医学检验粪便标本处理

粪便标本粪便标本中常见的病原菌:革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌伤寒及其它沙门氏菌厌氧链球菌种志贺菌属结核分枝杆菌致病大肠埃希氏菌产气荚膜杆菌弧菌属菌种艰辨梭菌气单胞菌种白色念珠菌邻单胞菌小肠结肠炎耶尔森菌弯曲菌沙门-志贺氏菌:接种HE及麦康凯平板,35℃、18～24小时后检查平板,有疑似菌落,接种双糖,细菌分纯后用细菌鉴定仪上板鉴定后与沙门、志贺氏菌因子血清凝集,以确诊.霍乱弧菌培养:取疑似患者粪便接种于碱性蛋白胨水中,进行增菌,同时划线接种于碱性琼脂平板/双洗平板血琼脂平板,孵育.增菌培养孵育6小时后,取菌膜移种于上述平板,进行分离培养,并同时做涂片,行革兰染色和悬滴标本,检查形态和活动力.多个分离平板在孵育18-24小时。观察菌落,挑取可疑菌落,先与生理盐水混匀,观察有无自凝现象.再用O1群霍乱多价血清作玻片凝集实验.如发现霍乱病人,立刻向本地防疫部门提供及时精确的信息.致病大肠埃希氏菌培养:引发腹泻的大肠杆菌有四种--ETEC、EPEC、EIEC、EHEC.取液体状、脓血或糊状粪便或肛拭子划线接种于麦康凯或伊红美兰及血琼脂平板上,35℃孵育18-24小时,挑选乳糖发酵菌落5个,移种于KIA和MIU孵育过夜,并同时进行细菌分纯，用细菌鉴定仪上板鉴定并进行血清学分型.副溶血弧菌培养:取粪便接种于副溶血弧菌增菌液中,6-8小时后接种于TCBS和SS琼脂平板上,35℃孵育18-24小时后,观察菌落,挑取TCBS上绿色微隆、浑浊、湿润菌落,SS上挑取无色透明、不易挑起菌落进行分纯后用细菌鉴定仪上板鉴定.真菌培养:真菌性腹泻多继发于抗生素治疗后,常见于白色念珠菌、球拟酵母菌.将标本接种于含氯霉素的沙保氏琼脂及血琼脂平板,置25-30℃孵育24-48小时,根据菌落形态及涂片革兰氏染色所见成果,决定鉴定办法.菌群失调及菌交替症:根据临床提示粪便培养需选用数种培养基,涉及强选择性和弱选择性肠道培养基、需氧及厌氧血琼脂平板、沙保氏琼脂等,按各类细菌分别进行培养鉴定,并观察其数量变化.3、操作流程(沙门-志贺氏菌属检查)粪便或肛拭子↓↓分离培养增菌培养HE及麦康凯琼脂分离培养血平板分离纯培养血清学鉴定细菌鉴定药敏实验报告4、报告方式:以分离目的菌种的成果而决定,如:现在常规以SS/HE和中国蓝或伊红美兰分离粪便中的致病菌,阳性者应报告“沙门菌或志贺氏菌”,阴性应报告“未检出沙门菌属或志贺菌属”.其它培养成果报告方式与上述原则基本相似.5、注意事项人类肠道中的细菌种类繁多，数量亦多，在健康人肠道内经常借居的大量的细菌，一旦肠道发生病理变化时，就可能侵入病变部位而引发疾病。提高阳性检出率必须注意：标本要采集新鲜的、陈旧标本大大影响阳性检出率。痢疾患者要采集大量脓血部位进行培养。(4)切勿粪尿混合否则也会影响阳性检测率。穿刺液培养常见的病原菌革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌淋病奈瑟氏菌A群链球菌流感嗜血杆菌肺炎链球菌大肠埃希氏菌草绿色链球菌产气肠杆菌肠球菌伤寒及其它沙门氏菌厌氧链球菌肺炎克雷伯氏菌结核分枝杆菌产碱杆菌产气荚膜芽胞杆菌铜绿假单胞菌放线菌不动杆菌念珠菌梭杆菌拟杆菌当留取标本时,为避免穿刺液凝固,可在无菌容器内预先加入灭菌肝素,再注入多个穿刺液.(1)涂片检查:标本如为浆液,可经3000r/min离心,取沉淀涂片.如为脓液,可直接涂片,涂片固定后,做革兰氏染色和抗酸染色.