山丹叶中黄酮类化合物的提取与分析

山丹叶中黄酮类化合物的提取与分析

山丹的学名是斑百合，也被称为红百合，也被称为细叶百合。山丹全身是宝，包括司令员、药物滥用和种子。山丹鳞茎、嫩茎叶可食用,也可入药,滋补强壮,润肺,止咳,清热安神,祛痰、利尿,劳嗽咳血、虚劳咳血、虚烦惊悸、浮肿、小便不利、骨折和外伤等。分布在吉林、辽宁、内蒙古、河北、河南、山东、江苏、江西、湖南、湖北、陕西、四川、贵州等地。黄酮类化合物的生理功能多种多样,如维生素P样作用、抗辐射、抑菌抗病毒作用、抑制癌细胞的生长或抗癌作用、解痉挛作用、抗自由基,抑制酪蛋白激酶Ⅱ(CKⅡ)、降低血压、女性激素样等作用,制胆碱酯酶、扩张冠状动脉、增大脑血流量、改善脑营养的作用等,此外还有大量研究表明黄酮类化合物有抗炎阵痛、免役调节、治疗骨质疏松、降血脂、止血、镇咳祛痰、降低血管脆性,制血小板聚集等药理作用。近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄酮类化合物以其广谱的生理活性引起了人们的广泛重视。山丹黄酮的研究目前未见文献报道,所以对其研究具有创新性,再者山丹栽培技术简单,容易繁殖具有观赏、食用和药用价值,生态、经济效益显著,开发利用前景十分广阔。1材料和方法1.1药品、试剂与标准品无水乙醇(分析纯,青岛化学试剂厂)、亚硝酸钠(分析纯,江苏双源化工厂)、硝酸铝(分析纯)、氢氧化钠(分析纯,中国上海埃彼化学试剂有限公司)、芦丁标准品(分析纯,中国药品生物制品检定所)、山丹叶提取液(取5g山丹叶索氏提取得滤液,定容至250mL)。紫外-可见分光光度计(日本岛津UV-1601)、电子分析天平。1.2测试方法1.2.1硝酸盐铝溶液中总总吸收剂a分别精密吸取芦丁标准液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL于5个10mL容量瓶中,分别加入5%的亚硝酸钠溶液0.7mL,摇匀,放置5min,再加入10%的硝酸铝溶液0.7mL,摇匀,放置6min,再加入4.3%的氢氧化钠溶液5mL,用30%的乙醇定容到刻度,摇匀,放置15min后,以在510nm处做测定波长,以584nm处做参比波长,测定吸光度,以不加标准液的空白试剂做参比液。得到相应的吸光度A。以A对溶液浓度C(g/L)进行回归分析得方程C=0.0781A-0.9912,R2=0.9981,标准工作曲线如图1所示。1.2.2硝酸盐亚硝酸钠标准液的制备准确称取5.0g山丹叶粉末置于索氏提取器中,烧瓶中加入浓度为70%的乙醇150mL,水浴加热提取4h,定容为250mL,待用。移取2mL提取液到10mL的容量瓶,分别加入5%的亚硝酸钠溶液0.7mL,摇匀,放置5min,再加入10%的硝酸铝溶液0.7mL,摇匀,放置6min,再加入4.3%的氢氧化钠溶液5mL,用30%的乙醇定容到刻度,摇匀,放置15min后,以在510nm处做测定波长,以584nm处做参比波长,测定吸光度,以不加标准液的空白试剂做参比液。得到相应的吸光度,代入方程y=0.0781x-0.0019,求出y,并按下式计算:总黄酮的含量=(y×10×250/2)/(1000×5)×100%2结果与分析2.1山丹叶提取物中黄酮类化合物的定性鉴定2.1.1化学方法化学方法证明提取物中有黄酮类化合物,见表1。2.1.2山丹叶提取液的化学成分山丹叶提取物的紫外光谱(图3)有两个最大吸收峰,分别为322.0nm和267.0nm,大多数黄酮类化合物在240~400nm区域有两个主要吸收带,带Ⅰ在300~400nm,带Ⅱ在240~285nm之间,由此可见山丹叶提取液的有效成分为黄酮类化合物。2.2方法的精度和精度2.2.1标准曲线及方法分别精密吸取0、2mL样品液于2个10mL容量瓶中,以30%乙醇做参比液,用1.2.2中的方法显色后,放置15min后,以在510nm处做测定波长,以584nm处做参比波长测定吸光度,再每隔30min测定一次,设定时间为135min,测定结果见表2。由表2可知:平均吸光度A=0.280,标准偏差S=0.001225,变异系数RSD=0.437%。试验结果表明在此期间溶液的吸光度基本无变化。2.2.2测定波长的确定分别精密吸取芦丁标准液2mL于5个10mL容量瓶中,用1.2.2中的方法显色,以不含芦丁标准液的试剂为参比液,以在510nm处做测定波长,以584nm处做参比波长测定吸光度,测定结果见表3。由表3可知,溶液的浓度平均值C=0.02034g/L、标准偏差S=0.0001342、变异系数RSD=0.660%。2.2.3标准曲线的测定分别精密吸取1mL山丹叶提取液溶液于5个10mL容量瓶中,再各加入1.5mL的芦丁标准液。以不含样品液和芦丁标准液的空白试剂为参比液,用1.2.2中的方法显色后,以在510nm处做测定波长,以584nm处做参比波长测定吸光度,测定结果见表4。由表4可知,溶液浓度的平均值C=0.02500g/L,标准偏差S=0.000240,变异系数RSD=0.957%,平均回收率=(X-X1)/X标=99.33%。2.2.4空白试剂检测分别精密吸取山丹叶提取液2mL于3个10mL容量瓶中,用1.2.2中的方法显色,以不含样品液的空白试剂为参比液,以在510nm处做测定波长,以584nm处做参比波长测定吸光度,得到A1、A2、A3值,结果见表5。由表5可知:3个样品吸光度的平均值为:A=0.283,总黄酮的含量=(y×10×250/2)/(1000×5)=0.505%3准确度、精密度