肝郁气滞证乳腺增生大鼠模型的建立

肝郁气滞证乳腺增生大鼠模型的建立

现代医学认为，乳房增生是一种非炎症和肿瘤的增生性疾病。许多国内外学者认为，其病因与分泌功能障碍和心理因素密切相关。这是乳腺癌的危险因素之一。它被认为是早期化疗，因此引起了人们的关注。在中医文献中乳腺增生病与“乳癖”的描述相似,在明代,陈实功就认为此病“由思虑伤脾,恼怒伤肝,郁结而成也”,指出本病的发生与肝气郁结有关。本研究初步建立了肝郁气滞证乳腺增生大鼠模型,并观察了该模型大鼠血清中激素水平的变化,现总结如下:1实验材料1.1实验动物SD大鼠,雌性,未孕,体质量180~220g,由南京中医药大学实验动物中心提供。合格证号:SYXK(苏)2002-0053。1.2黄体酮注射液苯甲酸雌二醇注射液,每支2mg,由上海通用药业股份有限公司生产,批号:051122;黄体酮注射液,每支20mg,由浙江仙琚制药股份有限公司生产,批号:050916。E2、P、PRL、T、ACTH放免试剂盒均由南京中医药大学附属医院江苏省中医院提供。1.3高速离心系统自动放免仪由南京中医药大学附属医院江苏省中医院提供;台式高速离心机由上海安亭科学仪器厂生产;DHG-9053A型电热恒温干燥箱由上海医用恒温设备厂生产;DHZ-C型大容量恒温振荡器由上海精胜仪器厂生产。2实验方法2.1模型设计2.1.1外加黄体酮5.按照文献复制大鼠乳腺增生模型:肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg(体质量),1次/d,连续20天。继而改用黄体酮5mg/kg(体质量),1次/d,连续5天。对照组每只肌注生理盐水0.2mL,连续注射25天,停药后饲养10天。2.1.2教育时间安排按照文献改进、复制不可预知的慢性应激刺激肝郁气滞大鼠模型:断食、断水24小时各5次;冰水游泳5分钟,共5次;45℃热环境5分钟,共5次;160次/min水平震荡30分钟,共5次;夹尾刺激1分钟,共5次;24小时明暗颠倒,共5次。上述刺激每日1种,随机安排,使大鼠不能预知次日的刺激,以避免产生适应,刺激时间共35天。2.2预测模型的复制SD未孕雌性大鼠,正常光照条件,自由饮水、饮食,在本实验室适应性饲养1周后,随机分为4组:(1)正常对照组8只,封闭盒整群饲养,每日肌注生理盐水0.2mL;(2)EP组8只,封闭盒整群饲养,按2.1.1法复制乳腺增生模型;(3)S组8只,封闭盒单只饲养,按2.1.2法复制肝郁气滞模型;(4)EP+S组8只,封闭盒单只饲养,按2.1.1法复制乳腺增生模型,同时按程序施加造模刺激。2.3指标报告2.3.1血清品质测定各组大鼠在末次处理后,禁食12小时,于眼眶后静脉丛取血2mL,37℃水浴15分钟,于2000r/min离心15分钟后分离血清,采用放免法测定血清E2、P、PRL、T含量。2.3.2血浆acth含量测定各组大鼠在末次处理后,禁食12小时,于眼眶后静脉丛取血1mL,置肝素抗凝管中,及时摇匀防止凝血,于1500r/min离心5分钟分离血浆,采用放免法测定血浆ACTH含量。2.4统计方法3结果3.1对大鼠血中两种指标的影响表1显示,EP组大鼠血中E2、PRL水平升高,P、T水平降低,与正常对照组比较差异明显(P<0.05);S组大鼠血中E2、ACTH水平升高,与正常对照组比较差异明显(P<0.05);EP+S组大鼠血中E2、PRL、ACTH水平升高,P、T水平降低,与正常对照组比较差异显著(P<0.01);EP+S组大鼠血中E2、ACTH水平升高,与EP组相比差异明显(P<0.05)。4肝郁气功证模型的构建西医认为,周期性的性激素分泌失调与乳腺组织对激素的敏感性增高是乳腺增生的主要发病机制。一方面,乳腺增生患者体内雌激素分泌增多,孕激素分泌不足;另一方面,患者体内泌乳素水平升高,泌乳素对乳腺组织有直接刺激作用,其还可抑制黄体期孕酮的分泌,刺激雌二醇的合成,从而导致雌孕激素比例失调。在雌激素持续刺激下,使乳腺组织增殖过度,导致乳腺增生。而中医理论认为发生乳腺增生病是由于肝失疏泄,冲任失调而致气血运行不畅,气滞血瘀痰凝结聚而成。古人认为“妇人之病,多起于郁”,这是由妇女易为情志变化的心理特点所决定的。国外文献报道,情绪的不稳定与女性乳房小叶增生有一定关系。近年来,在对乳腺增生及乳腺癌与人的个性的关系进行研究时发现,乳腺增生的患者大多具有紧张、不安、易怒等个性特征。随着医学模式的转变,乳腺增生病因的研究已突破了“内分泌障碍所致乳腺实质增生”纯生物学的定论,而更重视其社会、心理的致病性。应激理论与中医七情学说类似,不良生活事件所形成的心理应激的实质是情志病因,同时中医认为情志与肝的关系最为密切,在对心理应激的调节过程中肝起着决定性的作用。慢性应激动物模型也常被用作抑郁症的动物模型,因此用慢性应激的方法制作肝郁气滞证模型比较符合中医临床实际。在本研究中,笔者把造模雌鼠孤养,同时随机给予不同应刺激,包括断食、断水、冰水游泳、45℃热环境、60次/min水平震荡、夹尾、24小时明暗颠倒。一方面可使动物不能预知未来的刺激,避免适应现象的发生;另一方面更好地模拟临床情志异常引发肝郁气滞证的过程。传统的乳腺增生病模型多采用外源性雌激素造模,这仅适用于乳腺增生“病”这个“病”的模型,而“病”“证”结合的动物模型更符合现代中医研究的需要。本研究的结果显示:S组雌鼠血中应激激素ACTH、性激素E2水平升高,与正常对照组比较有明显的差异,表明本研究所用的不可预知的应激刺激可明显升高下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴活性,同时可刺激雌性大鼠雌激素的分泌。病症结合模型组,即EP+S组雌鼠血中E2、PRL、ACTH水平升高,P、T水平降低,与正常对照组有显著性差异,同时该组大鼠血中E2、ACTH水平升高,与EP组相