银杏叶提取物egb761抗心律失常的机制研究

银杏叶提取物egb761抗心律失常的机制研究

银杏作为一种药物使用于哮喘和支气管炎的治疗。EGB761是标准的银杏叶提取物,主要活性成份为黄酮类和萜类,具有改善细胞代谢,清除自由基以及促进微循环等广泛的药理作用。实验证实EGB761能显著减少心肌缺血再灌注心律失常。本文旨在观察EGB761对由乌头碱、氯化钡等诱发动物心律失常以及对乳头肌动作电位各项电生理参数的影响,为临床银杏叶及其制剂防治心律失常提供实验依据。一、材料和方法1.材料表面(1)sd大鼠与肝鼠的急性毒性实验选用本校实验动物中心提供的健康雄性SD大鼠与豚鼠。将250~300g大鼠随机分为对照组,复方丹参组,银杏叶提取物(EGB761)组(以下简称EGB组)。(2)银杏叶提取物氯化钡为上海化工实验药厂产品,乌头碱为美国Sigma公司产品,银杏叶提取物(EGB761)由浙江康恩贝药业有限公司惠赠,复方丹参注射液为上海第九制药厂生产。(3)u3000酸、碱和糖等混合气体饱NaCl137.0,KCl5.4,CaCl21.8,MgCl20.5,NaHCO323.8,NaH2PO40.4,葡萄糖11,用95%O2和5%CO2混合气体饱和,pH=7.4。2.银杏叶提取物ebc761的诱导致血药浓度测量(1)?银杏叶提取物(EGB761)预防给药抗乌头碱诱发心律失常实验:麻醉动物用20%乌拉坦按0.8ml/100g腹腔注射,仰卧固定,颈静脉插管备用;对照组经静脉注射生理盐水(0.1ml/100g),复方丹参组经静脉注射复方丹参注射液(100mg·0.1ml-1·100g-1);EGB组经静脉注射EGb761(100mg·0.1ml-1·100g-1),2min内注射完,稳定10min后由颈静脉通过微量恒速注射泵恒速注入乌头碱溶液(6μg·0.2ml-1·min-1),通过X-JⅡ型心电监视仪(上海医用电子仪器厂产品)密切观察并记录Ⅱ导联心电图,并准确计算诱发异常心电图氯化钡的用药剂量。银杏叶提取物(EGB761)为实验前新鲜配置,加入灌流液中。(2)?银杏叶提取物(EGB761)预防给药抗氯化钡诱发心律失常实验:实验步骤基本同前,不同处在于三组注射EGB761稳定10min后由颈静脉通过微量恒速泵恒速注射4%氯化钡(0.2ml/min)。(3)?银杏叶提取物(EGB761)对豚鼠乳头肌动作电位的影响:取豚鼠体重250~350g,雌雄不拘,重击后脑致昏,迅速开胸取出心脏,置于37℃,95%O2和5%CO2饱和的台氏液中,解剖分离出右心室乳头肌,用0号不锈钢针将标本固定于恒温(36℃±0.5℃),恒流(5ml/min)的灌流槽底部。刺激电极的尖端直径为0.5mm,以尖端裸露的双极不锈钢电极,作细胞外刺激。刺激器(NIHONHONDESEN7103)经隔离器输出波宽1ms、强度为阈值1.5倍的刺激波,刺激频率为1Hz。记录电极为充以3mol/LKCl的玻璃微电极,电极电阻10~15MΩ。用微操纵器(NARISHIGE)将电极插入心肌细胞内引出正常形态的动作电位,信号经微电极放大器(NIHONKOHDEN)放大后输入双线示波器中显示,同时经SMUP-PC型生物信号处理系统,经MCP2000软件对其显示、储存及分析。(4)?统计处理:实验结果以x¯±sx¯±s表示,组间资料用团体t检验。二、结果1.室颤及停工的剂量实验结果显示,对照组在静脉给乌头碱平均剂量达0.065mg/kg时出现室性早搏,剂量达0.085mg/kg时发生室速,剂量达0.115mg/kg时诱发室颤,当剂量增加至0.142mg/kg时则导致心跳停搏。