羊传染性脓疱皮炎的流行病学特点及防治

羊传染性脓疱皮炎的流行病学特点及防治

绵羊感染（cpdv）是由痘病毒科和副痘病毒科引起的羊感染病毒。它被称为由羊口病毒（cpdv）引起的绵羊、山羊和人类的急性、接触性和嗜上皮性传染病。它以羊、山羊和其他动物的嘴唇、鼻孔周围的伤口、口腔粘膜和乳头皮肤形成丘、水泡、脓皮和肉皮屑。主要是皮肤和粘膜的增生性疾病。早在1787年就有了对该病的描述,澳大利亚、新西兰、南非、希腊、印度、美国、意大利等多个养羊国家均有该病发生和流行的报道。我国有关该病的文献记载最早始于1955年,目前该病广泛分布于世界各养羊国家和地区并呈不断上升趋势。该病主要危害羔羊和部分成年羊,羔羊发病率高达100%,若继发或混合感染其他病原微生物,则病死率较高。该病可以通过伤口感染饲养人员表现为手背、指间和前臂部疱疹和破溃。因此,羊传染性脓疱的暴发和流行不但严重危害养羊业的健康发展而且威胁人们的身体健康,是一种危害较为严重的人畜共患传染病。目前对于口疮的诊断主要依靠临床症状,但是往往从症状上易和反刍动物的其他水泡性疾病以及羊的溃疡性皮炎相相混淆,据报道2001年英国口蹄疫中有23%为误诊,其中有一部分就是和羊痘和羊口疮病相混淆。本文就近年来国内外羊口疮病临床诊断、组织病理学诊断、病原学和血清学诊断技术进行概述,以期对该病的诊断和防控提供参考。1蹄疫病的主要原理根据ORFV嗜好组织的损伤特征能够诊断羊口疮,但在具体的临床诊断中,应该与羊痘、口蹄疫、葡萄球菌引起的皮炎、嗜皮性细菌病以及溃疡性皮肤病加以鉴别。在临床上区分羊ORFV感染和口蹄疫病毒(Footandmouthdiseasevirus,FMDV)主要依据是ORFV能够引起增生性损伤而FMDV不会引起此种性质的病变。溃疡性皮肤病主要以皮肤、面部、足部及生殖器外部形成溃疡和结硬皮痂为特征,这种损伤也不会进一步扩散。与羊口疮相比,嗜皮性细菌病的典型特征是在表皮形成连接成簇的极小的脓疱,除非羊过度疲劳,否则此病也很少引起显著的皮肤损伤。葡萄球菌引起的皮炎以脱发为主要特征。另外,羊痘和羊口疮病毒感染的鉴别主要通过电子显微镜观察、组织病理学检查、免疫组化、血清学试验、聚合酶链式反应等加以诊断和鉴别。2口腔感染型病羊采食、咀嚼、吞咽困难,流涎、消瘦、衰弱、精神沉郁,食欲减退或废绝、反刍减少,嘴角、上下唇、鼻镜和鼻孔边缘有水疱或脓疱,破溃形成黄色或黑褐色痂块,口腔黏膜潮红,齿龈、颊部及软腭上有水疱或脓疮,多数可见鲜红溃疡面,口腔内脓疱破溃后经久不愈,表面有膜状淡黄色沉积物。病羊经剖检可见面部皮下组织呈胶样浸润,有化脓性坏死,气管充血,出血,下颌淋巴结肿大。若有葡萄球菌、坏死杆菌等感染,会造成病情恶化,导致羔羊死亡。有继发感染的情况下可见中性粒细胞浸润,真皮层可见单核细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润,但该诊断方法只能做辅助性诊断,没有针对性。3羊、羊病害发病时间本病自然感染主要由购入病羊或带毒羊而转入健康羊群,引起群发,或是利用受污染的畜舍或草地而感染,潜伏期一般为4d~8d,易在羊引进7d~21d发病,常在15d左右暴发。绵羊、山羊以3月龄~6月龄羔羊发病最多,常呈群发性流行,羔羊发病率高达100%,成年羊同样易感,但发病较少,多为散发。本病无明显季节性,但以春夏季发病较多。病羊和带毒羊是主要传染源,特别是病羊的痂皮带毒时间较长。病毒主要通过接触感染,健康羊常因皮肤,黏膜擦伤处接触到病源而感染发病。4疾病的原始诊断4.1病毒颗粒及表面结构电子显微镜下观察病毒形态是一种经典和快速的羊口疮诊断方法,在电镜下可见病毒颗粒长约220nm~250nm,宽约125nm~200nm,表面结构为管状条索斜形交叉呈“8”字型缠绕线团状。