几种美容中药对腐败菌的抑菌效果研究

几种美容中药对腐败菌的抑菌效果研究

血液中的养分含量通常含有丰富的养分，容易产生微生物污染。添加抗生素是预防化妆微生物污染的主要方法。目前化妆品常用防腐剂有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和卡松等,随着化妆品的品种逐渐增多,用于化妆品的防腐剂种类也在增加。但国家对化妆品防腐剂的加样量与使用生产化妆品的种类和条件有着严格的控制,这主要由于合成防腐剂具有一定的毒副作用,如对皮肤有刺激、过敏反应等;并且其防腐效果易受溶解度、微生物种类、pH值等因素影响,因此研发使用方便、效果好且无毒副作用的天然防腐剂已受到世界各国的普遍重视。中药作为我国传统医学的重要组成部分,药源广泛,价格低廉,含有多种活性成分,具有广谱抗菌作用,不易产生抗药性。中药不仅能抗菌消炎,还有全面的调理作用。目前,人们已研究了一些中药对腐败菌的抑菌效果,但主要集中应用于食品保鲜防腐上,用于化妆品防腐的还较少。将中药用作化妆品防腐剂,不仅可以避免化学防腐剂的毒性危害,而且还可以提升化妆品的品质,是一种具有广阔前景的新型天然防腐剂。因此,本研究选取7种药食同源的美容中药(竹茹、芦根、白芍、白术、茯苓、白芷、薏苡仁),研究其对腐败菌的抑菌效果,有望将抑菌效果好的中药提取液加入到一些化妆品中,既可达到防腐抑菌效果,又可使化妆品达到更好的护肤和美白的功效。1材料和方法1.1菌株和菌株7种美容中药均购自江苏省淮安市广济医药连锁有限公司,分别是竹茹、芦根、白芍、白术、茯苓、白芷、薏苡仁。供试菌株为金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、黑曲霉(Aspergillusniger)。金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌采用牛肉膏蛋白胨培养基培养,黑曲霉采用马铃薯葡萄糖培养基培养。1.2高效电导率测试仪器HH-4数显恒温水浴锅、DSX-280B不锈钢手提式灭菌器、BCM-1000超净工作台、DH3600电热恒温培养箱、FW80型高速万能粉碎机、电炉、天平、牛津杯(内径6mm、外径8mm、高10mm)和其他实验室常用玻璃仪器等。1.3方法1.3.1中药水利益可加味液的制备称取7种美容中药粉末各100g,分别用冷水浸泡30min,分2次加水煎煮:第1次加水600mL,第2次加水400mL,均待水开后改用文火煮30min,用纱布过滤;合并2次滤液,除去药渣,浓缩至100mL,即得到浓度为1g/mL的各种中药水煎液。经过滤灭菌后保存备用。1.3.2不同介质对牛蒡杯的菌落采用牛津杯法测定水煎液抑菌活性。取2.0×108CFU/mL各种待测菌悬液0.1mL,涂布在相应凝固平板上,之后每个平板放入2个灭菌牛津杯,其中1个为平行,1个用作对照(以无菌水为对照)。分别用移液枪取7种美容中药水煎液加入牛津杯中,细菌37℃培养24h、黑曲霉28℃培养48h后,移去牛津杯,测定抑菌圈直径,每组平行3次,取其平均值。1.3.3最低药浓度试验以1g/mL中药水煎液作为100%原液,无菌水两倍法稀释,得不同浓度提取液系列。配制牛肉膏蛋白胨液体培养基或马铃薯葡萄糖液体培养基,每小试管1960μL分装,121℃湿热灭菌,冷却后备用。准确移取40μL2.0×108CFU/mL测试菌液加入相应的小试管中,再加入中药提取液2000μL,混匀,每个浓度做3个平行。设置阳性对照(加培养基和菌液,以无菌水代替中药提取液加入小试管中)和阴性对照(加培养基和中药提取液,不加菌液),细菌于37℃培养箱中培养24h,黑曲霉于28℃培养48h。肉眼观察试管浊度,以不显示浊度的最低药液浓度作为MIC。并从以上培养物中分别取0.1mL涂布于牛肉膏蛋白胨固体培养基或马铃薯葡萄糖固体培养基平板上,于37℃或28℃下培养后观察,以进一步验证上述试管法的肉眼观察结果。1.3.47种中药水提取物稳定性的研究1.3.4.1.紫外稳定性将中药水煎液分别在紫外灯(功率为20W)下处理10、30、60min,再测定其抑菌圈的大小。1.3.4.2.ph氧化用盐酸和氢氧化钠将中药水煎液的pH值分别调至5、7、9,再测定其抑菌圈的大小。2结果与分析2.17超声辅助提取芦根多糖的抑菌圈7种美容中药水煎液的抑菌效果如表1所示,抑菌圈直径越大,抑菌活性越大,由表1可以看出,芦根、白术、竹茹、茯苓对4种菌有较好的抑菌效果。芦根对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用较大,抑菌圈直径分别为(16.33±0.58)、(15.00±1.00)mm,这可能与芦根含有多种多聚糖类、黄酮类及甜菜碱等抑菌物质有关。姚以才等也曾研究发现超声辅助提取获得的芦根多糖对酵母菌属于极敏感,对金黄色葡萄球菌属于高敏感,对枯草芽孢杆菌和黑曲霉属于中敏感。白术对大肠杆菌的抑制作用最大,抑菌圈直径为(16.00±1.00)mm,这可能与白术中含苍术酮、倍半萜内酯类等挥发油成分及白术多糖有关。