日粮营养水平对鸡肌肉肌苷酸含量的影响

日粮营养水平对鸡肌肉肌苷酸含量的影响

近年来，人们对肉类及其产品的味道进行了广泛的研究。在与甜味相关的药物中，有两种物质贡献最大的贡献，即氨基酸和肌苷酸（imp），其中肌苷酸是肌肉味道的主要成分之一（fuke等人，1991）。鸡被宰杀后,在肌肉僵直达到极限pH过程中,部分三磷酸腺苷(ATP)在ATP酶的作用下,分解成二磷酸腺苷(ADP)。ADP在肌酸激酶的作用下,分解成腺苷酸(AMP)。AMP在脱氨酶作用下,脱氨形成肌苷酸(IMP),IMP又可在磷酸脂酶的作用下形成肌苷(HxR),并进一步在核苷水解酶的作用下,分解成次黄嘌呤和核糖。肉中次黄嘌呤核苷酸和其它分解产物的积累可使肉鲜味变浓。此外,大量的研究结果表明:肌苷酸和糖蛋白在水中或脂肪中加热能产生明显的肉鲜味(Lawrie,1991;Heath等,1986)。本研究对云南几个主要地方鸡品种(茶花鸡、武定鸡、盐津乌鸡)肉质肌苷酸进行分析,并以肉杂鸡及肉鸡(AA)作参照,探讨品种与日粮营养水平对鸡肉肌苷酸含量的影响,为云南地方鸡种的研究与开发提供一定的参考。1试验设计1.1肉杂鸡种放养和培养选茶花鸡、武定鸡、盐津乌鸡、肉杂鸡、艾维茵肉鸡为试验对象,其中茶花鸡、武定鸡、盐津乌鸡种蛋分别购于西双版纳大青树公司、禄劝种鸡场、盐津县种鸡场,在云南省农业职业技术学院畜牧场孵化。待出孵时从市场和昆明正大有限公司种鸡场分别购买0日龄的肉杂鸡和艾维茵肉鸡。每个品种96只鸡,试验分2个阶段:0～30日龄为第1阶段,31～60日龄为第2阶段。第1阶段均饲喂同一水平日粮,第2阶段时,每个品种随机分为3组,每组32只,每组设4个重复,每个重复8只鸡,每只鸡单笼饲养,自由采食与饮水。1.2日粮的配方优化采用3(日粮营养水平)×5(品种)随机区组试验设计,参照我国肉仔鸡、地方品种鸡饲养标准、美国NRC(1994)肉仔鸡饲养标准,经过适当调整,设计出低(Ⅰ)、中(Ⅱ)、高(Ⅲ)3个不同能量和蛋白质水平试验日粮,分别饲喂5个品种的鸡,0～30日龄饲喂同一营养水平日粮,31～60日龄按组饲喂低、中、高3种营养水平日粮。第2阶段试验分组及具体日粮营养水平见表1、2。1.3第2阶段日粮脱温到28日龄结束,31日龄时每只鸡单笼饲养,对试验鸡编号,并过渡到第2阶段日粮。给予充足饲料,以保证自由采食。记录每天的饲料消耗量和剩余量,每周称1次体重并做记录,同时注意观察鸡的采食、排泄、精神状况和行为,如有异常,及时处理。试验鸡按常规免疫程序免疫,并做好疾病控制。2测定氨基酸含量2.1溶液制备2.1.1超声波过滤法量取3.5L磷酸溶液,加入200ml水和2ml三乙胺,摇匀,补加水至1L,再用三乙胺调pH=6.5后,取950ml加50ml甲醇,混匀,经0.45μm滤膜过滤,置超声波水浴中脱气30min。列,8、62.1.2流动相溶解法准确称取肌苷标准品(Sigma公司,含量>98%)10.4mg,用流动相溶解并定容至10ml,摇匀,其浓度为1.019g/L。2.1.3流动相溶解法准确称取肌苷酸标准品(Sigma公司,含量>99%)10.7mg,用流动相溶解并定容至10ml,摇匀,其浓度为1.059g/L。2.1.4混合标准系列工作液的配制准确移取上述肌苷酸和肌苷标准储备液,用流动相分别逐级稀释至含肌苷酸为1.06、3.18、6.36g/L和含肌苷为0.34、1.02、2.04g/L的混合标准系列工作液,现配现用。