但是羊口疮病毒和其他痘病毒大小相近无法通过电子显微镜鉴别,给确诊造成一定困难。4.2副龙病毒形态鉴定免疫电镜法是应用病毒特异性抗体吸附口疮病毒,再在电子显微镜下观察副痘病毒形态,这种免疫法和电镜法相结合增加了该诊断方法的特异性,目前使用病毒单克隆抗体特异性吸附口疮病毒进行免疫电镜观察。4.3细胞外分离细胞病毒分离鉴定是羊口疮诊断的金标准,原代细胞和传代细胞都可用于羊口疮病毒的分离。在原代细胞中羔羊睾丸细胞和肾细胞是最常用的病毒分离细胞,除此之外胎牛肌细胞、胎羊真皮细胞、牛睾丸细胞、胎牛肺细胞、胎羊肾细胞、胎羊肌细胞也可用于病毒分离。病毒在细胞中盲传1代~2代即可产生细胞病变,表现为细胞变圆、退化和脱落,染色后病毒感染的细胞内可见嗜酸性小体。4.4pcr和cpv的比较不同的聚合酶链反应(PCR)体系都可用于口疮感染的快速检测。一种基于B2L基因的半套式PCR方法能够检测临床样本中低拷贝数量的病毒粒子,基于B2L或VIR基因的PCR诊断方法已经广泛用于诊断副痘病毒属的感染。PPP4和PPP1的引物组合能扩展所有的副痘病毒,而PPP3和PPP4的引物组合则可以扩增口疮病毒特有的基因片段,病毒的细胞分离和和中和试验与PCR方法的复合率为85.7%,这说明PCR方法的敏感性高于病毒分离鉴定。另外,利用A29基因(413bp)和H3L基因(708bp)的双重PCR方法被认为在鉴别CPV和PRFV方面有相当的潜力。向智龙等以山羊痘病毒ITR基因和羊口疮病毒H2L基因为基础,建立了特异性和敏感新高的双重PCR诊断方法。4.5real-timepcr诊断方法基于B2L基因扩增的real-timePCR技术已经广泛用于临床样本中病毒检测和定量。4.6基因分型对口胞菌基因型的影响基于羊口疮病毒基因组的限制性片段长度多态性(RFLP)分析是研究副痘病毒分子特征较好的工具,可以从副痘病毒成员中区分出口疮病毒,EcoRⅠ、BamHⅠ和HindⅢ是3种常用的限制性内切酶,有报道使用DraⅠ限制性内切酶酶更利于口疮病毒的基因分型。使用酚/氯仿抽提法可以从超速离心纯化的病毒和病变结痂中获得病毒DNA,研究证明系统进化分析可用于副痘病毒的鉴定和不同毒株间的遗传进化关系分析。4.7lamp方法的扩增效果向智龙等以羊口疮病毒B2L基因保守区为模板设计了4条引物,经过条件摸索,建立了特异性和敏感性较高的羊口疮环介导等温扩增(LAMP)技术。用建立的LAMP方法对ORFV阳性样品扩增产物的电泳呈特征性梯状条带,而绵羊痘病毒、蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、丝状支原体山羊亚种、山羊痘病毒及健康山羊皮肤的扩增产物电泳后均无扩增条带。对ORFV的最低检出量为5.3fg,比常规PCR方法灵敏度高1000倍。5血清学诊断5.1病毒的中和试验血清中和试验和补体结合试验是常用的抗体诊断试验,检测疑似血清当血清中和滴度大于8或者补体结合试验大于20,时可认为口疮感染阳性。5.2配合使用不同动物的免疫胶原蛋白使用纯化的口疮病毒作为抗原的间接ELISA方法,再配合使用不同动物的免疫球蛋白可以用于检测不同种属动物的口疮病毒抗体,这种方法也被成功地应用于骆驼、羊和人的口疮感染检测。5.3其它蛋白反应在Westernblot试验中,感染动物的血清可以和羊口疮病毒约40ku的免疫原性蛋白反应,病毒的其他蛋白如20ku和22ku也可以与感染血清发生反应。使用兔抗羊口疮病毒多克隆抗体和纯化的羊口疮病毒进行Westernblot可见有66、39、22、56、24、25ku的反应条带,39ku和22ku抗原性强的膜蛋白可被免疫系统识别。6血清学诊断技术应符合现有的检测技术综上