(2)除常规普通培养外，应根据临床提示的规定增加真菌和结核培养,穿刺液含细胞数量较少,必须做增菌培养.如标本外观非脓样,可加大接种量.平板经35℃24-48小时孵育后,如有细菌生长,按常规鉴定,无菌生长的平板还应继续孵育至48小时.方可报告阴性.浆膜腔积液采集穿刺液（胸水、腹水、关节液、鞘膜液）涂片革兰氏染色血平板、麦康凯巧克力平板35度18-24h，5%-10%CO2初步报告成果挑取可疑菌落分离培养菌种鉴定,药敏实验报告成果4、报告方式:穿刺液中检出细菌均应报告鉴定成果及药敏实验.注意事项穿刺液盛于含有抗凝剂的试管或小瓶中，充足混合后，立刻送检或置4度冰箱保存。应根据临床规定选择对应的培养基。对疑有淋病性关节炎患者之关节液，采集应即刻送检或床边培养为佳。脑脊液标本正常人体脑脊液是无菌的。当人体患有脑脊髓膜炎症时，在脑脊髓液中能够出现病原菌。常见的病原菌有细菌、真菌和结核菌等，引发脑脊髓膜炎的微生物重要有：革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌脑膜炎奈色氏菌Ｂ群链球菌卡他布兰汉菌Ａ群链球菌流感嗜血杆菌肺炎链球菌肠杆菌科菌种消化链球菌脑膜败血性黄杆菌炭疽芽胞杆菌假单胞菌结核分枝杆菌无色杆菌产单核细胞李斯特菌拟杆菌新型隐球菌、白色念珠菌腰穿法收取脑脊液3～5ml，盛于无菌试管，应立刻送检，否则影响检出率，同时注意保温，不可置冰箱保存，会使病原菌死亡，特别是脑膜炎奈色氏菌、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌。实验室接到标本须立刻做直接涂片镜检和培养。(1)肉眼观察和涂片检查首先观察脑脊液的外观，除结核性脑膜炎外，其它细菌引发的化脓性脑膜炎多呈明显混浊，经抗生素治疗后，亦可不混浊或轻度混浊。革兰氏染色：混浊或脓性脑脊液可直接涂片，染色镜检。无色透明的脑脊液，应以3000r/min离心，10-15min，取沉淀物涂片，行革兰氏染色，镜检。根据染色反映及细菌形态特性，常可初步提示感染细菌的种类。结核分枝杆菌涂片检查：脑脊液以4000r/min离心30min，取沉淀物作小而集中的涂片；亦可将脑脊液在室温下静置数小时或18-24h，待形成纤维网后，取此脑脊液倾于新的无划痕的干净载玻片上，多出的液体任其溢出载玻片，使纤维网自然展开，干燥、固定后用萋纳氏染色。新型隐球菌涂片检查：脑脊液的离心沉淀物行墨汁负染色，可在黑色背景中，见到菌体周边有透明的荚膜，似一晕轮，有时可见到出芽的酵母菌。新型隐球菌，特别是荚膜窄者易与白细胞相混淆，可用%甲苯胺兰染色法加以区别。新型隐球菌的菌体呈红色园球状，荚膜不着色，白细胞染成深蓝色。(2)培养A．普通培养应抽2—3ml放如血培养瓶中（同血培养）。重要用于脑膜炎奈色氏菌、链球菌、葡萄球菌、大肠埃希氏菌、产气杆菌、流感嗜血杆菌等细菌的分离。对有的未直接打入血培养瓶的标本，用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板及巧克力琼脂平板上，置35℃CO2环境中培养18-24h，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色后镜检的特性，初步鉴定细菌的种类，并进一步分离纯培养后配制菌悬液上板条并做细菌鉴定及血清学检查，并作出报告。血平板和巧克力平板是分离用的最基本培养基。巧克力平板需放入CO2环境中，有助于检出脑膜炎奈色氏菌、肺炎链球菌及嗜血杆菌等。