唐古特红景天化学成分的测定

唐古特红景天化学成分的测定

唐古特红景天是蔷薇科科的一种多年生草本植物或灌木植物，通常有浓密的肉根。主要分布在四川西部、甘肃、宁夏、青海等地。1973年，干燥的根系和根茎被列入中国药店的药物标准。1000多年前，人们使用它来治疗跌倒、伤害、糖尿病和阳痿等症状。它被称为“高原人参”和“雪山仙女草”。经研究发现,从不同种类的红景天中分离得到的化学成分有40余种,包括苷类、黄酮类、酚类、酶类、挥发油类、氨基酸类、香豆素类、矿物质、微量元素等,其中最重要的活性成分为红景天苷(salidroside)及苷元酪醇(P-tyrosol).现代药理研究表明,红景天的活性成分具有预防肿瘤、抗疲劳、对中枢神经系统的双向调节、抗衰老、防辐射等作用.刘志伟,余华,陈长武,王伟军等人将红景天应用于功能食品的开发,研制出红景天茶,红景天补酒,红景天饮料等产品.徐宝军,武艺等人还对红景天化妆品的开发进行了研究.随着人们生活质量的提高和健康意识的增强,具有一定保健功能的天然产品越来越受青睐.我国西部作为红景天植物资源的主产区,储量大,品种多,可为红景天的研究提供便利条件.我国红景天属植物种类繁多,王莉等,周元川,Li等对小丛红景天、蔷薇红景天、云南红景天、西藏红景天的形态结构、化学组成、药理药效等方面进行了研究.目前,国内外关于唐古特红景天化学成分的研究很少且报道不多.本试验拟通过不同溶剂对唐古特红景天主要成分进行提取分析并测定红景天中红景天苷的含量,以期为唐古特红景天的进一步研究和开发利用提供依据.1材料和方法1.1仪器与设备7890A-5975C型GC-MS气相色谱-质谱联用仪(美国Agilent公司);6A系列HPLC高效液相色谱仪(日本岛津公司);RE2000B旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);DS-2510DT超声波仪(上海奥谱勒仪器有限公司);HX502TD电子天平(慈溪市天东衡器厂);AL104电子天平(上海梅特勒-托利多仪器上海有限公司);HG101-3A电热鼓风干燥箱(南京腾飞实验仪器有限公司);回流装置.1.2有机微孔滤膜、硅胶乙醇(分析纯)、正丁醇(分析纯)、乙酸乙酯(分析纯)、二氯甲烷(分析纯)、四氯化碳(分析纯)、三氯甲烷(分析纯)、甲醇(色谱纯)、高纯水(自制)、0.45μm有机微孔滤膜、硅胶.1.3大花红景天叶片的制备唐古特红景天采于甘肃省肃北蒙古族自治县盐池湾国家级自然保护区.唐古特红景天的根茎用高纯水洗净,在100℃条件下烘干,粉碎后过120目筛备用.大花红景天根茎粉末过120目筛备用.红景天苷(Salidroside)对照品购自上海源叶生物科技有限公司(批号:110818,200404).1.4测试方法1.4.1超声波-超声波法分别准确称取10.00g样品5份置于5个250mL烧杯中,各加入100mL蒸馏水.将5个烧杯同时放入超声波仪中提取75min,温度控制在60℃左右.将提取液抽滤后用旋转蒸发仪蒸发浓缩至微粘稠状,密封保存备下一步利用.1.4.3质谱条件色谱条件:色谱柱:HP-1701毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm);电子捕获检测器,检测器温度300℃,进样口温度250℃,恒温条件下柱温180~220℃;载气为He(>99.999%),流速为1mL/min;升温程序:初温40℃,保留1min,然后以3℃/min升温至120℃;再以4℃/min升温至250℃,保留20min.不分流进样.质谱条件:离子源:电喷雾离子化源(ESI);扫描模式:正离子模式;检测方式:选择反应检测(SRM);电喷雾电压:2500V;毛细管柱温:350℃;干燥器温度:400℃;碰撞气:高纯度氮气;传输线温度:280℃;溶剂延迟5min,离子源温度:150℃;四极杆温度:100℃;反应气:甲烷,流量:2mL/min;电子能量70eV,质量扫描范围15~550m/z.1.4.4红景天苷的提取、浓缩、分离称取红景天根茎粉末20.00g于蒸馏烧瓶中,逐次加70%乙醇100mL连续回流提取3次,每次1.5h(5组平行),将提取液趁热真空减压抽滤得粗提物,用旋转蒸发仪真空浓缩,回收乙醇,将浓缩液用超纯水溶解,乙酸乙酯萃取3次,合并水层,再用正丁醇萃取3次,合并正丁醇层,将所得液用旋转蒸发仪真空浓缩,回收正丁醇,将浓缩液用乙醇溶解,三氧化二铝拌柱,湿法装柱,乙醇-氯仿(3∶1)洗脱,得红景天苷粗品,再将所得样液硅胶拌柱,湿法装柱,乙醇-氯仿250mL(3∶1)洗脱,得红景天苷分离物.