玫瑰茄提取物体外抗氧化活性研究

玫瑰茄提取物体外抗氧化活性研究

李子是金属科的木槿属植物，也被称为洛神奎、山梨和罗塞尔。其作为新兴的食品和食品工业原料,它的花萼可制成蜜饯、果酱、高级饮料、冰榨、冰糕、罐头、果酒、汽酒、香摈酒及糕点夹馅、玫瑰茄豆腐等多种食品。其主要含有类黄酮素、原儿茶酸、花青素、异黄酮素以及丰富的氨基酸、维生素、糖类、有机酸、无机盐等化学成分,能降低胆固醇和甘油三脂、抑制低密度脂蛋白的氧化、抑制血小板的凝集、降低血栓的形成、减少动脉粥状硬化,可有效地预防心血管疾病的发生。因此,常饮用玫瑰茄花茶可起到减肥作用,并且在夏季饮用玫瑰茄还可以清热解暑。目前,国内外研究主要集中在玫瑰茄的色素提取上,对玫瑰茄的抗氧化能力及与多酚含量相关性研究较少。通过体外抗氧化试验,确定玫瑰茄有效部位以及抗氧化活性。研究结果,可为其抗氧化药理作用研究及进一步开发高附加值产品提供参考。1材料和机器1.1材料表面玫瑰茄:广东省乳源瑶族自治县提供。1.2仪器、药品和仪器UV-1700型紫外分光光度仪:日本Shimadzu公司;TE214S型精密电子天平:北京赛多利斯仪器系统有限公司;4003型真空旋转蒸发仪:德国Heidolph公司;HH-1型恒温水浴锅:江苏国华电器有限公司。1.3抗氧化能力测试没食子酸:上海食品药品监督管理局提供;福林-酚:上海荔达生物科技有限公司提供;DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)、ABTS[2,2’-tris(2-pyridyl)-s-trizaine]、BHT(butylatedhydroxyltoluene):美国sigma公司提供;总抗氧化能力(T-AOC)测试盒:南京建成生物研究所提供;其他试剂均为分析纯。2方法2.1粗提物的制备称取5g玫瑰茄样品,40%乙醇为溶剂,料液比为1∶20(g/mL),在75℃条件下回流1.5h后过滤得粗提物。将粗提物依次用等体积石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。2.2标准曲线的绘制采用Folin-Ciocalteu法测定。取10mg没食子酸,定容至100mL,配制成0.1mg/mL溶液,分别取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL定容至25mL,配制成浓度为4、6、8、10、12、14、16μg/mL标准溶液。分别取1mL标准溶液、1mL福林-酚试剂、2mL10%Na2CO3,混匀,25℃反应1h,测定在765nm波长处吸光度。以浓度为X轴,吸光度为Y轴,做标准曲线,并计算回归方程。回归方程为:Y=0.0356X+0.0519(R2=0.9985),分别取1mL粗提取和各极性部分萃取物稀释液,再加入1mL福林-酚试剂和2mL10%Na2CO3,混匀,25℃反应1h,测定在765nm波长处吸光度,计算稀释液多酚浓度(mg/L)。2.3抗逆效应试验2.3.1dpph清除率测定取粗提物和各极性部分萃取物稀释液适量,加入6.5×10-5mol/LDPPH溶液2mL,快速混匀,30min后测定在516nm处的吸光度,计算DPPH清除率。清除率/%=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100式中:Ac为未加抗氧化剂时DPPH溶液的吸光度;Ai为加抗氧化剂后DPPH溶液的吸光度;Aj为提取液在测定波长的吸光度。2.3.2抗氧化能力的测定按总抗氧化能力检测试剂盒要求准备工作液。取0.1mL粗提物和各极性部分萃取物稀释液置于试管中,加入检测试剂2.0mL,混合均匀,在37℃恒温水浴箱反应30min,于520nm处测定吸收度值(OD)。在37℃时。每分钟每毫升样品液使反应体系的吸光度值每增加0.01时,为一个抗氧化能力单位。总抗氧化能力=(测定管OD-对照管OD)×反应液(mL)×样品测试前稀释倍数/0.01×30×取样量(mL)2.3.3abts抑制率测定根据文献,配制ABTS自由基工作液。取粗提物和各极性部分萃取物稀释液适量,加入4倍体积ABTS自由基工作液,静置10min后测定在405nm处的吸光度。计算ABTS抑制率。抑制率=[1-(A样品-A样品空白)/(A阳性对照-A阴性对照)]×100%式中:A阳性对照为1体积溶剂与4体积ABTS自由基工作液的吸光度;A阴性对照为4体积溶剂的吸光度;A样品为1体积样品与4体积ABTS自由基工作液的吸光度;A样品空白为1体积样品与4体积溶剂的吸光度。3结果与讨论3.1多酚含量结果采用Folin-Ciocalteu法测定各提取物多酚含量结果见表1以及图1。可以看出,玫瑰茄粗提物和各萃取物的多酚含量由高到低依次为:粗提物>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>氯仿萃取物>石油醚萃取物。3.2萃取液抗氧化活性采用DPPH法、试剂盒法、ABTS测定各提取物总抗氧化活性结果见表2以及图2~图4。可以看出,玫瑰茄粗提物和各萃取液对DPPH自由基清除能力、还原Fe3+能力以及ABTS自由基抑制能力有显著差异,其活性由高到低均为:粗提物>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>氯仿萃取物>石油醚萃取物。其中,玫瑰茄粗提物的DPPH自由基清除能力、还原Fe3+能力相当或强于BHT,而对ABTS的抑制作用为BHT的50%左右,说明玫瑰茄粗提物具有很强的抗氧化能力。3.3玫瑰茄抗氧化能力的研究对玫瑰茄提取物的抗氧化活性与多酚含量测定结果进行相关性分析,并将DPPH法、试剂盒法、ABTS法等3种抗氧化方法之间进行相关性分析,结果见表3。可以看出,Folin-Ciocalteu比色法测定玫瑰茄各萃取物和粗提物多酚含量的结果与3种抗氧化方法的相关因子大于0.95,表明玫瑰茄中的酚类与其抗氧化能力密切相关;其中多酚含量与ABTS抑制率值的相关因子为0.99,说明玫瑰茄中的多酚物质有极强的ABTS抑制能力;DPPH法与试剂盒法、DPPH法与ABTS法的相关因子均接近0.85,说明DPPH法和其他2种方法之间具有较好的相关性,以及玫瑰茄粗提物和各萃取液可清除多种自由基。4抗氧化活性研究已有文献研究多酚的较优提取范围,另有李氏等研究发现,玫瑰茄有良好的抗氧化作用。但鲜见玫瑰茄多酚与其抗氧化能力相关性方面的研究。通过体外抗氧化试验,考察玫瑰茄各提取部位DPPH清除能力、总抗氧化能力和ABTS抑制能力,将它们与BHT进行对照,并对不同极性部分进行多酚含量测