结核分枝杆菌培养：取离心后的沉淀物，接种罗－琴氏培养基，斜置于35℃温箱，孵育7天后，直立，继续孵育生长至八周，无菌落生长，发阴性报告；有菌落生长，鉴定后发报告。真菌培养：取经离心后的沉淀物，接种于科玛嘉显色平板上，放在35℃孵箱中孵育，普通2-3天即可出现菌落。极少数真菌需培养2-3周，才干出现菌落，甚至培养阴性。根据菌落形态、涂片所见和细菌鉴定成果等进行鉴定。3．操作流程：脑脊液混浊液可直接检查清亮液应离心取沉淀涂片、革兰氏染色、镜检必要时作抗酸染色或墨汁染色法血琼脂平板巧克力平板35℃18-24hCO2环境下35℃18-24h观察菌落涂片检查细菌鉴定/药敏实验血清学鉴定发出报告报告成果：无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性应立刻告知临床医师。培养并经鉴定的成果报告“×××菌”，同时报告药敏实验成果。注意事项由于脑脊液奈瑟氏菌离体后容易自溶，流感嗜血杆菌等也易死亡，故不管是做涂片镜检，还是进行培养检查必须立刻送检。标本若混浊，最佳进行床边培养。做好治疗前采集标本。要切实避免皮肤表皮葡萄球菌和其它细菌的污染、。尿液标本1、标本的采集①中段尿：女性采样前应先用肥皂水或％高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口；男性须翻转包皮冲洗，用％新洁尔灭消毒尿道口．灭菌纱布擦干后收集标本。②导尿管导尿采样可减少污染。对留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用空针细针头斜穿管壁抽吸尿液。或消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿被、留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。③送检标本以晨起第一次尿液为佳。④室温下尿标本耽搁稍久，可致尿内细菌浓度明显增加而影响病原菌与污染菌的分辨。不能立刻送检者，可暂存4℃冰箱。正常人体中，膀胱中的尿液是无菌的，从膀胱穿刺取出的尿液业应是无菌的。尿液经尿道排出时，受到尿道中细菌的污染而混有细菌。取经尿道排出的中段尿，细菌数不会超出10^3CFU/ml。患有泌尿系感染时，尿中的菌数高于10^4-5CFU/ml，因而，以此界限作为诊疗泌尿系感染的根据。2、检查环节:留检的标本应立刻送检，否则尿中细快速繁殖,使菌落计数不可靠而影响诊疗.实验室接到标本后，须立刻进行涂片和培养。用定量接种环或定量加样器取中段尿10UL，滴注在血平板上，用接种环涂抹，待表面干燥后，35℃培养24H，计数生长的菌落数，乘以100，求出每ML的菌落数。(1)涂片检查:普通细菌细菌涂片:以无菌操作作吸取尿5～7ml,放入无菌试管内，经3000r/min离心30分钟后，倾去上清液,取其沉渣,制成涂片,行革兰氏染色,镜检.如发现有革兰氏阴性或阳性细菌,即可做出报告.淋球菌涂片:尿标本如上解决后另制一张涂片以革兰染色,镜检.如查到细菌并为革兰氏阴性双球菌,肾形,存在于细胞内或细胞外,经培养证明后方可做出报告。念珠菌涂片:将尿液离心沉淀后,取沉淀物放于干净玻片上,覆以盖玻片,略加压力,使成薄片,直接用高倍镜观察.如沉渣太多,可滴加10%氢氧化钠,使之溶解后再做镜检.也可制成薄片,干后经火焰固定,革兰氏染色,油镜检查.发现有卵圆形的芽生孢子和管状的假菌丝,且革兰氏染色为阳性,就可报告检出念珠菌.结核分枝杆菌涂片:尿液经4000r/min离心30分钟,取沉淀作涂片,行萋纳氏染色及潘本汉氏染色,如两张涂片均查见红色杆菌,可报告为“找到结核分枝杆菌”.