小麦籽粒抗蚜威残留量测定方法的建立

小麦籽粒抗蚜威残留量测定方法的建立

抗蚜虫是一种选择性的杀螨剂，属于氨基甲基丙烯酸酯农药。我国粮食籽粒中抗蚜威的最高残留限量为0.05mg/kg。由于抗蚜威本身含氮,国内多采用气相色谱法,以氮磷检测器进行测定,该方法的局限性在于氮磷检测器中的硅酸铷玻璃球对质量和使用要求十分苛刻,而且对前处理的要求极为严格。国外报道了许多用液相色谱柱后衍生测定氨基甲酸酯类农残的方法,国内近年来也有少数学者使用该方法进行测定,但是,柱后衍生要求仪器条件高,试验方法耗费大。因此,笔者研究了利用高效液相色谱仪,以紫外检测器进行检测的方法,并在提取和净化的过程中发现了快速、准确、简便的处理途径。1材料和方法1.1仪器和试剂1.1.1配方2:心理型-1高效液相色谱仪:岛津LC-10A,紫外检测器;旋转蒸发器:EYELAN-1001;氮气吹仪:DSY-Ⅲ型(北京东方精华苑科技有限公司);FW100型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市定山湖检测仪器厂)。1.1.2标准样品与标准储备液甲醇为色谱纯试剂,二氯甲烷(A.R.,重蒸40℃馏分),石油醚(A.R.,重蒸30℃~60℃馏分),氯化钠(A.R.),无水硫酸钠(A.R.)。标样:抗蚜威标准品,纯度99.5%(江苏省江阴凯江农化有限公司)。标准储备液:精密称取标准品0.0503g,用甲醇溶解定容于100mL容量瓶(500mg/L),0℃~4℃保存。供试小麦(品种为石新733),2005年6月采自河北省清苑县耿桥村。1.2紫外过滤器色谱柱C18(250mm×4.6mmi.d.,5µmi.d.),紫外检测器,柱温40℃,流动相:甲醇-水(体积比为55∶45),流速:1.5mL/min,检测波长:246nm,进样量:20µL。1.3方法1.3.1无水硫酸钠的加入小麦籽粒经粉碎机粉碎过20目筛作为试样。准确称取40.00g试样,置于250mL具塞锥形瓶中,加入10g无水硫酸钠,准确加入100mL无水甲醇。浸泡过夜,于超声波30℃提取30min。然后经快速滤纸过滤于量筒中,收集50mL滤液,转入250mL分液漏斗中,用50mL50g/L氯化钠溶液洗涤量筒,并入分液漏斗中。1.3.2样品的提取和浓缩于盛有试样提取液的250mL分液漏斗中加入50mL石油醚,振荡1min,静置分层后将下层(甲醇-氯化钠溶液)放入第二个250mL分液漏斗中,加25mL甲醇-氯化钠溶液(体积比1∶1)于石油醚层中,振荡30s,静置分层后,将下层并入甲醇-氯化钠溶液中。于盛有试样净化液的分液漏斗中,用二氯甲烷(70、70、30mL)依次提取3次,每次振摇1min,静置分层后将二氯甲烷层经无水硫酸钠脱水后于梨形瓶中,于50℃水浴上减压浓缩至1mL左右,转入10mL刻度试管中,用二氯甲烷反复洗涤梨形瓶并入刻度试管中。然后用氮气吹尽溶剂,用甲醇溶解残渣并定容至2mL,供液相色谱分析用。1.4计算用外标法(峰面积)—标准曲线法定量。2结果与讨论2.1标准曲线和检出限配制质量浓度为0.01、0.03、0.09、0.2、0.4、0.8mg/L的抗蚜威标准系列溶液,在上述色谱条件下进行两次平行测定,以峰面积(平均值)为纵坐标,质量浓度为横坐标做标准曲线,其标准曲线方程为y=570926x+11567,相关系数r=0.9999。结果表明,抗蚜威质量浓度在0.01~0.4mg/L范围内,其含量与峰面积有良好的线性关系。按3倍噪音计算,方法最低检出质量浓度为0.02mg/L。由于在样品处理过程中,相当于20.00g样品最终定容体积为2.0mL,即相当于每升溶液含10.0kg样品。所以,本方法最低检出限为0.002mg/kg。由此表明,本方法适用于痕量抗蚜威的定量分析。2.2提取溶剂的选择文献中不同的样品提取方法不同,有乙酸乙酯、乙腈、甲醇、苯等用于提取不同样品中的抗蚜威。笔者试验比较了4种溶剂对小麦籽粒样品的提取效果。结果显示,乙酸乙酯、苯提取杂质峰多,并且回收率低,乙腈、甲醇对小麦籽粒中的抗蚜威的回收率都比较高而且稳定。但色谱纯乙腈成本较高,所以选择了甲醇作为提取溶剂。试验还比较了用甲醇在超声波清洗器和电动振荡器上提取不同时间的提取效果。超声波30℃提取30min即可获得稳定、满意的回收率。在样品净化过程中,本底干扰物多的多采用固相萃取小柱,其净化效果好,但成本较高,试验只采用简单的液液分配对样品加以净化,结合适宜的仪器检测条件就可以达到准确测定的要求。2.3加标回收率试验取小麦籽粒的空白样品,添加一定质量浓度的标准样品液,充分混匀,放置1h,按上述方法测定,3次重复。结果为添加0.02~0.5mg/kg,回收率为86.75%~97.39%;变异系数为0.25%~1.