复方甘草酸苷对大鼠亚急性酒精性肝损伤的保护作用

复方甘草酸苷对大鼠亚急性酒精性肝损伤的保护作用

酒精性肝病是指因长期饮酒而导致的肝脏疾病。肝脏是酒精代谢的主要场所,饮酒过量,乙醇在体内蓄积,对肝脏的损伤表现为肝脏水肿、脂肪化及不同程度的纤维化等。复方甘草酸苷(StrongerNeo-MinophagenC,SNMC)是由甘草酸苷、甘氨酸和盐酸半胱氨酸等成分组成的一种复方制剂,可以降低氨基转移酶、保护肝细胞膜、改善肝功能和修复组织损伤,具有抗炎、抗病毒、免疫调节和类激素样等作用。目前对亚急性酒精性肝损伤的相关报道较少见,通过研究SNMC对肝损伤大鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的影响,探讨该药物对酒精所致大鼠亚急性肝损伤的保护机制。1材料和方法1.1实验动物选择健康雄性SD大鼠72只,重量(200±20)g,由咸宁学院动物中心提供。1.2snpc药剂56°红星二锅头白酒,北京红星股份有限公司生产。SNMC片剂购自深圳健安医药有限公司。ALT、AST、SOD和MDA检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.3snpc的配制适应性喂养1周后,将72只大鼠随机分为6组:空白组、模型组、SNMC低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照药葵花护肝片组。每日上午10点至10点半按1ml/100g灌胃:空白组和模型组灌蒸馏水,SNMC低、中、高剂量组分别灌浓度为0.15、0.30、0.60g/ml混悬液;阳性对照组灌0.15g/ml葵花护肝片混悬液。连续1周,每次给药2h后,除空白组给蒸馏水外,其余各组分别以1ml/100g灌胃稀释后酒精浓度为45%的白酒。1周后全部处死,检测相应指标。1.4肝脏指数的测量由公式:肝脏指数(%)=肝脏重量(g)/体重(g)×100%,计算每克体重的肝脏克数作为肝脏指数。1.5肝组织病理学检查取大鼠肝左叶,10%中性甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片,HE染色。光镜下观察肝组织形态和结构变化。1.6ast含量取全血分离血清,采用赖氏法检测ALT和AST含量;取部分肝脏,并制备成10%的肝匀浆,采用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,用硫代巴比妥酸比色法检测MDA含量。1.7统计分析实验数据以x¯±sx¯±s表示,应用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析,组间比较采用t检验,以P<0.05为有统计学意义。2结果2.1模型大鼠不良反应发生率比较72只大鼠共有67只完成实验。实验期间,空白组、SNMC中剂量组、葵花护肝片组12只大鼠全部存活;模型组有2只大鼠不能耐受酒精灌胃刺激而死亡,余下大鼠与空白组比较其体重减轻,嗜睡,毛发光泽度较差,且反应迟钝;SNMC低、高剂量组分别有1只和2只大鼠,在酒精灌胃时,液体误入气管,导致大鼠窒息而死;SNMC各剂量组相对模型组大鼠,其活动相对较多,食欲和整体状态较好。2.2肝脏指数增加与空白组相比,模型组大鼠终体重无明显变化(P>0.05),但肝脏指数增加(P<0.05);与模型组相比,SNMC各剂量组和葵花护肝片组大鼠终体重亦无明显变化(P>0.05),而高剂量组和葵花护肝片组大鼠肝脏指数减小(P<0.05)(表1)。2.3肝治疗大鼠肝两种结构的结构变化光镜下空白组大鼠肝小叶结构清晰,肝细胞索排列整齐,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列。肝脏细胞形态规则,无异常改变。模型组大鼠肝小叶界限不清,其结构遭到破坏,肝细胞明显肿胀,胞质疏松并出现散在的大小不等的脂滴空泡。部分肝细胞发生肿胀,肝小叶内散在肝细胞点状坏死,汇管区可见炎性细胞浸润(图1:A)。与模型组比较,SNMC各剂量组之间差异不明显,可见肝细胞多呈放射状排列,细胞分界较清楚,肝细胞肿胀显著减轻,脂肪变性、细胞浸润及点状坏死程度均降低(图1:B、图1:C、图1:D)。2.4snpc对大鼠血清alt活性的影响与空白组相比,模型组大鼠血清ALT和AST活性显著升高(P<0.01)。与模型组相比,SNMC高剂量组和葵花护肝片组大鼠血清ALT活性显著下降(P<0.01);其低、中、高剂量组和葵花护肝片组大鼠血清AST活性下降(P<0.05)(表2)。2.5snpc对大鼠肝组织sod活性的影响与空白组比较,模型组大鼠肝组织SOD活性显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,SNMC中、高剂量组大鼠肝组织SOD活性升高(P<0.05),葵花护肝片组SOD活性显著升高(P<0.01);各组MDA含量降低(P<0.05)(表3)。3snec对大鼠肝抗氧化活性的影响SNMC临床上适应于治疗慢性肝病,改善肝功能;可以延缓肝纤维化小鼠和暴发性肝功能衰竭小鼠的病情进展,但对亚急性酒精性肝损伤的作用效果目前研究不多。文中采用酒精灌胃法建立大鼠亚急性肝损伤模型,借以初步探讨SNMC对亚急性酒精性肝损伤的相关作用机制。乙醇在肝脏代谢过程中可产生大量自由基,例如O-2、H2O2、OH-、ONOO-等,它们可使肝细胞膜发生脂质过氧化反应。细胞膜遭到破坏,转氨酶释放入血,使血中ALT和AST活性升高。而SOD作为抗氧化体系中的重要组成部分,可阻断自由基对肝细胞造成的损害,并及时修复受损细胞。酗酒使SOD活性下降,自由基不能被有效清除,进而损伤肝细胞,其脂质过氧化反应的终末产物MDA增加。实验模型组大鼠与空白组比较,血清ALT和AST活性显著增加,肝组织SOD活性显著降低,MDA含量显著升高。因此该亚急性酒精性肝损伤大鼠模型的建立是成功的,实验体系是可靠的。结果显示,SNMC各剂量组可降低血清AST活性,高剂量组可明显降低血清ALT活性。说明SNMC能稳定肝细胞膜结构,对大鼠亚急性酒精性肝损伤具有保护作用。该药物在临床上可改善转氨酶,对肝组织损伤也有抑制作用。此外实验还发现SNMC中、高剂量组