如萋纳氏染色片上查见红色杆菌,而潘本汉氏染色未查见红色杆菌,则为耻垢分枝杆菌.也可用金胺O-罗丹明荧光染色法.(2)培养:临床多用中段尿做细菌培养,应做菌落计数,培养成果才有诊疗意义.培养基惯用血平板,在检查淋球菌时,须使用淋球菌平板,并防入CO2环境中孵育.许多抗生素是经肾脏代谢的,因此尿中抗生素浓度较高,细菌的细胞壁构造易受破坏,可形成L-型细菌,常规办法不能检出.对用过抗生素的患者,尿培养有条件时须接种高渗培养基,以免漏检.3、操作流程:尿液涂片定量培养分离培养淋病奈瑟氏菌培养离心沉淀计数菌落血琼脂平板麦康凯平板专用淋球菌平板涂片、革兰氏染色5%～10%CO2镜检35℃,18～24h35℃,18～24h观察菌落涂片、染色、镜检鉴定细菌药敏实验报告4、报告方式10%的尿路感染患者,可能会在同份尿标本中分离到两种细菌,并且都是病原菌.若同份标本中检到3种以上不同微生物,普通认为污染。尿标本中革兰氏阴性杆菌菌落计数不不大于10^5CFU/：菌菌落计数不不大于10^4CFU/ml有诊疗意义,报告鉴定成果即药敏实验5、注意事项（1）尿液标本的采集除婴儿外，普通均使用导尿法，然而就现在国内外细菌室则多用中段尿，个别病例也可行膀胱穿刺术，在收集标本时应切实避免污染，及时接种，以免细菌繁殖。普通正常尿液本应是无菌的，由于外生殖道细菌的存在和其它因素的影响，虽经消毒的导尿，也难免绝对无菌，因而在实际工作中必须和定量培养法（菌落计数）同时检查。伤口、创伤面、脓液采集脓汁及创伤分泌物中常见的病原菌革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌葡萄球菌假单胞菌链球菌肠杆菌科细菌消化链球菌腐败谢瓦纳拉菌炭疽芽胞杆菌拟杆菌破伤风芽胞杆菌梭杆菌产气荚膜梭菌嗜血杆菌溃疡棒状杆菌产碱杆菌结核分枝杆菌无色杆菌放线菌、奴卡菌弧菌属细菌念珠菌气单胞菌(1)涂片检查:脓汁标本在培养的同时均应做涂片,涂片的成果首先报告临床提供最初的诊治根据,另首先可作为分离培养的质量指标.涂片见到的细菌均应分离得到.陈旧性脓液,其中细菌已被消化,涂片观察不到细菌,也不可能分离出细菌.(2)培养:血琼脂平板和中国蓝/麦康凯琼脂平板是基础的分离培养基,对于内源性感染病灶的分泌物往往是多个细菌混合存在,且以革兰氏阴性菌为主,这就需要选择培养基并以分区划线法接种。当疑有嗜血杆菌和奈瑟氏菌存在,应接种巧克力平板,置CO2环境中孵育.分离放线菌和奴卡菌,置于有氧环境中孵育,时间最少在一周以上,每天观察.3、操作流程脓汁、创伤分泌物涂片、染色镜检需氧培养结核菌培养革兰氏染色抗酸染色血琼脂平板、麦康凯平板罗氏培养基(巧克力琼脂)观察菌落涂片镜检同时分离纯培养确诊报告报告成果:对无菌部位的感染,从分泌物中分离到细菌,普通都有临床意义,按分离鉴定的菌种报告细菌名称及药敏实验成果.5、注意事项对拟定常居菌群的细菌与否为创伤感染的病原菌时，一定要注意该菌与否占数量上的优势。现在临床上分辨创伤感染或污染，重要看细菌向活组织深部侵入程度及每克组织含菌量与否达成一定阀值。痰液标本革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌肺炎链球菌卡他布兰汗菌A群链球菌脑膜炎奈瑟氏菌金黄色葡萄球菌流感嗜血杆菌厌氧球菌肺炎克雷伯氏菌结核分枝杆菌其它肠杆菌科细菌白喉棒状杆菌假单胞菌属细菌防线菌、奴卡菌嗜肺军团菌念珠菌上呼吸道栖居正常菌群:下呼吸道感染常见病原菌:链球菌棒状杆菌微球菌拟杆菌奈瑟氏菌梭杆菌嗜血杆菌厌氧球菌表皮葡萄球菌下呼吸道感染常见病原菌:(1)痰涂片检查:目的:为拟定标本与否适合做细菌培养;初步鉴定与否有病原菌存在.