海金沙草化学成分的研究

海金沙草化学成分的研究

海金沙草海金沙科（thunb.）sw系海金沙科lygonamas性海金沙属lygonata多年生蕨类植物海金沙的顶部部分，也被称为游离网络、鸡胶、碗草、金沙蕨等。主产于广东、江苏、浙江、湖南、湖北、四川、陕西及甘肃等地。全草或者干燥成熟孢子入药,味甘淡,性寒,有清热解毒、利湿利胆消肿的功效,为治疗尿路感染、尿路结石、湿热肿满、泌尿系统感染等症的常用中草药。海金沙科只有海金沙属,约有45种植物,分布于热带和亚热带。我国有10种,其中5种供药用。前人对海金沙草化学成分的研究报道较少,因此,作者对其进行了较系统的化学成分研究。从其乙醇提取物中分离得到了8个化合物,运用波谱学和化学方法鉴定了它们的结构,分别为:田蓟苷(tilianin)(Ⅰ),山柰酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(kaempferol-7-O-α-L-rhamnopyranoside)(Ⅱ),山柰酚(kaempferol)(Ⅲ),对香豆酸(p-coumaricacid)(Ⅳ),1-正十六烷酸甘油酯(hexadecanoicacid2,3-dihydroxy-propylester)(Ⅴ),胡萝卜苷(daucosterol)(Ⅵ),β-谷甾醇(β-sitosterol)(Ⅶ),正三十一烷醇(1-hentriacontanol)(Ⅷ)。除化合物Ⅲ,Ⅳ外,其余均为首次从海金沙中分离得到。化合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ为首次从海金沙属植物中分离得到。1核磁共振测定海金沙草采自安徽当涂县,品种由安徽芜湖中医学校刘晓龙教授鉴定。熔点使用X-4型显微熔点测定仪,温度计未校正;核磁共振谱用BRUKERAV-500型核磁共振仪测定;IR光谱用NicoletImpact410型红外光谱仪测定;ESI-MS用HP1100HPLC-ESI液质联用仪测定;EI-MS用岛津MS7070E型质谱仪测定。柱色谱用硅胶(青岛海洋化工厂);SephadexLH-20(Pharmacia公司);硅胶GF254薄层预制板(烟台化学工业研究所);所用试剂均为分析纯。2下酯型石油醚-醋酸乙酯的合成海金沙草6kg干燥粗粉,用80%乙醇加热回流提取3次,每次2h,合并提取液,减压浓缩得600g稠浸膏。加水使成混悬液,依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取。取石油醚部位(165g)加粗硅胶拌样,上样于硅胶(100~200目)柱,以石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱,所得流分再分别经反复硅胶柱色谱,SephadexLH-20柱色谱分离纯化,分别得化合物Ⅴ,Ⅶ,Ⅷ。取正丁醇部位(230g),加粗硅胶拌样,上样于硅胶(100~200目)柱,以氯仿-甲醇梯度洗脱,所得流分再分别经反复硅胶柱色谱,SephadexLH-20柱色谱分离纯化,分别得化合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅵ。3化合物红色合成法化合物Ⅰ黄色粉末,mp256~257℃,盐酸-镁粉反应呈阳性。ESI-MSm/z:445[M-H]-。IR(KBr)cm-1:3433,2921,1658,1607,1496,1307,1247,1180,1078,833,617。1H-NMR(DMSO-d6)δ:3.87(3H,s,OCH3),5.03(1H,d,J=6.9Hz,H-1″),6.85(1H,d,J=2.1Hz,H-8),6.45(1H,d,J=2.1Hz,H-6),6.95(1H,s,H-3),7.13(2H,d,J=8.9Hz,H-3′,5′),8.06(2H,d,J=8.9Hz,H-2′,6′),12.91(1H,s,5-OH)。13C-NMR(DMSO-d6)δ:55.7(OCH3),60.8(C-6″),69.7(C-4″),73.3(C-2″),76.6(C-5″),77.3(C-3″),95.1(C-8),99.7(C-6),100.1(C-1″),103.9(C-3),105.6(C-10),114.8(C-3′,5′),122.9(C-1′),128.6(C-2′,6′),157.1(C-5),161.3(C-4′),162.6(C-9),163.2(C-2),164.0(C-7),182.2(C-4)。以上数据与文献报道田蓟苷(tilianin)数据一致。化合物Ⅱ黄色针状结晶,mp237~240℃,盐酸-镁粉反应呈阳性。ESI-MSm/z:431[M-H]-。