痛风利湿口服液质量标准研究

痛风利湿口服液质量标准研究

风湿剂是大黄、山楂、王不留行等中药制备的复方制剂。具有外散风邪、内通经络、风湿关节痛、四肢瘫痪、阴疽病和高脂血症的功效。为控制该药的内在质量,确保用药安全有效,本试验中建立了方中大黄、山楂、王不留行等药材的薄层色谱定性鉴别,以及大黄素含量的高效液相色谱测定方法,为痛风利湿口服液质量控制提供依据。1超声波清洗器设备玻璃点样毛细管(华西医科大学仪器厂);硅胶G薄层板(烟台大学生物科学与工程研究所);CS-15R型低温离心机(美国Beckman公司);电子天平(Sartorius公司);KQ-500E型医用超声波清洗器;高效液相色谱仪(HPLC125/166,美国Beckman公司)。大黄素对照品(批号为0756-9707)、熊果酸对照品(批号为110742-200313)、王不留行对照药材(批号为1094-200001),均由中国药品生物制品检定所提供;其他试剂均为分析纯;痛风利湿口服液(自制)。2方法和结果2.1不同种类样品的鉴别大黄:取本品20mL,加盐酸1.5mL,回流提取30min,加乙醚萃取3次,每次10mL,分取乙醚液,水洗2次,每次10mL,合并乙醚液,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。再取缺大黄样品,同法制成阴性对照品溶液。另精密称取大黄素对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述溶液各2～5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,在日光灯下检视。供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应的位置显相同颜色的斑点,而阴性对照品溶液色谱中则无此斑点,见图1A。山楂:取本品20mL,加硅藻土10g,混匀后加乙醚20mL,超声处理15min,滤过,滤液挥干,残渣加无水乙醇1mL使溶解,作为供试品溶液。取缺山楂的阴性样品,同法制成阴性对照品溶液。精密称取熊果酸对照品,加无水乙醇制成1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述溶液各2～5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯(20∶5∶8)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于110℃加热10min。供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点,而阴性对照品溶液色谱中则无此斑点。见图1B。王不留行:取本品10mL,加甲醇10mL,加热回流30min,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液。取缺王不留行的阴性样品,同法制成阴性对照品溶液。精密称取王不留行对照药材2g,磨成粉末,加甲醇20mL,回流30min,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2mL使溶解,作为对照品溶液。吸取上述溶液各2～5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(15∶7∶2)的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以碘化铋钾溶液显色。供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点,而阴性对照品溶液色谱中则无此斑点。见图1C。2.2重量测定2.2.1流动相、流速色谱柱:DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(85∶15);流速:1.0mL/min;柱温:室温;检测波长:254nm。2.2.2供试品溶液的制备精密称取干燥至恒重的大黄素对照品6mg,加无水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)使溶解,定容至100mL,作为对照品溶液。精密吸取10mL样品,加盐酸1mL,置水浴上加热回流30min,冷却后,用三氯甲烷萃取3次,每次10mL,取三氯甲烷层液合并,水洗2次,蒸干,残渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶解,定容为10mL,低温离心(13000转/min)5min,取上清液作为供试品溶液。按处方组成,取缺大黄以外的其余药材,按制备工艺要求制成不含大黄的阴性样品,再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。2.2.3稳定性及回收试验精密度试验:分别精密吸取质量浓度为48.0μg/mL的对照品溶液,连续进样5次。结果的RSD=0.9%,表明仪器精密度良好。重复性试验:取同一批号的样品,依法制备供试品溶液并测定。结果的RSD为3%(n=5),表明方法重复性较好。稳定性试验:取同一供试品溶液20μL,分别于1,2,4,6,8,12h时进样测定。结果的RSD=3%(n=6),表明供试品溶液中大黄素在12h内稳定。加样回收试验:精密吸取已知含量的样品(含量为1.7251μg/mL)3份,每份10mL,分别加入15,30,45μg/mL3种质量浓度的大黄素对照品溶液各1mL,按供试品溶液制备方法平行操作3次,定容至10mL。分别精密吸取3个质量浓度的溶液1mL,各用甲醇定容至10mL,进样测定,计算回收率。结果见表1。2.2.4样品含量的测量按拟订的方法,测定3批样品溶液中大黄素制的含量。结果见表2,痛风利湿口服液样品中大黄素含量不低于1.7μg/mL。3流动相甲醇-0.1%磷酸溶液的制备用薄层色谱法鉴别痛风利湿口服液中的大黄时,笔者曾采用超声方法直接提取大黄素,结果斑点不明显,后改作用回流提取,结果斑点较清晰。对照品溶液紫外光谱扫描测定,结果供试品溶液在254nm波长处有较强吸收峰,故确定检测波长为254nm。曾使用甲醇-0.1%磷酸水溶液的比例为80∶20,此流动相时要检测的大黄素出峰时间靠后,调整比例为85∶15后,出峰时间在13～14min之间,可节约有效时间。而再增大甲醇的比例,则大黄素峰与前一个峰分开不明显,不利于检测,故流动相甲醇-0.1%磷酸水溶液的最佳比例为85∶15。在供试品液的制备中,开始使用加入甲醇后超声提取,蒸干后用甲醇溶解,离心后作供试品溶液。此方法杂质干扰峰太多,且分离效果不理想,后改作加少量盐酸回流提取,用三氯甲烷萃取,再用水洗,回收滤液,蒸干后用乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶解,图谱比较理想,且分离效果显著,锋形相对尖锐。空白干扰试验:取2.2.2项下3种溶液,按拟订的色谱条件进行检测。结果供试品溶液色谱中呈现与对照品溶液保留时间相同的色谱峰(见图2),处方中其他药材对大黄素的测定无干扰。线性关系考察:精密吸取对照品溶液2,4,6,