普通细菌涂片检查:挑选痰液中脓性或带血部分,涂成薄片,行革兰氏染色,镜检.根据其细菌形态、排列和染色性,大致能够初步推断菌属(或种).结核分枝杆菌涂片:以接种环取干酪样或脓性部分的痰制成涂片,作萋纳氏或金胺“O”荧光染色.放线菌及奴卡菌涂片检查:将痰液用生理盐水洗涤多次,如含血液,则用蒸馏水溶解红细胞,然后挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点,置载玻片上,覆以盖玻片,轻轻挤压,置高倍镜下观察构造.然后揭去盖玻片,干后作革兰氏及萋纳氏染色,镜检.(2)培养:下呼吸道的病原菌种类繁多,除普通细菌外,尚有结核菌、真菌、厌氧菌等.因此,除基本分离培养外,还须用特殊培养基和适宜的培养环境.(3)对于直接来自下呼吸道的标本,应定量或半定量做细菌计数培养.3、操作流程痰液及下呼吸道分泌物肉眼观察培养前解决及分离培养涂片检查血琼脂平板、麦康凯巧克力平板科玛嘉真菌显色平板罗氏培养基需氧培养CO2环境需氧培养培养八周35℃,18～24小时35℃,18～24小时35℃,18～24小时每七天观察观察菌落和涂片染色镜检菌种鉴定药敏实验拟定报告4、报告方式痰中的病原菌不少属于机会致病菌,与正常菌群同在,在报告时应作阐明.对于机会致病菌,普通仅当其数量超出正常菌群时才可报告鉴定成果及其敏感实验成果.检出致病菌时,除报告该菌的鉴定名称外,还需同时报告正常菌群的状况.普通以报告草绿色链球菌和奈瑟氏菌作为正常菌群存在的指标.报告的多个细菌应当注明各自所占比例状况,以“+”表达.未检出病原菌时,应报告“正常菌群”.5、注意事项痰标本的收集过程常受到唾液或鼻腔及咽部分泌物的非病原菌所污染，尤以慢性呼吸道感染多见，这直接干扰细菌学检查成果，患者接受某些药品的治疗，使有关菌受到克制，这样也影响阳性检出率。普通均收集晨痰，但在咳前必须充足漱口，避免口腔和鼻烟腔分泌物的污染。血液与骨髓标本1、标本的采集与解决：普通应在疾病早期，高热期间，抗菌药品治疗前，以无菌手法采血。采血量约为培养液的1/10（静脉血4-5ML，骨髓1-2ML），然后接种双相血培养瓶，充足混匀后送检。①普通采血部位为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。切忌在静滴抗菌药品的静脉处采用血标本。②采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入血培养基前，应更换针头或过火消毒针头。血培养瓶应在避光室温中保存，不必置冰箱保贮。②每次采血量成人5一10ml，婴幼儿l一5ml，培养基与血液之比以lO：1为宜，以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。④怀疑菌血症应尽早采血，体温上升阶段采血可提高阳性率，但要避免因等待而延误时机。对已用抗菌药品而又不能停药者，可在下次用药前采血。⑤每例最少采血两次，间隔0．5一lh，以利于提高阳性率和分辨感染菌与皮肤污染菌。⑥对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人，在病灶部位或髂前(后)上棘处严格消毒后抽取骨髓lml作增菌培养。2、检查环节:实验室接到送检的血培养瓶后,立刻放培养箱。血培养瓶置35℃培养，每日观察一次。