将所得纯品过0.45μm有机微孔滤膜,待测.1.4.5标准样品溶液的制备精密称取红景天苷对照品17.4mg,用超纯水溶解并定容于10mL容量瓶中,作为对照品储备液.精确量取储备液2mL用超纯水定容至100mL容量瓶中,取上述溶液28.8mL用超纯水定容至100mL,即得试验所需对照液10mg/L的标准样品溶液.1.4.6胶结充填剂浓度检测用高效液相色谱进行检测,检测条件:色谱柱为XDB-Cs、5μm、4.6×150mmC8柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水(15∶85)线性梯度淋洗;流速1.0mL/min,柱温35℃;检测波长275nm;理论塔板数不低于2000,检测器为二极管阵列.2结果与分析2.1唐古特红景天提取液的化学成分从图1、表1可以看出,利用GC-MS联用仪对正丁醇萃取的唐古特红景天提取液成分检测共得出17种成分,这些成分中大多是醇类物质,有11种,其中相对含量最高的是己醇,为1.97%.2.2醇类和黄酮类物质的含量从图2、表2中看出,对唐古红景天乙醇萃取层中的成分共检测出16种,为醇类和黄酮类物质,醇类11种,其中相对含量最高的是己醇,为2.89%;黄酮类5种,相对含量最高的是3-甲基-2-(H)-呋喃酮,为1.87%.2.3酯类物质中各化学成分的检测从图3、表3中看出,GC-MS联用仪对唐古红景天乙酸乙酯萃取层中的成分检测结果显示,共有21种物质被检出,大都是酯类和有机酸类物质.酯类有10种,相对含量最高的是1,2-苯二羟酸异辛酯,为0.97%,有机酸类有6种,相对含量最高的是二十四基乙酸,为1.77%.2.4中共检出烷烃类的含量从图4、表4中看出,极性较弱的唐古红景天二氯甲烷萃取液中共有13种被检出物质,其中有11种烷烃类,相对含量最高的是十一烷,为2.47%,其他两种是乙酸正丁酯,相对含量为0.27%;10-甲基萘,相对含量为0.79%.2.5古红景天四氯化碳萃取液的检出价值从图5、表5中可以看出,极性最弱的唐古红景天四氯化碳萃取液也有13种被检出物质,大多是烷烃类,有11种,其中相对含量最高的是三十一烷,为0.65%.2.6标准曲线的出峰时间分别准确量取3、5、10、20、40mL的红景天苷对照溶液,于高效液相色谱仪上检测,结果如图6所示.根据上图可看出其重叠性非常好,说明检测红景天苷的出峰时间基本一致.由仪器检测所得的5个标样的峰面积分别是131.4、164.2、331.2、627.2、1306.6(mV·min).峰面积与浓度有很好的线性关系.峰面积(y)与红景天苷浓度(x)的线性关系为y=32.043x+12.249(R2=0.9985,图7).2.7大花红景天的含量计算由图8可知,大红景天中红景天苷峰面积为2368.8(mV·min),根据所得线性方程计算可得所提大花红景天浓度为73.54mg/L,大花红景天提取液的体积为250mL.根据提取液的体积可计算出红景天中红景天苷的含量为0.92%.2.8红景天苷重现性测定取大花红景天平行样品5份,分别进行HPLC测定,红景天苷含量的相对标准偏差(RSD)为0.01823%,低于2%.说明按本文方法测定红景天苷的重现性良好、方法可靠(表6).2.9唐古特红景天中红景天苷的含量由图4可知,唐古特红景天中红景天苷峰面积为2911.6(mV·min).根据所得线性方程计算得所提浓度为90.5mg/L,唐古特红景天提取液的体积为250mL.根据提取液的体积可计算出唐古特红景天中红景天苷的含量为1.13%.3红景天主要化学成分的种类见表1本试验通过GC-MS联用仪对5种不同极性溶剂萃取红景天提取液的各成分检测数据进行分析,发现被检得物质中有以下几大类主要物质,分别为醇类、黄酮类、酯类、有机酸类和烷烃类.其中醇类物质有17种(24.58%),烷烃类18种(14.78%),黄酮类5种(8.96%),有机酸类6种(8.45%),酯类10种(5.71%),其他物质8种(3.48%).通过检测各物质种类的含量可了解其在药材方面的应用范围,也可以了解红景天中某种物质的提取效率和价值.试验表明,唐古特红景天中含有大量的烷烃、醇、酮、酯类等物质,从而使得其有浓郁的香味.经测定大花红景天中红景天苷的含量为0.92%,相对标准偏差RS