3日。

2〕我院开展时间：2021年5月26日；关注和准备时间约10年。

3〕现在杭州，浙一医院、浙二医院、邵逸夫医院、浙江省中医院、浙江医院等相继开展。2023/11/24浙江省人民医院输血科6一血小板抗体的简介〔三〕三点思考：思考1：血小板特异性和组织相容性抗体：现医保限定支付范围—限列入支付范围的器官移植，合理？思考2：有关血型与配血的收费和医保限定支付范围，据了解没有征求医院输血科专家的意见，合理？〔据实地了解，浙江省血型与配血的收费是上海的1/3，江西1/3，且远低于西部地区，合理？〕思考3：社会在进步，医学在开展，管理部门和管理者的理念是否应该更新和创新？以适应社会和医学开展的需要。2023/11/24浙江省人民医院输血科7一血小板抗体的简介〔四〕我们的观点：1患者和医院的输血平安重于泰山！2输注血小板是临床治疗的重要手段，今后必将有更大开展。3大行何不做小微？2023/11/24浙江省人民医院输血科8二开展血小板抗体检测的目的和意义关于血小板抗体检测工程的说明〔2021-11-21〕院医保办：因血小板抗体引起的临床问题和疾病已引起全社会的严重关注，成为临床亟待解决的问题。血小板抗体检测〔或筛选〕包括白细胞特异性和组织相容性抗体和血小板特异性和组织相容性抗体。血小板抗体是引起临床非溶血性发热性输血反响的最主要原因，非溶血性发热性输血反响是临床很常见的输血不良反响，文献报道输注红细胞为2～6%，输注血小板为20～30%，屡次输血患者高达27％～63％，而非溶血性发热性输血反响与血小板抗体密切相关，是影响临床平安输血的严重因素。血小板抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热性输血反响非常有意义。2023/11/24浙江省人民医院输血科9二开展开展血小板抗体检测的目的和意义血小板抗体是临床引起免疫性血小板输注无效的最主要原因，文献报道20～80%屡次输血的患者出现免疫性血小板输注无效，血小板输注无效会导致昂贵的血液和医疗资源的极大浪费，同时给患者造成较大的经济损失和身体损害。血小板抗体的检测是临床诊断和治疗与血小板抗体有关的疾病的重要依据。鉴于血小板抗体对临床的重要价值，为此该工程得到今年11月1日卫生厅质量检查组的充分肯定。目前我省兄弟医院已相继开展。输血科2021年11月21日2023/11/24浙江省人民医院输血科10三血小板抗体检测技术的简述〔一〕原理〔二〕试剂组成〔三〕实验前准备〔四〕操作2023/11/24浙江省人民医院输血科11三血小板抗体检测技术的简述