根据肉眼观察有无细菌生长，摇匀哺育液并覆盖固相后继续培养。下列状况提示细菌生长：A.固相上有菌落或菌苔生长；B.均匀混浊；C.血细胞表面出现颗粒状或絮状沉淀物生长；D.血液发紫；E.液体表面有菌膜、菌环生长。有菌生长迹象，做以下解决：（1）取生长物涂片,做革兰氏染色.（2）取生长物移种血平板、巧克力等平板,进行分离以获纯。涂片成果证明为一种细菌生长，则可直接一增菌液做鉴定实验.如有二种或多个细菌同时生长,则必须通过分离培养,以获得纯菌后做鉴定.(3)无细菌生长迹象的培养瓶，在培养6d时盲种，培养24小时。未见生长报告为“培养7天无菌生长”。临床诊疗为亚急性心内膜炎者，可持续培养至2周再发报告，如可疑布氏菌时可培养28天，可疑军团菌时可培养10天。(4)需氧菌培养可转种到血平板或巧克力平板.用血平板可观察到细菌溶血状况,但可能丢失嗜血杆菌.如用巧克力平板,不仅嗜血杆菌可生长,脑膜炎奈瑟氏菌生长也好.转种的巧克力平板需要孵育有CO2的环境.3、操作流程:血液、骨髓液增菌/双相培养(需氧)涂片、染色、镜检分离培养手工法直接药敏35℃需氧培养及CO2环境培养4～6h(血琼脂、巧克力平板等分离)初步报告菌落观察涂片、革兰氏染色、镜检血平板上纯培养血清学检查菌种鉴定/药敏实验拟定报告4、报告成果:为做到快速,可采用下列方法:即每日开始工作时,首先检查血培养,如有细菌生长者,立刻解决.(1)疑有细菌生长者,经涂片、染色、镜检后,电话告知主管医师.(2)此后约6～8小时,应报告药敏实验的初步成果.电话告知主管医师,通报敏感的抗生素(3)任何时候平板上长出单个菌落,立刻完毕鉴定及原则化药敏实验,发出报告.(4)培养4天仍为阴性的标本,应告知临床医师,方便做对应解决.(5)培养7天仍为阴性者,报告无菌生长.5、注意事项（1）许多细菌均可引发菌血症，病原菌。条件致病菌乃至非条件致病菌，均可在机体抵抗力减少，大量应用抗生素的状况下于血中出现。（2）血液培养的阳性率与抽血时间、治疗与否亲密有关，为此应理解细菌出现的规律，力求在治疗前抽血，必要是进行骨髓培养，或停止用药，以消除药品对细菌的作用及快速培养的目的。（3）鉴于细菌培养阳性受许多因素影响，甚至有些培养可持续患者死亡后转为阳性，因此对血培养阴性成果除继续重复培养外，不能容易做出判断，应结合临床资料。对于罕见的细菌或临时鉴定不了的细菌，可进行药敏实验，并将菌种报送上级单位进行鉴定。菌种鉴定革兰阴性杆菌鉴定如果是革兰阴性杆菌，则需要做氧化酶实验，同时接种一支克氏双糖管，以观察乳糖、葡萄糖、硫化氢反映成果。成果观察：氧化酶双糖管板条选择配备浓度肠杆菌阴性K/A或A/AGN4861%加T溶液50ul非发酵菌*阳性K/K或K/-GN4852%，不加T溶液弧菌科（弧菌属，气单胞菌，邻单胞菌）阳性K/AGN4852%，不加T溶液注：*特例：不动杆菌属，嗜麦芽寡养单胞菌，唐菖蒲伯克霍尔德菌等菌的氧化酶阴性，但是非发酵菌。1)用空白的IF鉴定培养液将比浊仪上的数据调至100。2）将对应浓度的原则比浊管插入比浊仪进行比色，读数。3）如需要加T溶液，将先前调100的培养液中加入50ul的T溶液。4)取一根消毒好的棉签放入培养液中浸湿。在菌苔上滚动棉签使细菌粘在棉签上，而不要滑动棉签。注意避免将琼脂粘在棉签上。在试管内壁上旋转棉签，使菌块均匀地被研开。将棉签从上向下醮入培养液中并搅拌成均质混悬液，盖上盖子，颠倒混匀。校正菌液浓度在规定浓度范畴（原则管读数的±20）。你能够用继续加入菌落或加入培养液的办法调节菌液浓度。请在读数前颠倒混匀。