复方妇炎平胶囊质量标准研究

复方妇炎平胶囊质量标准研究

复合妇炎平胶囊是我院治疗慢性盆腔炎的经验处方。它由退腐草、椰子仁、延胡索、大黄和其他中药组成。具有活血化瘀、通湿清热止带的功效，对治疗急性和慢性盆腔炎有显著疗效。为控制本品质量,采用薄层色谱法对制剂中败酱草、薏苡仁、延胡索进行定性鉴别,采用高效液相色谱法对制剂中盐酸小檗碱进行含量测定,并对其含量测定进行方法学的考察。1药品、试剂与仪器ZF-90型暗箱式紫外透射仪(上海顾村电光仪器厂);DIONEXultimate3000高效液相色谱仪(美国戴安公司);盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品鉴定所,批号0713-200107,);败酱草对照药材、薏苡仁对照药材、延胡索乙素对照药材(中国药品生物制品鉴定所);复方妇炎平胶囊样品(自制,批号060909,060910,060911);乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。2方法和结果2.1断裂本品为硬胶囊剂,内容物为棕褐色粉末,气微,味苦。2.2包装侵权2.2.1阴性对照的制备取样品粉末4g,研细,加1mol·L-1硫酸溶液20mL,水浴加热回流2h,放冷,用氢氧化钠调pH至7,加氯仿提取2次,每次20mL,合并氯仿液,水浴挥干,残渣加无水乙醇5mL使溶解,作为供试品溶液。按处方从中除去败酱草药材,依法制成阴性对照溶液。另取败酱草对照药材5g,加水50mL,加热回流1h,滤过,滤液浓缩至干,残渣按照样品的处理方法处理制成对照药材溶液。吸取对照药材溶液5μL,供试品溶液、阴性对照溶液各3μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正己烷-醋酸乙酯-甲醇-醋酸(10∶3∶1∶0.4)为展开剂,展开,取出晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色斑点,阴性无干扰。2.2.2薏养殖软糖的制备取样品粉末1g,加石油醚(60～90℃)10mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚(60～90℃)1mL使之溶解,作为供试品溶液。按处方从中除去薏苡仁药材,依法制成阴性对照溶液。另取薏苡仁对照药材1g,同法制成对照药材溶液。吸取对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各2μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.2)为展开剂,展开,取出晾干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性无干扰。2.2.3阴性对照品溶液的制备取样品粉末1g,加甲醇50mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10mL使溶解,加浓氨试液调pH至9,用乙醚振摇提取3次,每次10mL,合并乙醚液,挥干。残渣加甲醇1mL使溶液,作为供试品溶液。按照处方,从中除去延胡索药材依法制成阴性对照溶液。另取延胡索乙素对照药材1g,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,置于氨水饱和的层析缸中,以正己烷-氯仿-甲醇(7.5∶4∶1)为展开剂,展开,取出晾干,置碘缸中至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性无干扰。2.3重量测定2.3.1对照溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品10.12mg,加甲醇定容至10mL,再精密量取1mL定容至10mL,作为对照品溶液。2.3.2超声处理取样品内容物研细,取约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加盐酸甲醇50mL,称重,超声处理20min,放冷,称重,用盐酸甲醇补足减失质量,摇匀,滤过,取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过,即得。2.3.3准分离主溶液的制备按处方比例及生产制备方法,配制不含黄柏阴性样品,按“2.3.2”项下方法制备,作为阴性对照溶液。2.3.4测定总样量色谱柱:Hypersil-ODS2(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50)(每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g);检测波长:265nm;流速:1.0mL·min-1;自动进样器进样。在此色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL,注入液相色谱仪中,测定。结果表明,缺盐酸小檗碱阴性对照品对检测无干扰。2.3.5峰面积积分回归线性方程精密称取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成质量浓度为20.24,40.48,60.72,80.96,101.2mg·L-1系列溶液。分别进样20μL,按照上述色谱条件测定峰面积积分值。以盐酸小檗碱含量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,得回归线性方程为Y=16.447X+0.4803,r=0.9996。结果表明,盐酸小檗碱在20.24～101.2mg·L-1范围内呈良好的线性关系。2.3.6稳定性试验吸取供试品溶液20μL,注入液相色谱仪中,测定峰面积积分值,然后分别在0,4,8,12,24h进样测定。结果表明,供试品在24h内稳定性良好,盐酸小檗碱RSD为0.95%(n=5)。吸取同一供试品溶液20μL,注入液相色谱仪中,测定峰面积积分值,连续5次,盐酸小檗碱面积积分值RSD为0.68%(n=5)。结果表明仪器精密度良好。2.3.7对照品溶液制备取已知盐酸小檗碱含量的样品内容物(批号060911),研细,精密称取0.05g,平行6份,置具塞锥形瓶中,加入一定量的盐酸小檗碱对照品,按上述样品制备法制备样品。吸取供试品溶液各20μL,注入液相色谱仪中,测得回收率均在95%～105%之间,RSD为1.85%(n=6)。结果表明精密度良好,结果见表1。2.3.8重复性试验取同一批号(批号060911)的样品研细,约0.1g,精密称定,平行6份,制成供试品溶液,吸取供试品溶液各20μL,注入液相色谱仪中,测得盐酸小檗碱平均含量为42.85mg·g-1,RSD为0.76%(n=6),结果表明重复性良好。2.3.9含量测定取样品3批,按上述色谱条件及方法,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20μL注入液相色谱仪中,测定峰面积,计算样品中盐酸小檗碱的含量,结果3批样品含量分别为27.68,26.13,23.57mg/粒。3皂苷及其衍生物的提取本实验中败酱草等药材的TLC鉴别试验显示,阴性无干扰,方法具有专属性。方中黄柏,其主要活性成分盐酸小檗碱,具有抗菌、抗炎等作用,为君药,所以作为定量测定指标。HPLC检测方法简便,灵敏度高,重复性好,可作为本品的质量控制标准。方中败酱草所含皂苷类成分的薄层鉴别中,根据其结构特点,用酸水解得游离皂苷元,并用氢氧化钠调pH以除去酸性杂质,加氯仿萃取。以正己烷-醋酸乙酯-甲醇为展开剂,调整其比例,并加入冰醋酸,喷以硫酸乙醇溶液显色,所得斑点清晰,杂质少,无干扰。薏苡仁所含薏苡仁酯的薄层鉴别中,根据其易溶于石油醚(60～90℃)的理化性质,用超声处理的方法制成样品,以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(10