护肝软胶囊质量标准的研究

护肝软胶囊质量标准的研究

中国是一个高发病率和高感染率的国家。肝炎是中国最常见的疾病，严重危害人民健康。现代医学研究证实护肝片对四氯化碳、D-半乳糖胺所致小鼠肝损伤而引起的血清谷丙转氨酶升高具有明显的降低作用;对氢化可的松所致的小鼠免疫功能低下有明显的对抗作用,可使单核噬细胞、吞噬指数和吞噬活性明显增强。综上所述,护肝片具有明显的保肝降酶、增强机体免疫功能的作用,疗效确切,无毒副作用,是治疗慢性乙型肝炎的理想药物,值得进一步推广使用。而护肝软胶囊是在护肝片的基础上改剂型而来,由柴胡、茵陈、板蓝根、五味子、猪胆粉、绿豆等组成,具有疏肝理气、健脾消食,降低转氨酶作用,用于慢性肝炎及早期肝硬化等疾病的治疗。为控制制剂质量,本研究建立了薄层色谱及高效液相色谱测定的方法。1材料和方法1.1仪器和试剂盒1.1.1聚酰胺薄膜、超声波清洗器、水浴锅紫外线分析仪(天津天分分析仪器厂SB-2A),硅胶GF254薄层板(10cm×20cm青岛海洋化工厂),聚酰胺薄膜(浙江台州市路桥四青生化厂)HP1100高效液相色谱仪(惠普公司),超声波清洗器(昆山市超声仪器厂KQ3200),水浴锅(北京医疗仪器厂GB11240-89)1.1.2试剂:胡萝卜干-苏-木的制备五味子醇甲(中国药品生物制品检定所),绿原酸(中国药品生物制品检定所),猪胆粉对照药材(中国药品生物制品检定所),柴胡对照药材(中国药品生物制品检定所),显色剂10%硫酸乙醇溶液,2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液为显色剂。甲醇(色谱纯),水为蒸馏,其他试剂均为分析纯,护肝软胶囊自制(20031105,20031106;20031107)。1.2实验方法1.2.1薄标记试验1.2.1.阴性干浸膏的测定取内容物4.5g,放于研钵中,加乙醇10ml,研磨5min,过滤,将滤液蒸干,加乙醇1ml溶解,作为供试品溶液。取阴性干浸膏粉末1g及对照药材3g同法制备阴性对照溶液及对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验,吸取上述溶液各8μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂,置紫外灯(254nm)下检视。结果供试品色谱中在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色斑点,阴性样品在相应位置无干扰。1.2.1.阴性溶液的制备参照文献方法,取内容物2g,加石油醚30ml(60～90℃)超声30min,弃去石油醚液,残渣加甲醇20ml超声提取20min,过滤,滤液蒸干,加甲醇2ml溶解,作为供试品溶液。同法制得阴性溶液。另取绿原酸适量加甲醇配制成每毫升含1mg的绿原酸对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验,吸取上述溶液各1μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以36%醋酸为展开剂,置紫外灯(365nm)下检视,结果供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色斑点,阴性样品在相应位置无干扰。1.2.1.对照药材溶液取内容物3g,加乙醇15ml,在研钵中研磨3min,过滤,将滤液蒸干,残渣加乙醇1ml溶解作为供试品溶液。同法取制得阴性溶液。取猪胆粉药材2g制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验,吸取上述溶液各5μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸-甲醇(20∶25∶3∶2)上层溶液为展开剂,以10%硫酸乙醇溶液为显色剂,结果供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色斑点,阴性样品在相应位置无干扰。1.2.1.对照药材溶液的制备参照文献,取内容物2g,加水30ml溶解,加乙醚振摇提取两次,每次15ml,合并乙醚液,弃去乙醚液,水液加水饱和正丁醇振摇提取两次,每次15ml,合并正丁醇液,加入氨试液40ml,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1ml溶解作为供试品溶液。同法制得阴性溶液。另取柴胡对照药材1.5g,加水50ml水浴回流1h,放冷,滤过,后同法制备对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验,吸取上述溶液各10μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)为展开剂,2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液为显色剂,60℃加热至斑点显色清晰,紫外灯(365nm)下检视。结果供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色斑点,阴性样品无干扰。1.2.2高效液试1.2.2.柱温和检测波长色谱柱:迪马C18(4.6mm×250mm);流动相:甲醇-水(60:40)为;柱温:室温;检测波长:250nm。五味子醇甲分别在215nm和250nm处有最大吸收,因为样品在低波长215nm处有干扰,因此确定本品的检测波长为250nm。1.2.2.溶剂的加标试验(1)对照品溶液的制备取五味子醇甲对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液,即得。(2)供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物,混匀,取约0.7g,精密称定,加醋酸乙酯25ml,加热回流30min,放冷,滤过,用适量醋酸乙酯分次洗涤滤渣及容器,洗液与滤液合并,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,即得。1.2.2.3-测量方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。2结果2.1标准曲线的绘制取对照品适量,溶解并稀释成浓度分别为0.0063、0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2mg/ml的溶液,精密吸取10μl,注入液相色谱仪,以浓度(mg/ml)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程为Y=21920X-6.4148,r=0.9999。表明五味子醇甲在测定浓度范围内呈良好线性(图1)。2.2积分值精密吸取同一供试品溶液10μl,重复进样5次,积分值结果分别为819.7、816.0、817.2、818.8、813.6,均值为817.1,RSD为0.29%。2.3量计算重复结果精密称取本品内容物约0.70g共五份,按照含量测定方法提取制备测定含量计算重复结果,结果分别为,0.6162mg/g、0.6074mg/g、0.6126mg/g、0.6128mg/g、0.5914mg/g,均值为(0.6081±0.0984)mg/g,RSD为1.60%。2.4持续加样回收率测定精密称定已知含量的样品(0.6162mg/g)约0.35g5份,精密加入五味子醇甲对照品,依法提取测定,计算回收率,结果见表1,回收率平均值为100.40%,RSD为1.4%。2.5%是测定结果本文采用试验方法对5批样品进行了五味子醇甲的含量测定,测定结果分别为0.390mg/粒、0.370mg/粒、0.380mg/粒、0.390mg/粒、0.395mg/粒,平均含量为0.385mg/粒,RSD为2.3%。3药料中药物提取条件的优化本文采用薄层色谱法对处方中主药五味子、柴胡、茵陈、猪胆粉进行鉴别,经多次实验验证,方法简便,专属性强,重现性好,为护肝软胶囊提供专属性强的鉴别方法,有效地控制了制剂的质量。本研究参考中国药典2000年版一部护肝片和五味子药材的含量测定方法,我们选用高效液相色谱法作为本