中国药科大学 分析化学课件 第18经典液相色谱法

第十八章经典液相色谱法

第一节概述液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀常压下输送流动相柱效较低分析周期长现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀高压下输送流动相柱效较高分析周期短第二节液-固吸附柱色谱〔一〕别离原理〔二〕常用吸附剂〔三〕吸附剂和流动相的选择〔一〕别离原理

各组分与流动相分子争夺吸附剂外表活性中心

利用吸附剂外表的活性吸附中心对不同组分的

吸附能力差异而实现别离〔二〕常用吸附剂：多孔、微粒状物质1.硅胶2.氧化铝3.聚酰胺1.硅胶〔SiO2·H2O〕结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构外表——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心外表硅醇基存在形式：吸附活性的大小顺序是：Ⅲ＞Ⅰ＞Ⅱ游离羟基Ⅰ束缚形Ⅱ活泼形Ⅲ适用：分析酸性或中性物质

硅胶吸附特性：1〕与极性物质或不饱和化合物形成氢键物质极性↑，吸附能力↑，k↑，tR↑强极性吸附中心，不易洗脱2〕吸水→失活→105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大→500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力表18-1硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系11/14/2023续前4.三者关系图示：组分吸附剂流动相极性活性小极性非(弱)极性活性大非极性或弱极性第三节、薄层色谱法〔一〕概述〔二〕定性参数〔三〕吸附剂的选择〔四〕展开剂的选择〔五〕薄层板的制备〔六〕定性与定量分析〔一〕概述1．定义：将固定相均匀涂布在外表光滑的平板上，形成薄层而进行色谱别离和分析的方法2．操作过程：见图示铺板→活化→点样→展开→定位(定性)/洗脱(定量)3．别离机制：吸附〔分配，离子交换，空间排阻〕4．特点：分析快速、灵敏、显色方便5．应用：药物杂质检查、纯度测定next图示图示L0L1L2〔二〕定性参数1.比移值Rf续前讨论Rf与K有关，即与组分性质〔溶解度〕以及薄层板和展开剂的性质有关色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱根本定性参数，说明组分的色谱保存行为续前1〕K↑大，Rf↓小2〕薄层板一定，对于极性组分展开剂极性↑大，Rf↑大〔容易洗脱〕展开剂极性↓小，Rf↓小〔不容易洗脱〕3〕Rf范围：0<Rf<1〔组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离〕Rf=0.2——0.8〔常用〕0.3——0.5〔最正确〕续前2.相比照移值Rs讨论参考物与被测组分在完全相同条件下展开可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性；参考物可以是后参加纯物质，也可是样品中组分相比照移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于13.影响比移值的因素1〕被别离物质的结构和性质2〕薄层板的性质3〕展开剂的极性4〕温度5〕展开槽内的展开剂蒸气饱和程度〔三〕别离参数别离度〔R〕两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度〔直径〕的比值成为别离度

R=2d/(W1+W2)〔三〕吸附剂的选择

根据被测物极性和吸附剂的吸附能力

被测物极性强——弱极性吸附剂

被测物极性弱——强极性吸附剂〔四〕展开剂的选择〔同液固吸附色谱流动相的选择〕根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性〔五〕薄层板的制备定性分析——窄条定量分析——10×20cm〔六〕点样和展开〔七〕定性与定量分析定性分析——日光，紫外光，显色定量分析——洗脱法，薄层扫描法硅胶G——自含粘和剂硅胶H——不含粘和剂，铺板时另加入CMC硅胶FH254——含荧光剂，254nm紫外光照发绿光硅胶FH365——含荧光剂，365nm紫外光照发光第四节纸色谱法将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液-液分配色谱法固定相：纸纤维吸附的水流动相：与水不互溶的有机溶剂〔饱和正丁醇〕别离机制：同液-液分配色谱定性参数：讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关极性组分→易保存，Rf小〔流动相极性↑，Rf↑〕非极性组分→易流出，Rf大〔流动相极性↑，Rf