竹茹对黑曲霉的抑制作用最大,抑菌圈直径为(13.00±1.00)mm,这可能与竹茹中富含黄酮类化合物、总糖、内酯、氨基酸和有机酸有关。茯苓对4种菌的抑菌圈均达到了10mm以上,这可能与茯苓中含有落新妇苷、异黄杞苷、胡萝卜苷、皂苷等苷类化合物,琥珀酸、棕槟酸、阿魏酸、莽草酸等有机酸以及鞣质、树脂等抑菌成分有关。白芍和白芷对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑制圈均可达到10mm以上,但对于黑曲霉抑制效果较差。白芍的抑菌作用可能与其主要成分芍药苷有关,此外白芍中的鞣质和挥发油也有抑菌作用。白芷的抑菌作用可能与其中的香豆素类有关。薏苡仁对4种菌的抑制效果都较差,对黑曲霉几乎没有抑制作用。薏苡仁中含有薏苡内酯、薏苡多糖和茚类化合物等抑菌物质,但本试验采用的水煎法不太适合提取这些成分,因此造成试验结果中抑菌效果较差。2.27不同菌种对枯草芽孢杆菌mic的影响7种美容中药水煎液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉的MIC测定结果如表2至表5所示。由表2可知,芦根水煎液对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,其MIC为31.25mg/mL;其次为竹茹、白术、茯苓,其MIC为62.5mg/mL;再次为白芍和白芷,其MIC为125mg/mL;薏苡仁水煎液的抑菌效果最差,其MIC为500mg/mL。由表3可知,竹茹、芦根、白芍、白术、茯苓水煎液对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,其MIC为62.5mg/mL;其次为白芷,其MIC为125mg/mL;薏苡仁水煎液的抑菌效果较差,其MIC为500mg/mL。由表4可知,白术水煎液对大肠杆菌的抑制作用最大,其MIC为31.25mg/mL;其次为竹茹、芦根、茯苓,其MIC为62.5mg/mL;再次为白芍、白芷,其MIC分别为125、250mg/mL;薏苡仁水煎液的抑菌效果最差,其MIC为500mg/mL。由表5可知,竹茹水煎液对黑曲霉的抑制作用最大,其MIC为62.5mg/mL;其次为芦根,其MIC为125mg/mL;再次为白术和茯苓,其MIC为250mg/mL;白芍和白芷抑菌效果较差,其MIC为500mg/mL;薏苡仁水煎液对黑曲霉几乎没抑制作用。2.37关于中药水煮溶液的稳定性的研究2.3.1不同中药水煎液的抑菌活性紫外线处理抑菌试验结果如表6所示。由表6可以看出,7种中药水煎液经紫外线处理后,其抑菌活性没有明显的变化,说明这些水煎液中的抑菌物质对紫外线具有较高的稳定性。2.3.2不同ph值对中药水饼液抑菌性的影响pH值对7种中药水煎液抑菌活性的影响测定结果如表7所示。由表7可以看出,在pH值为5和7时,7种中药水煎液的抑菌性能没有受到明显影响;但是当pH值为9时,其抑菌性能呈现不同程度的降低。由此可见,水煎液中的抑菌成分不耐碱,原因是碱处理可能会使某些抑菌成分与溶液中的碱性成分发生反应,从而使该物质的抑菌性减小。如白芍中的抑菌成分芍药苷在碱性环境下不稳定,易降解。3不同中药提取方法对受试菌的抑菌活性影响本试验采用的是传统水煎法提取7种美容中药中的抑菌成分,该方法操作简单,用水作溶剂提取,可避免其他溶剂对皮肤的伤害;且提取出的抑菌成分能溶于水,且对湿热稳定。但水煎法也存在较多的缺点:(1)煎煮法有效成分损失较多,尤其是水不溶性成份;(2)提取液中除有效成分外,往往杂质较多,非有效成分不能被最大限度地除去,浓缩率不够高;(3)高温操作会引起热敏性有效成分大量分解。在本试验中也存在这样的问题:如茯苓中的某些有效成分(如鞣质等)在较高温度下长时间暴露于空气中,易发生氧化而活性降低,甚至失活,因而造成茯苓水煎剂对受试菌的抑菌活性下降;白芷的主要活性成分香豆素类和白芍中的主要成分芍药苷易受高温影响,因而造成白芷和白芍水煎剂对受试菌的抑菌活性下降。目前中药提取的方法很多,有浸渍法、渗漉法、回流法、水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取、微波提取、超声波提取、大孔吸附树脂法等方法。在今后工作中,可比较不同方法得到的提取液的抑菌效果,为进一步开发化妆品防腐剂提供理论依据。本试验选用的7种美容中药均具有较好的美容功能,在润泽皮肤、美白祛斑治痘、延缓衰老方面有较好的作用。本试验研究它们对腐败菌的抑菌效果,结果显示芦根、竹茹、白术、茯苓对4种菌都有较好的抑菌效果。白芍和白芷对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑制圈均可达到10mm以上,但对于黑曲霉的抑制作用较差。在实际应用中,可根据化妆品的配方,开发研制少用甚至不用合成防腐剂的天然美白中药化妆品。此外,本试验只是初步研究了这7种美容中药水煎液的抑菌性能,关于其具体抑菌物质的研究还不是很透彻,有待于进一步深入研究。另外还可