〔一〕原理1、基于固相红细胞粘附实验〔SPRCA〕原理。2、反响板中已包被抗血小板单克隆抗体，血小板悬液经离心洗涤后可在反响孔底部形成血小板单层。3、参加血清或血浆，在孔中经过孵育后，假设该血清或血浆中含有血小板抗体，那么该抗体与反响孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。4、参加抗人IgG及人IgG致敏红细胞〔指示红细胞〕，经离心后指示红细胞通过抗人IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反响为指示红细胞平铺在反响孔底部外表。而阴性反响为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反响孔底部中央。2023/11/24浙江省人民医院输血科12三血小板抗体检测技术的简述〔二〕试剂组成1低离子溶液〔〕2反响版：在参加枯燥剂的自封袋中密封保存；保存温度为2～8℃。325*浓缩洗涤液4抗人IgG5阳性对照6阴性对照7指示红细胞2023/11/24浙江省人民医院输血科13〔三〕实验前准备〔7〕1所有试剂平衡至室温。225*浓缩洗涤液：使用前用蒸馏水以1：24稀释成洗涤工作液。3血小板抗体筛检细胞：1〕为多人份O型健康者血小板，经冷冻枯燥制成。2〕使用前每支加生理盐水500μl，室温〔18～25℃〕静置5分钟3〕溶解后的浓度为100±20×109个/L4〕使用前应充分溶解和混匀5〕溶解后室温可保存24小时，但不可4℃保存4指示红细胞：1〕指示红细胞的外表已致敏人IgG抗体2〕使用前平衡至室温〔18～25℃〕3〕加样时应充分摇匀4〕假设指示红细胞出现溶血、细菌污染、过期那么不能使用5〕加样时没有充分摇匀或离心不充分，可导致假阳性结果三血小板抗体检测技术的简述2023/11/24浙江省人民医院输血科145制备血小板悬液：1〕抗体检测采用3人份等比例混合O型血小板悬液2〕机采血小板需用生理盐水进行5-10倍稀释后混合3〕血小板悬液浓度约为50～150×109个/L4〕当天采血8小时内EDTA或枸橼酸钠抗凝血经200g离心10分钟后，取上层2/3富血小板血浆(PRP)可直接使用5〕交叉配血直接采用供者血小板6〕血小板悬液应贮存于塑料容器中，室温可保存24小时，但不可4℃保存6待检样本：血清或血浆样本应新鲜，3000rpm离心5min以去除析出的纤维蛋白及其它有形成份，取上清进行检测。7翻开水浴箱，将湿盒平衡至37℃。〔三〕实验前准备〔7〕三血小板抗体检测技术的简述2023/11/24浙江省人民医院输血科15〔四〕操作1依据检测量取出反响板条，标记阳性对照、阴性对照及待检样品孔，未使用的板条应封好储存于配有枯燥剂的试剂盒中。2向反响孔中参加1滴〔50μl〕上述血小板悬液，轻摇反响板10秒钟，使反响孔中的保护剂充分溶解。3用平板离心机将反响板以50g〔650rpm〕离心5分钟，使血小板固定在微孔底部外表。4倒出反响孔中的液体，并用滴管滴加洗涤工作液清洗3次，洗涤过程中应轻摇微孔板，然后再轻轻甩掉洗涤液。最后一次洗涤后将反响板倒置于吸水纸上轻轻吸干剩余液体〔切勿拍打〕。5立即向每个反响孔中参加2滴〔100μl〕低离子溶液，并向相应孔中参加1滴(50μl)待检者样本、阳性对照及阴性对照。低离子溶液将由紫色变为天蓝或青绿色，如仍为紫色可能漏加样本。三血小板抗体检测技术的简述2023/11/24浙江省人民医院输血科16〔四〕操作6用封口胶将反响孔封好，轻摇微孔板混匀后置于湿盒中，37℃水浴孵育30分钟。7按步骤5.4洗涤反响板5次。8立即参加1滴〔50μl〕抗人IgG试剂及1滴〔50μl〕指示细胞，轻轻震荡混匀。9将反响板以200g〔1300rpm〕离心5分钟。将待检孔与对照孔的结果进行比较，判读结果。10结果判定10.1阳性或弱阳性结果：指示细胞在反响孔底部平铺形成细胞层为阳性；假设指示细胞只结合到局部孔底，并且结合的区域比阴性对照大为弱阳性。说明待检者血清或血浆中含有血小板抗体。10.2阴性结果：指示细胞在反响孔底部中央形成细胞聚集。说明待检者血清或血浆中不含血小板抗体。三血小板抗体检测技术的简述2023/11/24浙江省人民医院输血科17

附血小板抗体检测简易操作程序

一、准备工作：1、试剂复温；2、湿盒在水浴箱中平衡至37℃；3、配制洗涤工作液〔蒸馏水；1：24〕；4、制备血小板悬液〔加生理盐水500μl〕；5、待检样本3000rpm离心5min。二、操作步骤：6、标记反响板条；7、加血小板悬液1滴〔50μl〕，轻摇反响板10秒钟；8、平板离心机50g〔650rpm〕离心5分钟；9、洗涤3次；10、加低离子溶液2滴〔100μl〕；11、加待检者样本、阳性对照及阴性对照1滴(50μl)；12、封孔，轻摇反响板10秒钟，湿盒中37℃水浴孵育30分钟；13、洗涤5次；14、加抗人IgG试剂1滴〔50μl〕；15、加指示细胞1滴〔50μl〕，轻摇反响板10秒钟；16、平板离心机200g〔1300rpm〕离心5分钟；17、判读结果。2023/11/24浙江省人民医院输血科18四我院开展血小板抗体检测的简况1、2021年6月1日—12月31日共计检测次，月平均检测人次，平均月增加收入元；方案2021年有较大幅度的增长；社会效益明显。2、血小板抗体检测总阳性率。3、反复输血的血液病患者的血小板抗体阳性率。4、有妊娠史妇女的血小板抗体阳性率。2023/11/24浙江省人民医院输血科19

