异烟肼的比移值测定（实验）-薄层色谱法检测异烟肼

《色谱分析及操作》异烟肼的比移值测定CONTENT01实验目的02实验原理03实验试剂、仪器04实验步骤05数据处理06思考题01实验目的一、实验目的掌握薄层色谱法检查异烟肼片中游离肼的原理掌握比移值的计算掌握薄层色谱法的基本操作02实验原理二、实验原理薄层色谱法，系将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法在同板上所得的色谱图对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。二、实验原理比移值（Rf）以在0.2～0.8之间为宜

03试剂与器材三、试剂与器材1、试剂硫酸肼对照液（0.2g/L）、异烟肼片展开剂（异丙醇：丙酮=3：1）乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液：（对二甲氨基苯甲醛5g＋乙醇45.0mL＋盐酸11.5mL）三、试剂与器材2、器材薄层色谱版（已活化）展开缸微量注射器（平头）电吹风喷瓶等04实验步骤四、实验步骤1.供试品、对照品溶液配制对照品溶液（0.08mg/mL）：准确称取0.08g硫酸肼固体，用适量的丙酮-水（1:1）溶解，并用丙酮-水稀释，定容制成100mL对照品溶液。四、实验步骤1.供试品、对照品溶液配制供试品溶液（100mg/mL）：取25片异烟肼片剂（规格0.1g/片）置于研钵中，仔细研成粉末，加丙酮-水（1:1）25mL，研磨溶解，转移至漏斗中干过滤，取滤液备用。四、实验步骤2.点样吸取供试品溶液5μL与对照溶液5μL，点样于薄层板上，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。四、实验步骤2.点样四、实验步骤2.点样做杂质限量检查时，点样量应准确，必须用微量注射器定量点样点样时采用少量多次的点法，点于同一原点处点样基线距底边2cm两点间距离为1.5～2.0cm点样直径为2～4mm，注意勿损伤薄层表面点样注意事项：四、实验步骤将展开剂100mL倒入展开缸中，将点好样品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距原点1cm为宜，密封。待展开一般为8～15cm，取出薄层板，标出展开前沿，晾干。3.展开四、实验步骤喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15分钟后检视。观察在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上有无黄色斑点。4.显色检查四、实验步骤4.显色检查四、实验步骤待展开剂挥发后再进行喷雾显色喷雾时喷雾器的喷嘴要与薄层板保持一定距离，太近时，易有大滴显色剂喷在薄层板上而影响显色效果。为使斑点颜色易于观察，显色15分钟后，再进行检视。显色检查注意事项：4.显色检查05数据处理五、数据处理1.比移值的计算游离肼的Rf值为

（要求约为0.75）异烟肼的Rf值为

（要求约为0.56）Rf=基线至展开斑点中心的距离基线至展开剂前沿的距离思考题薄层色谱板的制备过程有哪些？研磨：将薄层色谱硅胶10g和羧甲基纤维素钠溶液30mL在研钵中向一方向用力研磨混合倾倒：研成糊状后，去除表面的气泡，立即倒在薄层板中心线上，快速左右倾斜自然风干：于室温下，置水平台上晾干烘干：于110℃烘30分钟，使薄板活化冷却：在干燥器中冷却检视：使用前在反射光及透射光下检视。思考题展开操作中有哪些注意事项？答：