中药配伍对黄连抑菌作用的影响

中药配伍对黄连抑菌作用的影响

黄连是一种常见的中药，具有清热除湿、清火解毒的功效。据现代药理研究表明,黄连具有抗微生物多种生理活性,小檗碱为其主要有效成分之一。体外实验证明:黄连和小檗碱的抗菌作用基本一致。为了进一步探讨中药配伍与疗效的关系,笔者研究黄连与甘草等中药配伍的抗微生物作用,用以分析中药配伍对黄连抑菌作用的影响。1实验菌株、培养基①53W紫外可见分光光度计(上海光学仪器厂);②净化工作台(苏州净化设备厂)、培养皿(Φ90mm)、游标卡尺;③实验菌株:金黄色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌(湖北中医学院附属医院检验科提供);④培养基:普通肉汤培养基(按中国药典配制)、肉汤琼脂培养基(杭州微生物试剂厂);⑤磷酸缓冲液:按中国药典配制,PH=7.4;⑥盐酸小檗碱标准品(购自中国药品生物制品检定所)。本实验所用药材均购自武昌区药材公司,经湖北中医学院鉴定教研室鉴定均为中国药典规定之正品,所用试剂均为分析纯。2中药汤剂中小碱的含量测定(1)样品制备标准溶液配制精密称取(105℃恒重)盐酸小檗碱标准品1.6mg,置100ml容量瓶中,加水溶解,定溶至刻度,浓度为16ug/ml,摇匀备用。压力称取黄连100g,加水煎煮2次,第1次30min,第2次20min,滤过,合并滤液,冷后加水稀释至200ml;双层滤纸滤过,精密量取滤液1ml,置50ml容量瓶中,加水至刻度,摇匀即得。黄连和甘草的联合剂称取黄连与甘草各100g,加水煎煮,操作同黄连煎剂。3黄连和大黄的制备配方称取黄连与大黄各100g,加水煎煮,操作同黄连煎剂。黄连和蜂蜜汤剂称取黄连与金银花各100g,加水煎煮,操作同黄连煎剂。黄连和黄鼠尾的制备配方称取黄连与黄芩各100g,加水煎煮,操作同黄连煎剂。黄连和栀子汤剂称取黄连与栀子各100g,加水煎煮,操作同黄连煎剂。(2)溴烷香草酚蓝溶液精密量取配制的标准品溶液1、2、3、4、5ml,分别置60ml分液漏斗中,加水至5ml,加入磷酸缓冲液5ml,0.1%溴麝香草酚蓝溶液1ml,精密加入氯仿10ml,振摇,放置使分层,分取氯仿层置离心管中离心;另取5ml水以同样操作做空白对照。置53W紫外分光光度计于波长420nm处进行测定,根据测定结果求得回归方程为:A=0.00365+0.06725C,r=0.9996(n=5),线性范围16~80ug。(3)损失率的测定精密吸取样品溶液1ml,按标准曲线项操作,测定个样品中黄连总生物碱的含量(以盐酸小檗碱计算),并求算出损失率。结果见表1、表2。3黄连、黄连、甘草等合用中药抗菌作用(1)试验溶液的制备黄连试液精密量取上述制备的黄连煎剂1ml,置10ml容量瓶中,加磷酸缓冲液至刻度,摇匀即得。黄连和甘草试验溶液精密量取上述制备的黄连与甘草煎剂1ml,置10ml容量中,加磷酸缓冲液至刻度,摇匀即得。试验溶液为黄连和大黄精密量取上述制备的黄连与大黄煎剂1ml,置10ml容量中,加磷酸缓冲液至刻度,摇匀即得。黄连和蜂蜜试液精密量取上述制备的黄连与金银花煎剂1ml,置10ml容量中,加磷酸缓冲液至刻度,摇匀即得。黄连和黄鼠尾试验溶液精密量取上述制备的黄连与黄芩煎剂1ml,置10ml容量中,加磷酸缓冲液至刻度,摇匀即得。黄连和栀子测试溶液精密量取上述制备的黄连与栀子煎剂1ml,置10ml容量中,加磷酸缓冲液至刻度,摇匀即得。(2)菌悬液的制备取检验菌(金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌),接种于普通肉汤琼脂斜面,37℃培养18h,用10ml肉汤培养基洗下菌苔,稀释成0.1倍的均匀悬液备用。(3)膜加菌抑菌圈为度按《中国药典》95版二部附录方法制备双碟,菌层加菌是以获得清晰的抑菌圈为度。在不锈钢管中加上述供试液10ml后,37℃培养16~18h,测定抑菌圈直径,统计结果见表1、表2。4不同配伍药物的配伍对抑菌作用影响黄连为常用中药,大量出现在中药复方中,也常与其它药物组成配伍药对。近年来,对黄连与甘草等中药配伍后的沉淀反应研究较多,但大多是从定性方面进行研究,本研究对其进一步的定量研究表明,黄连与甘草等不同中药配伍因发生沉淀反应,其有效成分小檗碱的损失是不同的;并进一步对其配伍药效学研究表明,黄连与甘草等不同中药配伍,其抗微生物作用变化与小檗碱的损失具有一定的相关性,但也存在一定的差异。对金黄色葡萄球菌作用表明:黄连与甘草、栀子配伍后,因小檗碱的损失,抑菌作用降低较多;黄连与金银花、黄芩配伍,虽小檗碱损失分别达51.85%和61.20%,但其抑菌作用降低反而较与甘草、栀子配伍时少;而与大黄配伍时仅略有降低。对痢疾杆菌作用表明:黄连与甘草、栀子配伍后,抑菌作用降低较大;与金银花、大黄配伍时,抑菌作用降低较前两者低;与黄芩配伍时抑菌作用降低不大。分析以上作用的原因:其一,因配伍后,小檗碱沉淀损失致使各种配伍药对抑菌效应均有不同程度降低。其二,在配伍药物中,因甘草、栀子对金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌均无作用,致使因小檗碱的损失,两者与黄连配伍后,对两种细菌的抑菌作用均降低较多;因金银花、大黄、黄芩对金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌均有一定的作用,弥补了因小檗碱的损失而出现的抑菌作用的下降,其中因黄芩对痢疾杆菌作用强于对金黄色葡萄球菌的作用,虽配伍后小檗碱的损失达61.20%,而抑菌作用降低不多;大黄因对痢疾杆菌作用弱于金黄色葡萄球菌,致使配伍后对痢疾杆菌的作用降低较大。分析结果表明:黄连与甘草等配伍后,小檗碱的损失与抑菌作用的减弱