四我院开展血小板抗体检测的简况2023/11/24浙江省人民医院输血科20四我院开展血小板抗体检测的简况2023/11/24浙江省人民医院输血科21四我院开展血小板抗体检测的简况2023/11/24浙江省人民医院输血科22五如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会

抗HLA抗体、抗血小板抗体检查结果〔日本〕症状报告数抗HLA抗体抗血小板抗体荨麻疹37828/326(8.6%)5/296(1.7%)过敏反应373/36(8.3%)1/33(3.0%)过敏性休克11112/104(11.5%)2/96(2.1%)血压降低290/25(0.0%)0/23(0.0%)呼吸困难4611/43(25.6%)3/38(2.4%)发热反应15444/139(31.7%)9/115(7.9%)其它335/31(16.1%)2/26(7.7%)总计788103/704(14.6%)22/627(3.65)2023/11/24浙江省人民医院输血科23五如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会〔一〕输注红细胞悬液：1、我们研究认为：血小板抗体检测阳性患者的非溶血性发热反响明显高于血小板抗体检测阴性患者；血小板抗体检测阳性患者经干预后非溶血性发热反响明显下降。2、干预措施：1〕建议使用去白的红细胞〔血库型或床旁型白细胞滤器〕2〕建议使用洗涤的红细胞3〕使用药物4〕配血报告的“备注〞栏注明：“请防范FNHTR等〞。2023/11/24浙江省人民医院输血科24五如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会〔二〕输注血浆：1〕输血性急性肺损伤(transfusionrelatedacutelunginjury，TRALI)：

文献报道，输血后发生的一系列严重呼吸窘迫病,其80%病例输入的血液中含有血小板抗体。研究已经证实：血小板抗体是引起TRALI的重要因素之一。上海市血液中心杨颖教授认为中国免疫性TRALI发病虽少，但严重型较多。

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不同国家TRALI发生\死亡率

UKSHOT 德国丹麦 法国 加拿大1996-20031995–20021999–2002 1994–982000–03

例生率%7 37 0-150-5死亡率%9 NR NR 209五如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会2023/11/24浙江省人民医院输血科26五如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会2〕仅输注血浆患者的比例：每个医院的功能、理念、管理的差异性。我院输注血浆患者的比例：仅输注血浆患者的比例为3.7%3〕对于特殊患者，检测患者、供者血液的血小板抗体是可行的、必要的，目的是进一步保证输血平安。2023/11/24浙江省人民医院输血科27五如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会〔三〕输注血小板1.输注血小板是提高患者血小板计数，改善临床出血病症最为快速、有效的方法和手段。2.输注血小板并不是每次都能到达满意效果，研究已经证明反复屡次随机输注血小板的患者，体内极易产生血小板抗体，引起血小板输注无效。HLA和HPA抗体是引起免疫性血小板输注无效的主要原因，其中HPA抗体可引起严重血小板同种免疫反响。3文献报道，临床血小板输注无效发生率为30%～70%，其中免疫因素引起的血小板输注无效约为20%。4.我国目前绝大多数医疗机构采用随机输注血小板，导致血小板输注无效频繁发生。2023/11/24浙江省人民医院输血科28五如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会〔三〕输注血小板5.血小板输注无效的后果：1〕患者发生免疫反响，加重病情。2〕患者病情得不到改善，病危甚至死亡。3〕浪费财力、物力、珍贵的血小板资源。4