而EGB761组与复方丹参注射液组则明显提高了乌头碱诱发的室早、室速、室颤及停搏的剂量。经t检验,EGB761组与复方丹参组同对照组比差异均具有显著性意义(P<0.05~0.01),尤其EGB761组与对照组比较差异有显著性意义(室早,室颤和停搏的剂量P<0.01),详见表1。2.复方丹参组、ebc71组与对照组比较EGB761组和复方丹参组均使氯化钡诱发的大鼠室早,室速,室颤及致死剂量增加,而复方丹参组与EGB761组两者比较差异无显著性意义(P>0.05),但乃可看出出现各种室性心律失常的剂量相比EGB761组大于复方丹参组。详见表2。3.无药物作用30min时动作电位以刺激频率为1Hz及正常台氏液灌流标本60min后,记录心肌细胞动作电位,待其波形稳定30min后开始实验并记录动作电位各项电生理参数,此数值作为对照值(n=8)。实验时换用含不同浓度EGB761的台氏液灌流标本30min(因为药物效应较缓慢,需30min才可达稳态),此时记录的动作电位各项参数与用药灌流前对照值比较,并以无药物的正常台氏液洗回验证药物的效应(每一种浓度n=8)。结果显示:当剂量低于25mg/L时,药物作用60min对动作电位形态变化甚微;当剂量在25~75mg/L范围内,药物作用10min时动作电位时程开始逐渐缩短,并在30min内达到相对稳定;与对照值相比,本实验选用的25mg/L,50mg/L和75mg/L分别使APD50缩短5.8%,9.4%和13.6%;APD90则分别缩短4.4%,8.4%和12.0%,且呈剂量依赖性;这一效应可被无EGb761的正常台氏液洗回(n=8)。剂量继续增大至100mg/L,30min内动作电位形态变化与75mg/L效应无显著性差异(n=8,P>0.05)。详见表3。三、抗心律失常机制EGB761是银杏叶的一种标准提取物,含24%黄酮类(银杏黄酮甙A、B、C)和6%萜类(银杏内酯和白果内酯)。有资料表明银杏内酯可抑制PAF引起的心律失常,提高G毒毛旋花子甙引起心律失常的阈值剂量。EGB761能减少心肌缺血再灌注大鼠心脏各种室性心律失常发生率、室早的发生数目以及室速和室颤的发生时间。而本实验通过大鼠整体实验表明EGB761有明显的抗心律失常的作用。乌头碱和氯化钡引起的心律失常机制与心肌细胞膜对Na+、K+、Ca2+离子通透性有关,乌头碱使心肌兴奋性增高,心率加快,收缩加强,继而出现心律失常。电生理实验也证明乌头碱能促进Na+内流,加速心肌细胞0相去极化速率,诱发心律失常。Ba2+通过慢通道过量进入心肌细胞,导致异位节律而产生心律失常。EGB761中的黄酮类化合物有扩张冠状血管,改善血管末梢,抑制PAF等作用,促进循环作用,抑制心脏缺血性损害和血栓形成及清除氧自由基的作用。萜类化合物尤其是银杏内酯B(BN-52021)亦有清除氧自由基、拮抗PAF的作用。有实验表明EGB761能通过清除NO,减少OFR的生成。实验研究还表明EGB761能显著减少离体大鼠心脏缺血再灌注后心肌组织MDA含量并与离体大鼠心脏心律失常改善程度密切相关。本项实验乳头肌动作电位各参数显示EGB761可缩短动作电位时程,其中APD50缩短较APD90明显,就APD50缩短效应机制分析,期间所涉及的主要离子成分为Ca2+与K+,这可能与Ca2+内流减少以及(或)K+外流增加所致,具体细节尚待今后跨膜离子流水平研究进一步阐明。心律失常的机制比较复杂,影