环境监测分光光度法

环化系付翠

彦2019.10分

光

光

度

法2020/8/192020/8/19分

光

光

度

计——

10nm

-—400nm————

780nm

30um-紫外光区

可见光区

红外光区单色光：只有单一波长光组成的光；复合光：由两种或两种以上波长光组成的光。波动性：如光的折射、衍射、干涉现象微粒性：如光的吸收、反射(2

)光的分类：根据波长不同，光可分为以下几个区：(3)单色光和复合光：1、光的基础知识：一、基本原理(1)基本性质：2020/8/19λ

应用：在分光光度法中，选择λmax为入射光波长。稳定性

灵敏度高2020/8/19

好实验：使不同波长的光透过某一固定浓度C和同一液层厚度b的均匀有色溶液，测量此溶

液对每一波长光λ的吸收程度A。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作

图，所得曲线称为吸收曲线。(1)对同一有色物质，

不论其

浓度大小，

其最大吸收处对应

的波长λmax不变，

A随浓度增

大而增大；(2)对不同有色物质，其

λ

max不同，吸收曲线形状也

不同。一、基本原理(续)2、

物质对光的选择性吸收吸收曲线：描述了有色物质对

不同波长光的吸收能力两点结论：A2020/8/192020/8/19原因：为消除比色皿的反射和试剂吸收对光强度的影响，

使光强度的减弱仅与溶液中待测物质的浓度有关。消除方法：采用光学性质相同、厚度相同的比色皿盛上纯试剂

作参比，调节仪器，

使透过参比皿的吸光度A=03、

吸光度的测量要用参比液(掌握)2020/8/19消除措施：

入射光选择被测溶液吸收

曲线较平直部分(高峰处)对应的波长。(2)溶液浓度偏大朗白-比耳定律适用于理想溶液。

消除措施：将溶液稀释到一定程度。2020/8/194、偏离朗白-比耳定律的原因(1)非单色光引起的偏离可见分光光度计：

721型、722型、7220、

722S、723、7230等仪器基本组成：

光源、单色器、吸收池、读数检测系统紫外-可见分光光度计：

7

5

1

、

7

5

2

型

等(

三

)

分

光

光

度

计7

5

2

型722S

型对光源的要求：①具有足够的光强度；②光强在一定时间内保持稳定。(稳压装置)以棱镜、光栅作为单色器棱镜材质：a

、玻璃的：用于可见光区；b

、石英的：

适用于紫外光区。作用：提供波长连续的复合光光

(

三

)

分

光

光

度

计

作用：

把复合光转变为单色光。

2、

单

色

器

：1、

光

源

：2020/8/193、

吸

收

池

(

又

叫

比

色

皿

)可见光度计：玻璃材质紫外光度计：石英材质比色皿架中的比色皿比色皿2020/8/19(1)手拿毛面；(2)装2/3满，事前润洗2～3遍；(3)用镜头纸擦干外周水滴，使光面干净；(4)位置放正；(5)测完后及时倒掉，冲洗干净(洗涤方法见P22);

(6)保持比色皿的配套性(如不清楚时，应事前检验其配套性，见实训篇P21)3、

吸

收

池

(

续

)使用时注意事项

(见实训篇P22):2020/8/194、

检测系统

：作用：光信号

→

电信号，通过数据转换，显示吸光度值。常用的是光电管。2020/8/192020/8/193、

测

量

条

件

的

选

择

：(1)入射光波长的选择：(2)参比液选择：总原则：使测得的吸光度真正反映待测物浓度值常用的参比液：

a、

纯溶液；b

、空白溶液(

3

)

吸

光

度

范

围

选

择

：

0

.

1

～

0

.

72020/8/192、测定对应的吸光度值：

A

。

A₁A₂

A₃A₄As

A₆

A₇A₈3、利用含量与对应的吸光度值在坐标系中绘制标准曲线(如何绘制?)对应的六价铬含量：

01.02.5

5

10

20

30

40

50(ug)五

、

定

量

方

法

：标准曲线法(以六价铬为例说明)1、

配制标准系列：先配制标准储备液

(含六价铬100ug/mL),使用当天稀释为标准使用液(5ug/mL)。然后向一组50mL

比色管中分别加入标准使用液，体积如下：00.2

0.51.00

2.004.00

6.00

8.00

10.00定容至50mL刻度；加酸，摇匀；加显色剂。横坐标纵坐标2020/8/194、

测量待

测

样

品

的A

值；5、

从标准

曲线

上

查

得

(

或

计

算

)

待

测

物

含

量m;6、

计算水样浓度：m——从标

准

曲

线

上

查

得

(

或

计

算

)

待

测

物

含

量

，ug;V

水

样

—

—水

样

体

积

，mL。如何绘

制

标

准曲线呢?五

、

定

量方

法(续上

篇

)2020/8/192020/8/192020/8/19r范围：-1～1之间(分为正相关和负相关)(1)正相关：O<r≤1,y

随x的增大而增大。

r=1

时，

x、y之间完全正相关；分光光度法中，

一般要求r≥0.9990。(2)负相关：-1≤r<0,y

随×的增大而减小。

r=-1

时，

x、y

之间完全负相关；2020/8/192、

相

关

系

数rx、y之间是否有线性关系?由相关系数r来检验。3、

标准曲线绘制过程(见实训篇P28)(1)把实验数据列表并计算，求出x;²、y;²

、x₁Y;及加和值；(2)计算相关系数r,

并判断x和y之间的相关性；(3)计算截距a和斜率b,

得到标准曲线方程；(以上的计算可用计算器直接求得。)(4)在坐标纸上画标准曲线(选取较远的两点连线，准确度较高)注意：

标准曲线是一段线段，而不是直线，不能随意延伸。2020/8/193、标准曲线绘制过程(续):另见“光度法应用实例”2020/8/19(1)打开开关预热至稳定；(2)调波长钮至所需波长；(3)打开暗盒盖，调0钮或键，使T

为0;放好参比液，盖上暗盒盖，调

100钮或键，使T为

1

0

0

%

,

即A=0。(4)拉出拉杆，依次读数。注意比色皿使用方法及配套性检验721光度计及使用方法：(1)打开开关预