酸抑制胰蛋白酶活性研究

[15]）进行结合。初始时胰蛋白酶结构中存在Gln174，Ser37以及四处可单宁酸可与胰蛋白酶进行结合的部位，Tyr39，His40，Phe41，Tyr151形成疏水作用。本论文采用自动分子对接软件构建了胰蛋白酶与单宁酸结合模型，分析了胰蛋白酶与单宁酸之间的相互作用以及确定了二者的结合位点。利用蛋白质结构分析软件发现胰蛋白酶的第11位点谷氨酰胺（Gln）、第12位点丙氨酸（Ala）、第71位点谷氨酸（Glu）、第73位点苏氨酸（Thr）、第98位点天冬氨酸（Asp）、第140位点丝氨酸（Ser）、第143位点甘氨酸（Gly）、第145位点苏氨酸（Thr）、第178位点丝氨酸（Ser）、第179位点苏氨酸（Thr）、第183位点谷氨酸（Glu），共计11个氨基酸组成活性位点与单宁酸发生疏水基相互作用,胰蛋白酶与单宁酸相互作用的分析主要是依靠疏水作用力，范德华力以及极性溶剂作用力以及活性位点的确定，为今后有关多酚-胰蛋白酶抑制剂的疗效进一步起到积极作用。7.本论文采用自动分子对接软件构建了胰蛋白酶与单宁酸的结合模型，计算出单宁酸与胰蛋白酶两者形成复合物的分子对接数据，然后运用分子对接软件中的对接软件打分函数vina，按照默认参数对分口袋位置结合的强弱，因此通过数据结果可以看到单宁酸与胰蛋白酶的活性口袋对接结合较强，最佳打分结果（affinity）为-10.1kcal/mol，其RMSD与距离最佳（bestmode）均为0。代表其几何构象与最佳模型偏差为0，基本吻合为之后的实践提供较为客观的理论基础。通过分子模拟软件分析得到单宁酸与胰蛋白酶的结合能力：胰蛋白酶与单宁酸的结合亲和力为-27.215kcal/mol，表明胰蛋白酶与单宁酸结合形成的复合物对胰蛋白酶形成一定且较强的抑制效果，并且在其中对两者结合起到的主要作用力为范德华力和极性溶剂作用力，这与单宁酸和胰蛋白酶活性位点对接时单宁酸结构发生变化有关，即单宁酸晶体结构在分子动力学模拟中需溶剂化方可与胰蛋白酶活性位点进行结合。可通过研究单宁酸-胰蛋白酶相互作用形成的有关胰蛋白酶抑制剂，通过与胰蛋白酶的丝氨酸结合，令其失活，该类物质可通过抑制激肽释放酶以及纤溶酶达到较好的止血效果,减少术后病人的出血,存在不良作用小，安全性高，可在临床治疗上应用于手术止血，以及治疗胰腺炎等重症病状，同时，利用有关生物信息学分子计算软件来计算分子对接以及模拟分子体系的运动状态的理论研究是属于新兴技术，为后期可在优化实验方案中扮演重要角色，两者的结合是值得生物界继续深入研究的新领域。参考文献王琛.单宁酸对胰蛋白酶活性的影响[J].食品与药品,2013,15(02):104-10王音.单宁酸与固定化胰蛋白酶相互作用的研究[J].山西师范大学学报(自然科学版),2014(03):50-53.李海鹏.单宁酸与胰蛋白酶和牛血清白蛋白相互作用的研究[D].山西大学,2006.苏浩.几类金属酶和糖苷酶催化机理的理论研究[J].中国博士学位论文全文数据库,2017(08):162-162.baby～光.[EB/OL]./article/articleInfo?id=394&type=2.2016Aspirin.[EB/OL].浅谈同源建模与分子对接/thread-40078-1-1.html孙德福.艾滋病毒蛋白酶异位抑制剂体系的分子动力学研究[D].山东师范大学,2012.陈聪李维仲.甘油水溶液氢键特性的分子动力学模拟[J].物理化学学报,2009(03):117-122.李继存科学网博客.[EB/OL]./blog-548663-1104199.html.2周放项杰占卫红王培东何俊才余晓丽张可.结核分枝杆菌Rv3248c生物信息学分析及同源建模[J].武汉轻工大学学报,2019(03):31-35.谷雨.[EB/OL]./p/66055187.2019-05-16-.奚宇兰,任建东,田伏洲,何菱.计算机辅助设计的新型胰蛋白酶抑制剂的合成及其抑制活性[J].合成化学,2015,23(09):811-815.董悦丽,郭权,孙斌,康玲.药物分子对接动态任务迁移优化[J].吉林大学学报(工学版),2015,45(04):1253-1259吕欣桐,李春艳.Wnt信号通路中关键蛋白磷酸化修饰作用与肿瘤的关系[J].实用临床医药杂志,2017,21(05):220-222+226.GaboriaudC,SerreL,Guy-CrotteO,etal.CrystalStructureofHumanTrypsin1:UnexpectedPhosphorylationofTyr151[J].JournalofMolecularBiology,1996,259(5):0-1010.

附录附录1#sp|P07477|TRY1_HUMANLength:247#sp|P07477|TRY1_HUMANNumberofpredictedTMHs:0#sp|P07477|TRY1_HUMANExpnumberofAAsinTMHs:0.01405#sp|P07477|TRY1_HUMANExpnumber,first60AAs:0.01364#sp|P07477|TRY1_HUMANTotalprobofN-in:0.00632sp|P07477|TRY1_HUMAN TMHMM2.0 outside 1247附录2PredictProtein对人胰蛋白酶跨膜区位置和拓扑结构预测结果（PHD输出HTML）附录3PredictProtein运用DISULFIND默认算法对胰蛋白酶二硫键预测的结果图表输出附录4胰蛋白酶氨基酸序列如下：>sp|P07477|TRY1_HUMANTrypsin-1OS=HomosapiensOX=9606GN=PRSS1PE=1SV=1MNPLLILTFVAAALAAPFDDDDKIVGGYNCEENSVPYQVSLNSGYHFCGGSLINEQWVVSAGHCYKSRIQVRLGEHNIEVLEGNEQFINAAKIIRHPQYDRKTLNND