体外受精-胚胎移植中精精浓度对胚胎质量的影响

体外受精-胚胎移植中精精浓度对胚胎质量的影响

体外受精可渗透（ivf-et）在中国开展了20多年，但许多中心的精子浓度不同，最佳提取浓度也不同。此外，需要多中心预测和随机对照试验。本文希望通过我中心147个IVF-ET周期比较同周期卵子不同授精精子浓度下的受精率、多精受精率、卵裂率、优质胚胎率等指标,探索合适的授精精子浓度,改善胚胎质量,提高临床妊娠率。1数据和方法1.1mii卵数及成熟卵率2011年5-12月在我中心行常规IVF的患者共147周期,获卵1807个,平均取卵数(12.3±8.2)个,MII卵数1536个,成熟卵率85%。平均年龄(30±2.3)岁,不孕年限(4.3±3.1)年,其中原发不孕41周期,继发不孕106周期,男方精液密度>15×106/mL,前向运动精子a+b>30%,正常精子形态>10%。1.2方法1.2.1阴道取卵试验女方采用长方案超促排卵,注射HCG5000～10000IU后36h在B超引导下经阴道取卵。注射HCG后39～40h微滴法授精。1.2.2抗原卵母细胞制备培养采用vitrolife培养液,微滴法授精,每培养皿(Falcon35mm)内6～7个40μL微滴,每微滴内放置一枚卵母细胞,授精时加入精子悬浮液10μL,微滴终体积50μL,HCG后39～40h加精,精液处理采用梯度离心法。1.2.3mii卵的授精浓度根据加精子数随机将同周期卵母细胞分3组,A组:精子浓度5000个前向运动精子/液滴,共503个MII卵;B组:7500个前向运动精子/液滴,共521个MII卵;C组:采用我中心常规授精浓度10000个前向运动精子/液滴,共512个MII卵。6%CO2培养箱培养,授精4h后剥除颗粒细胞,授精后18～20h观察各组受精情况,d2观察胚胎分裂情况,培养至d3观察胚胎情况并将胚胎分为4级。1.2.4卵裂球大小不均匀的组织根据卵裂球大小、是否均匀、碎片多少及发育速度将胚胎分为4级,1级:卵裂球≥6细胞,大小均匀,形状规则,无碎片或碎片<5%;2级:卵裂球≥6细胞,大小略不均匀,形状略不规则,碎片<20%;3级:卵裂球<6细胞或卵裂球≥6细胞,卵裂球大小明显不均匀,形状明显不规则,碎片21%～50%;4级:卵裂球大小严重不均匀,形状严重不规则,碎片>50%。1级和2级胚胎为优质胚胎。1.3统计处理应用SPSS11.5统计学软件进行数据分析,比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1受精率与时间相关性A、B和C组受精率分别为72.37%、78.58%、79.49%,A组受精率与B组、C组比较差异有显著性(P<0.05),A组3个周期12个MII卵受精3个,受精率<30%。2.2不同的优胚率,比的历史显示,b组的优胚率有哪些?3组多精受精率、卵裂率、优胚率比较差异无显著性(P>0.05),B组的优胚率有增高的趋势,但统计学差异无显著性(P>0.05)。3组正常受精率、多精受精率、卵裂率及优质胚胎率结果,见表1。3精子浓度对提升品精率的作用胚胎培养是常规体外受精(IVF)中的重要环节,移植高质量的胚胎是提高临床妊娠率的关键因素,如何获得高质量的胚胎是临床医师和胚胎学家关注的焦点,也是实验室人员研究的重点,在体外受精的过程中精子数量的多少直接影响今后胚胎的发育。研究发现,卵母细胞与高密度的精子长时间作用,精子代谢产生的多种有害物质如活性氧成分(ROS)、氧自由基等会引起细胞膜流动性降低,促使DNA碎片形成和胚胎发育停止。随着国内大多中心短时受精的应用,在一定程度上改善了胚胎质量,但常规IVF正常受精所需的精子参数范围尚不十分清楚,在自然生理状况下,最终到达受精部位的精子数与卵子数比例不超过10∶1。过去认为常规IVF每个卵子约需5万～10万条精子,是体内所需精子数量的几百倍,具体的机制尚不十分清楚,目前大多中心的授精浓度在(1～10)×104/每卵母细胞,是否能在更少的精子浓度下获得更多的优质胚胎,降低多精受精率是本文研究的重点。笔者采用同周期卵母细胞在A、B、C3组不同受精精子浓度下,授精后4h剥脱颗粒细胞的方法进行研究,结果显示,A组的受精率与B组、C组比较显著降低(P<0.05),优质胚胎率及多精受精率与C组比较差异无显著性,因此,将授精精子数量降至5000个前向运动精子/每卵母细胞时,受精率降低,同时有3个周期受精率<30%,增大受精失败的风险,这可能与精子在体外环境下不能同时获能或体外培养的卵子颗粒细胞团块较大,精子不易穿透有关。B组与C组比较受精率、多精受精率、卵裂率、优胚率差异均无显著性(P>0.05),但优胚率有增加的趋势,由此认为,将精子浓度调整为7500个前向运动精子/每卵母细胞是较为理想的授精浓度。多精受精常见于IVF过程,授精精子数量的增多可导致卵细胞皮质颗粒释放延迟,导致较高频率的多精子受精。但本研究在不同授精浓度下受精结果显示,3组多精受精的比率无显著性差异,一方面本研究的精子浓度在一个相对较低的范围,另一方面本研究是应用同周期卵母细胞,卵子的成熟度相同,故多精受精率差异无显著性。Yie等研究认为,多精受精主要发生于成熟卵细胞,卵细胞透明带下皮质颗粒的释放是抗多精子受精的机制之一。笔者推测由于促排卵过程中卵母细胞成熟的不同步性,有的卵细胞过熟出现皮质颗粒缺乏等缺陷导致多精受精的发生,而其他卵细胞处于较理想的成熟状态。因此,在一定的授精精子浓度范围,合适的促排卵方案对获得高质量的卵子,降低多精受精率更为关键。综上所述,IVF受精精子浓度在7500～10000个前向运动精子/每卵母细胞范围其胚胎培养结果较为理想,精子浓度在7