大豆品种抗炭疽病性鉴定技术规程

大豆品种抗炭疽病性鉴定技术规程范围本文件规定了大豆炭疽病接种体制备、接种方法及抗性评价标准。本文件适用于大豆品种炭疽病抗性评价。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5084农田灌溉水质标准GB/T8321.3农药合理使用准则（三）GB/T8321.4农药合理使用准则（四）GB/T8321.6农药合理使用准则（六）NY/T1276农药安全使用规范总则术语和定义下列术语和定义适用于本文件。大豆炭疽病soybeananthracnose大豆炭疽病是由炭疽菌引起的病害，主要发生在大豆结荚以后，尤其是鼓粒期的大豆。发病初期，病斑呈水渍状细小斑点，在高温高湿环境下，迅速扩大为黄褐色或红锈色不规则形病斑，严重影响豆荚的商品性。发病重时，鼓粒初期的豆荚即迅速枯死。病情指数diseaseindex衡量发病率与严重度的综合指标。用各病级数值与对应病级的病荚数乘积的总和与全部调查豆荚的理论最高总病级数总和的比较相对数表示，记作DI。供试品种的病情指数均值为各重复病情指数的平均数，记作ADI。鉴定试验条件接种体制备所需仪器设备及工具光学显微镜、高压灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、冰箱、移液器、血球计数板、培养皿、量筒、挑针、涂布棒、酒精灯、镊子、广口瓶、纱布等。鉴定圃立地条件鉴定圃应地势平整、形状规正、肥力均匀、排灌方便、不受荫蔽，并具备人工保湿条件。面积根据供试品种数量确定鉴定圃面积。每个供试品种不少于5 m2。接种体制备病原菌选择与培养病原菌选择采集XX省生产上大豆炭疽病的典型病样，在马铃薯葡萄糖X脂（PDA）平板上分离纯化后作为鉴定用病原菌。马铃薯葡萄糖X脂培养基（PDA）见附录A。病原菌培养将保存的病原菌转接到PDA平板上，置于25℃～28℃下恒温培养6 d，在超净工作台上用涂布棒将菌丝涂断以促进产孢，用封口膜封口，置于26℃下恒温培养3 d。接种体制备在培养好的大豆炭疽菌平板中加入适量0.05%吐温-80溶液，用涂布棒刮下大豆炭疽病菌分生孢子，菌悬液经四层脱脂纱布滤除菌丝，收集滤液，用血球计数板检测滤液中孢子浓度，添加适量0.05%吐温-80溶液，配制成1×106 个·mL-1的孢子悬浮液，按20g/L添加酵母粉并充分搅拌使其溶解，作为抗性鉴定接种体。接种体应即配即用。鉴定程序供试品种种植根据供试品种生育期调整播期，使各品种同一时期进入始荚期。根据供试品种株型，按照行距60 ～80 cm、穴距30 ～35 cm播种，每穴播种3 ～4 粒、定苗2 株，每品种每重复至少保苗20 株。各品种随机排列，重复3次。设置感病品种XX75 为感病对照。接种方法接种时间大豆始荚期进行第一次接种，7 d后进行第二次接种。接种部位大豆荚。接种量及接种方法每次按每株20 mL接种体对豆荚表面均匀喷雾进行接种，接种后保湿48 h。鉴定圃田间管理肥水管理按常规施肥水平施用化肥和腐熟有机肥。如遇干旱，应及时灌溉。灌溉水应符合GB5084的规定。病虫草害管理及时中耕、除草、防治虫害，供试品种全生育期不使用杀菌剂和除草剂。使用农药防治虫害时，应符合GB/T8321.3、GB/T8321.4、GB/T8321.6和NY/T1276的规定。病情调查记载第二次接种后，逐日监测感病对照发病情况，当感病对照的病情指数达到50时，每小区摘取不少于10株的全部结实豆荚，豆荚总数不少于300个，逐荚调查发病情况。病情分级标准见表1，病情调查记载表见附录C。大豆炭疽病病情分级标准病情级别症状0豆荚无病斑1病斑面积占整个豆荚面积的5%以下3病斑面积占整个豆荚面积的6%～10%5病斑面积占整个豆荚面积的11%～25%7病斑面积占整个豆荚面积的26%～50%9病斑面积占整个豆荚面积的50%以上结果计算病情指数病情指数按公式（1）计算。 DI=∑(dc×式中：DI——病情指数dc——病情级别数值nc——各病级豆荚数nt——调查总豆荚数抗性评价标准根据供试品种的病情指数均值评价各品种的抗性级别，抗性级别划分标准见表2，大豆品种抗炭疽病性鉴XX果报告表见附录D。大豆品种炭疽病抗性级别划分标准病情指数均值（ADI）抗性类型ADI≤5.00高抗（HR）5.00＜ADI≤10.00抗病（R）10.00＜ADI≤20.00中抗（MR）20.00＜ADI≤40.00中感（MS）40.00＜ADI≤60.00感病（S）ADI＞60.00高感（HS）

（规范性）

马铃薯葡萄糖X脂培养基（PDA）制备将200 g去皮马铃薯切成小块，加水1 L煮沸并维持20 min，用四层纱布过滤，滤液中趁热加入20 g葡萄糖、20 gX脂，玻棒搅拌并加水定容至1 L，121℃下蒸汽灭菌30 min。冷却至60℃左右，每100 mL培养基加入100μg/mL的硫酸链霉素100μL，混匀后倒平板。

（资料性）

大豆炭疽病基本信息大豆炭疽病是由炭疽菌引起的病害，主要发生在大豆结荚以后，尤其是鼓粒期的大豆。发病初期，病斑呈水渍状细小斑点，在高温高湿环境下，迅速扩大为黄褐色或红锈色不规则形病斑，严重影响豆荚的商品性。发病重时，鼓粒初期的豆荚即迅速枯死。品种抗性、病原物致病力、温湿度和降雨均能影响大豆炭疽病的发生流行。25℃～30℃有利于病原菌菌丝生长和产孢。风雨有利于分生孢子的传播蔓延，同时，雨滴也有利于分生孢子的萌发和附着胞的形成。夏秋季节大豆鼓粒期如遇阴雨连绵或晴雨相间天气，种植感病品种的田块易出现大豆炭疽病的爆发流行，严重时豆荚染病率超过50%。

（规范性）

大豆品种抗炭疽病性鉴定病情调查记载表大豆品种抗炭疽病性鉴定病情调查记