以上所用试剂均为分析纯,水为自制二次蒸馏水。2.2高效液相色谱法惠普1100高效液相色谱仪,包括U6K进样阀,486型紫外检测器,N-2000双通道色谱工作站,高速离心机,pHs-2型酸度计,容量瓶(50ml),烧杯(25ml),离心管(5ml、15ml),胶夹滴管。2.3条件1C18ODS分离柱,检测器为紫外检测器,254nm、ATT0.32,灵敏度0.04AUFS;外标流速1.0ml/min。2.4调混液用量的确定样品经绞碎混匀后,准确称取1g,置10ml玻璃匀浆器中,用15ml3.5%高氯酸溶液分3次匀浆,匀浆液转入离心管中,并用少量3.5%高氯酸洗涤匀浆器,洗液并入离心管中,以3500r/min离心10min,吸取上清液,沉淀物用3.5ml3.5%高氯酸溶液再洗涤、离心,合并2次上清液作为提取液。先用5mol/LNaOH溶液再用0.5mol/LNaOH溶液调提取液至pH6.5,用水定容至50ml,摇匀。移取1ml,用水稀释至10ml,过0.45μm滤膜。分离柱经流动相平衡1h后,取标准系列工作液及样品提取液各15μl上色谱柱分析测定。3日粮对肌肉肌苷酸含量的影响品种与日粮营养水平对鸡胸肌肌苷酸含量的影响见表3与图1。由表3与图1可见,品种对胸肌肌苷酸含量的影响不显著(P>0.05)。但地方鸡的肌苷酸含量均比肉鸡和肉杂鸡高,其中茶花鸡>武定鸡>盐津乌鸡。茶花鸡、武定鸡、盐津乌鸡胸肌肌苷酸含量分别比肉鸡高7.29%、10.41%、12.5%(P>0.05),比肉杂鸡分别高1.98%、4.95%、6.93%(P>0.05)。不同营养水平日粮对胸肌肌苷酸含量影响不显著(P>0.05)。采食3种日粮的鸡肌肉肌苷酸含量差别不明显,但随着营养水平的提高,胸肌肌苷酸含量有逐渐降低的趋势。通过分析显示,品种与日粮之间的互作效应不明显(P>0.05)。4日粮营养水平对肌肉中肌苷酸含量的影响王克华等(1999)研究结果表明,地方鸡种间肌苷酸含量存在明显差异,小型鸡种如乌骨鸡、白耳鸡较狼山鸡、萧山鸡等大型鸡种高,这可解释我国地方小型鸡种肉味较大型鸡种肉味鲜,特别优于引进的国外鸡种肉品质的重要原因之一。陈国宏等(2000)根据不同品种鸡的肌肉肌苷酸含量存在显著差异的研究结果进行推论,认为肌苷酸含量差异是不同品种鸡肉口感存在差异的主要原因之一。宋焕禄等(2002)采用反相高效液相色谱法对几种鸡肌肉中的肌苷酸含量进行了测定,结果表明,固始鸡肌肉中的肌苷酸含量比AA肉鸡高,尤其是胸肉,宫廷黄鸡胸肌和腿肌肉中的肌苷酸含量均比AA肉鸡高很多。本试验对肉鸡、肉杂鸡、盐津乌鸡、武定鸡、茶花鸡肌肉肌苷酸含量分析结果表明,在第60日龄,地方鸡肌苷酸含量均比肉鸡和肉杂鸡高,且盐津乌鸡、武定鸡、茶花鸡的肌苷酸含量依次上升,符合了人们普遍对茶花鸡肉质评价最高的事实。同时地方鸡肌苷酸含量最高,这可能是我国地方鸡种较杂交鸡及国外大型鸡种肉鲜、品优的主要原因之一,这与以上研究结果一致。日粮营养水平对肌肉中肌苷酸含量影响不大,但采食低营养水平日粮其肌肉肌苷酸含量稍高于中、高营养水平日粮,可能原因是低营养水平日粮中的养分在体内的代谢程度要高些。本试验所设计3种日粮营养水平虽有差别,但均能满足鸡的生长需要,这也可能是日粮营养水