IR(KBr)cm-1:3417,2923,1656,1593,1496,1357,1168,970,838,595。1H-NMR(CD3OD)δ:8.11(2H,d,J=8.2Hz,H-2′,6′),6.91(2H,d,J=8.9Hz,H-3′,5′),6.76(1H,s,H-8),6.44(1H,s,H-6),5.56(1H,s,H-1″),1.26(3H,d,J=6.1Hz,H-6″)。13C-NMR(CD3OD)δ:175.8(C-4),161.6(C-5),160.6(C-7),159.0(C-4′),156.1(C-9),147.1(C-2),135.8(C-3),129.1(C-2′,6′),121.8(C-1′),114.6(C-3′,5′),104.5(C-10),98.2(C-1″),98.1(C-6),93.6(C-8),71.9(C-4″),70.4(C-3″),70.0(C-2″),69.5(C-5″),16.3(C-6″)。以上数据与文献报道山柰酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(kaempferol-7-O-α-L-rhamnopyranoside)数据一致。化合物Ⅲ黄色无定形粉末,mp274~276℃。盐酸-镁粉反应呈阳性,Molish反应阴性。ESI-MSm/z:285[M-H]-。IR(KBr)cm-1:3420,2930,1660,1612,1506,1448,1178,1008,820,725,642。1H-NMR(CD3OD)δ:6.19(1H,d,J=2.0Hz,H-6),6.40(1H,d,J=2.0Hz,H-8),8.09(2H,d,J=8.9Hz,H-2′,6′),6.91(2H,d,J=8.9Hz,H-3′,5′)。13C-NMR(CD3OD)δ:148.1(C-2),137.1(C-3),177.4(C-4),162.5(C-5),99.3(C-6),165.6(C-7),94.5(C-8),158.3(C-9),104.6(C-10),123.8(C-1′),130.7(C-2′,6′),116.3(C-3′,5′),160.6(C-4′)。以上数据与文献报道山柰酚(kaempferol)数据一致。化合物Ⅳ白色无定形粉末,mp210~213℃。ESI-MSm/z:163[M-H]-。IR(KBr)cm-1:3381,2829,2501,1672,1600,1512,1448,1244,978,833,692。1H-NMR(CD3OD)δ:7.60(1H,d,J=15.9Hz,H-β),7.44(2H,d,J=8.6Hz,H-2,6),6.81(2H,d,J=8.6Hz,H-3,5),6.28(1H,d,J=15.9Hz,H-α)。13C-NMR(CD3OD)δ:171.0(C=O),161.1(C-4),146.6(C-β),131.1(C-3,5),127.3(C-1),116.8(C-2,6),115.7(C-α)。以上数据与文献报道对香豆酸(p-coumaricacid)一致。化合物Ⅴ白色无定形粉末,mp72~73℃。1H-NMR(CDCl3)δ:4.20(2H,m),3.93(1H,m),3.70(1H,dd,J=4.0,11.4Hz),3.60(1H,dd,J=5.8,11.4Hz),2.35(2H,t),1.63(2H,t),1.28(24H,s),0.88(3H,t,J=6.8Hz)。13C-NMR(CDCl3)δ:175.7(C-1),71.6(C-2′),66.5(C-3′),64.7(C-1′),35.5(C-2),15.5(C-16)。以上数据与文献报道1-正十六烷酸甘油酯(hexadecanoicacid2,3-dihydroxy-propylester)一致。化合物Ⅵ白色无定形粉末,mp283~286℃,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性,香草醛-浓硫酸显紫色。IR(KBr)cm-1:3414,2935,2867,1600,1464,1378,1075,1023。与胡萝卜苷标准品HPTLC的Rf值一致,且混合熔点不下降,故推断化合物Ⅵ为胡萝卜苷(daucosterol)。化合物Ⅶ白色针晶,mp147~148℃。易溶于石油醚、氯仿等小极性有机溶剂。香草醛-浓硫酸显紫色。与β-谷甾醇标准品的IR光谱及HPTLC的Rf值一致,且混合熔点不下降,故推断化合物Ⅶ为β-谷甾醇(β-sitosterol)。化合物Ⅷ白色无定形粉末,mp35~37℃,易溶于氯仿。IR(KBr)cm-1:3320,2918,2849,1467,1066,