BIO-RAD荧光定量PCR原理和方法介绍_第1页
BIO-RAD荧光定量PCR原理和方法介绍_第2页
BIO-RAD荧光定量PCR原理和方法介绍_第3页
BIO-RAD荧光定量PCR原理和方法介绍_第4页
BIO-RAD荧光定量PCR原理和方法介绍_第5页
已阅读5页，还剩2页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

BIO-RAD荧光定量PCR原理和方法介绍荧光定量PCR是一种分子生物学技术，具有很高的灵敏度和精确度。了解其原理和实验步骤，是进行PCR实验的基础知识。PCR反应的基本原理PCR反应是通过让DNA的两条链不断地复制来放大目标DNA分子，从而实现检测。其基本步骤包括：变性、退火、延伸。1变性用高温（通常是94-95℃）破坏DNA双链结构，使之成为单链DNA模板。2退火在低温下（通常是50-68℃），合成DNA引物与模板的互补序列结合。3延伸在模板上合成新的DNA链，达到扩增DNA的目的。荧光探针的工作原理荧光探针是PCR实验中常用的探针，其工作原理是根据荧光分子的不同特性，结合PCR技术进行靶向检测。探针引物的3'位上附加一个荧光探针序列，通常有探针和引物两个组成部分。靶标PCR扩增出的目标DNA序列。荧光荧光探针通过结合靶标DNA，在荧光信号上发生出峰或猝灭，从而进行定量检测。荧光定量PCR的优势相较于传统PCR技术，荧光定量PCR具有更高的精确度和灵敏度。同时，也有以下几个优点：无需进行后续凝胶电泳分离，操作更加简便。定量范围广泛，适用于DNA、RNA的定量、检测、表达分析等。数据分析更加全面、直观，常见的软件分析工具可以支持更多的数据分析方式。荧光定量PCR的实验步骤荧光定量PCR的实验步骤一般包括：反应体系的设计、样品DNA/RNA的提取、反应液的配制、反应条件的优化和实验操作等。DNA/RNA提取样品的提取是PCR实验中最关键也最易出错的环节。使用专业的标准操作流程，可更好地保证提取质量和浓度。反应液的配制反应液的配制十分重要。除了PCR反应体系中必须的成分外，还需要注意引物的选择、荧光探针的添加量等因素。实验操作实验中需要严格控制操作条件，包括对反应温度、反应体积、反应时间等的合理设置。荧光定量PCR的结果分析荧光定量PCR的结果分析包括：荧光曲线分析、数据计算和样品质量控制等。1荧光曲线分析通过荧光曲线分析，判断扩增的合理性和特异性。2数据计算一般使用第二阶导数MAX方法，自动确定阈值、Ct值、标准曲线、扩增效率等参数。3样品质量控制通过一些方法，如对照实验等，掌控样品的质量，为诊断和研究提供重要依据。实验注意事项和常见问题解答荧光定量PCR需要注意以下几个方面：1试剂保存注意试剂的保存和保鲜，在使用前一定要检查其情况。2DNA/RNA提取DNA/RNA提取需要严格按照操作流程进行。在一定程度上，决定了实验的成功率和数据质量。3引物和探针引物和探针的质量直接影响实验结果的准确性。应选择合适的引物和探针，并在使用前及时测试。常见问题解答：扩增产物大小的问题扩增产物大小受反应体系和反应条件的影响。合理设计反应体系和调整反应条件可以解决相关问题。质量控制的问题样品质量控制需要充分重视，正确判断样品DNA/RNA的纯度和浓度。同时，在数据计算的

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论