检查混悬液充足混匀而没有凝块。混悬液无凝块对制备菌液是很重要的。如果只有极少的凝块，能够让它沉在管底，而只用上面的悬液。在板条上标记好菌株的名称编号、板条类型GN48），注意请标记在板条上，而不要标记在盖子上。请按无菌操作规定将菌悬液加入多通道移液器的加液槽中。将消毒好的移液器头插在移液器上，请注意插紧。用移液器吸取菌悬液150ul，注意观察每个移液器头内的液面是水平的。将菌液加入鉴定板的孔中，一种细菌加48个孔，（1-6列或7-12列）。注意不要将菌液溅入其它孔中。避免污染物混入，避免用移液器头触及板条底部而将碳源带走将板条的盖子盖好。肠杆菌科放35度培养18-24小时非发酵菌、弧菌科放30度培养18-24小时单位临床微生物实验室菌种鉴定程序修订次数：0修改日期：采用日期：文献编码：第2页共3页板条上仪器读数，打印报告。注：若分析成果为志贺氏菌属或沙门菌属细菌，必须结合血清学实验成果方可报告临床。2．革兰阴性苛养菌鉴定革兰阴性苛养菌涉及奈瑟菌属，嗜血杆菌属特性：氧化酶板条选择配备浓度奈瑟菌属阳性GN4820%+T溶液50ul嗜血杆菌（苛养菌）阳性GN4820%+T溶液50ul1)用空白的IF鉴定培养液将比浊仪上的数据调至100。2）将对应浓度的原则比浊管插入比浊仪进行比色，读数。3）如需要加T溶液，将先前调100的培养液中加入50ul的T溶液。4)取一根消毒好的棉签放入培养液中浸湿。、在菌苔上滚动棉签使细菌粘在棉签上，而不要滑动棉签。注意避免将琼脂粘在棉签上。在试管内壁上旋转棉签，使菌块均匀地被研开。将棉签从上向下醮入培养液中并搅拌成均质混悬液，盖上盖子，颠倒混匀。校正菌液浓度在规定浓度范畴（原则管读数的±20）。你能够用继续加入菌落或加入培养液的办法调节菌液浓度。请在读数前颠倒混匀。检查混悬液充足混匀而没有凝块。混悬液无凝块对制备菌液是很重要的。如果只有极少的凝块，能够让它沉在管底，而只用上面的悬液。在板条上标记好菌株的名称编号、板条类型GN48），注意请标记在板条上，而不要标记在盖子上。请按无菌操作规定将菌悬液加入多通道移液器的加液槽中。将消毒好的移液器头插在移液器上，请注意插紧。用移液器吸取菌悬液，注意观察每个移液器头内的液面是水平的。用移液器吸取菌悬液150ul，注意观察每个移液器头内的液面是水平的。将菌液加入鉴定板的孔中，一种细菌加48个孔，（1-6列或7-12列）。注意不要将菌液溅入其它孔中。避免污染物混入，避免用移液器头触及板条底部而将碳源带走将板条的盖子盖好。16）嗜血杆菌，奈瑟菌放35度CO2培养箱培养18-24小时。17）板条上仪器读数，打印报告。3．革兰阳性球菌/杆菌操作办法若为革兰阳性球菌，则必须做触酶实验。若触酶实验为阳性，涂片革兰染色为葡萄状排列。则需做凝固酶实验（分玻片法和试管法）。触酶板条选择配备浓度葡萄球菌，微球菌阳性GP4820%+T溶液50ul链球菌阴性GP4820%+T溶液50ul无芽胞杆菌GP4820%+T溶液50ul芽胞杆菌GP4828%+T溶液50ul1)用空白的IF鉴定培养液将比浊仪上的数据调至100。2）将对应浓度的原则比浊管插入比浊仪进行比色，读数。3）如需要加T溶液，将先前调100的培养液中加入50ul的T溶液。4)取一根消毒好的棉签放入培养液中浸湿。在菌苔上滚动棉签使细菌粘在棉签上，而不要滑动棉签。注意避免将琼脂粘在棉签上。在试管内壁上旋转棉签，使菌块均匀地被研开。将棉签从上向下醮入培养液中并搅拌成均质混悬液，盖上盖子，颠倒混匀。校正菌液浓度在规定浓度范畴（原则管读数的±20）。你能够用继续加入菌落或加