柴胡疏肝散对抑郁大鼠海马5-h及5-h1a的影响

柴胡疏肝散对抑郁大鼠海马5-h及5-h1a的影响

抑郁是一种慢性和复发的精神疾病。主要症状为抑郁、抑郁、精神意识运动延迟。如果严重，也会出现自杀倾向，这是研究的热点。但其发病机制尚未明确。中医认为,抑郁症属“郁证”范畴,是由于情志不舒,肝气郁结,渐致五脏不和,化火、生痰、瘀阻、耗气、伤阴等而致,因此中医临床上多采用疏肝理气法对其进行治疗。柴胡疏肝散具有理气疏肝解郁作用,是治疗肝郁证的常用方剂。本研究建立抑郁症模型,观察海马5-HT及5-HT1A受体的变化,探讨柴胡疏肝散抗抑郁症作用的机制。1材料和方法1.1动物合格号清洁级健康成年雄性Wistar大鼠45只,体质量180~210g,河北联合大学实验动物中心提供,动物合格证号:SCXK京2009-0004。适应性饲养1周后用于实验。1.2材料和试剂:nbct、胡肝散饮片兔多克隆5-HT1A抗体购自SantzCruz公司,Westernblot相关试剂购自武汉博士德生物工程有限公司。柴胡疏肝散饮片由河北省中药材公司提供;饮片按照柴胡6g,白芍4.5g,枳壳4.5g,川芎4.5g,醋炒陈皮6g,香附4.5g,炙甘草1.5g组方。1.3方法1.3.1材料及应激分配随机将大鼠分为对照组、模型组和治疗组,每组15只。模型组和治疗组给予慢性不可预见性温和应激(CUMS),应激共包括11种:鼠笼45℃倾斜24h,潮湿垫料24h,行为限制24h,4℃冰水游泳5min,42℃热水游泳5min,禁食24h,禁水24h,夹尾1min,鼠笼摇动15min,持续光照36h,天敌声音30min。将上述11种应激随即分配到21d内,每日给予1种应激,每种应激平均出现2次,同种应激不连续出现。对照组除每天抓取1次外,不作其他处理。造模同时,治疗组大鼠给予柴胡疏肝散饮片水溶液,每日灌胃1次(每毫升药液含原生药1g,剂量10mL·kg-1体质量)。1.3.2糖偏好实验1.3.3悬尾实验1.3.4流动相、缓冲溶液、柱温度每组取5只大鼠,1%戊巴比妥钠(35mg·kg-1)腹腔注射麻醉,断头取脑,冰上分离海马组织。加入高氯酸提取液冰浴匀浆后离心,留取上清,取上清20μL进行分析。流动相:缓冲液(50mmol·L-1KH2PO4)/甲醇(95:5),缓冲液:3mmol·L-1庚烷磺酸钠、10mmol·L-1醋酸钠、85mmol·L-1柠檬酸、0.2mmol·L-1EDTA,pH3.7、柱温40℃、波长扫描范围210~370nm、检测波长275nm、流速1.0mL·min-1。以标准品峰保留时间与样品峰保留时间对照定性,标准品峰面积与内标峰面积比值进行定量分析。1.3.5sds-东南角电泳3组各取5只大鼠,麻醉后断头取脑,冰上快速分离海马,加入RIPA裂解液,提取组织总蛋白,定量后按照30μg蛋白量上样,进行10%SDS电泳,PVDF膜电转印,脱脂奶粉封闭,5-HT1A一抗(1∶500)4℃孵育过夜,二抗IgG(1∶5000)室温孵育1h,ECL显色。同上进行内参照β-actin的Westenblot分析。以目的条带与内参照的光密度比值表示蛋白表达。1.4统计方法测量结果以(x±s)表示,应用SPSS统计分析软件对数据进行单因素方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义。2结果2.1别罪犯性别对照组、模型组和治疗组大鼠糖水偏好百分比分别为92.49±8.19、57.62±4.91和79.88±2.98。模型组和治疗组明显小于对照组(P<0.05),见表1。2.2模型组和治疗组的比较对照组悬尾不动时间为(1.75±0.31)s,模型组为(3.24±0.38)s,治疗组为(2.50±0.21)s。可见,模型组高于对照组,而治疗组低于对照组(P<0.05),见表1。2.3两组大鼠海马5-ht水平比较模型组海马5-HT含量明显低于对照组(P<0.05),治疗组大鼠海马5-HT水平明显升高,但仍低于对照组(P<0.05),见表2。2.4两组海马5-ht1a受体表达水平比较模型组海马5-HT1A受体表达明显低于对照组(P<0.05),治疗组大鼠海马5-HT1A受体表达水平明显升高,但仍低于对照组(P<0.05),见表2,图1。3治疗大鼠抑郁症的作用机制对抑郁症的研究得益于正确动物模型的建立。给予大鼠CUMS,能使大鼠较好地表现出抑郁的临床症状,包括情绪低落、兴趣丧失、记忆力减退等,是较理想的抑郁动物模型,本实验利用CUMS应激研究柴胡疏肝散抗抑郁作用机理。柴胡疏肝散由柴胡、陈皮、川芎、香附、枳壳、芍药、炙甘草等7味药组成,能发挥疏肝解郁、行气止痛作用,主治肝气郁滞诸症。每遇肝郁气滞、气血不合之证,常用柴胡疏肝散化裁治疗,多有效验。实验结果表明,与模型组相比较,治疗组大鼠糖水偏好百分比明显升高,悬尾不动时间明显降低,提示柴胡疏肝散可以调整抑郁大鼠的情绪障碍,具有干预抑郁症的作用。下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴为神经内分泌免疫网络中枢,HPA轴失调可以导致抑郁的发生。当机体受到应激时,HPA轴可以调控释放促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)。神经递质5-羟色胺(5-HT)可以兴奋性调节CRH的释放,5-HT及其受体在HPA轴反馈调节中起重要作用,其中5-羟色胺1A受体在情绪和精神调节中具有重要作用。本实验结果显示,柴胡疏肝散能明显升高应激所致的5-HT浓度,促进5-HT1A受体表达,这可能是柴胡疏肝散发挥抗抑郁作用的机制之一。用糖水和自来水双瓶给实验大鼠供饮,通过测量剥夺饮水2.5