硫熏对半夏总生物碱含量的影响

硫熏对半夏总生物碱含量的影响

半夏是天南星科植物半夏的一种蝴蝶。具有润湿、去粘液、止吐、消瘀、散粘液的功效。主要用于粘液、咳嗽、哮喘、呕吐和胃部反呕吐。这是四川重要的道教材料之一。由于半夏在贮藏过程中易产生褐变,为保证药材美观及防潮防蛀,常采用硫熏方法处理,而硫熏工艺导致的二氧化硫残留量会对人体造成伤害。半夏中的总生物碱具有止呕、抗炎作用,其总生物碱的含量是半夏药理作用的主要体现。因此,笔者对硫磺熏过和未用硫磺熏过的半夏药材中总生物碱含量进行了测定。1材料和方法1.1药品、试剂与仪器半夏,购自成都市中药材市场,经西南交通大学生命科学与工程学院宋良科教授鉴定为半夏[Pinelliaternata(Thunb.)Breit.]的块茎。TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);盐酸麻黄碱购自中国药品生物制品检定所,批号为714-8501;柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH值5.4)、溴麝香草酚蓝标准液均在临用前配制,其余所用试剂均为分析纯。1.2方法方法学考察采用未经硫磺熏过的半夏,待方法确定后测定3批半夏及其硫磺熏制品。1.2.1时间的确定和再使用将新鲜半夏脱皮洗净后,置放有硫磺的瓷杯中,点燃硫磺,待杯中充满烟雾时,密闭瓷杯,室温闷制12h,取出放置1～2h,观察其表面颜色,若颜色变黄则需要再熏制5～8h。待表面颜色变白并不再变化时,取出,烘干,备用。1.2.2对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品10.0mg,置50ml容量瓶中,加蒸馏水制成含盐酸麻黄碱0.2mg/ml的溶液,即得对照品溶液。1.2.3不同浓度氯社会树高聚物样品的提取称取半夏样品粉末1.5g,精密称定,置50ml三角瓶中,加浓氨水1.0ml,湿润后,加氯仿10.0ml,称定重量。冷浸3h后分别超声提取60min,加氯仿补足减失的重量,过滤,残渣以10.0ml氯仿分3次洗涤,合并滤液与洗液,40℃以下回收氯仿至干。加入8.0ml氯仿使溶解并转移至25ml分液漏斗中,再依次加入10.0ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液和1.0ml溴麝香草酚蓝标准液,充分振摇后,静置15min,分取氯仿层,水层再用氯仿同法萃取2次,每次8.0ml。合并氯仿层,用氯仿定容于25ml容量瓶内,即得供试品溶液。1.2.4全波长光谱扫描按供试品溶液的制备方法,取缺半夏样品粉末制备空白对照液。将对照品溶液、供试品溶液和空白对照液在200～800nm波长范围内进行全波长光谱扫描。结果半夏样品供试液和对照品溶液在418nm处有最大吸收,空白对照液无干扰,故选择418nm波长作为测定波长(图1)。1.2.5制作空白的制备分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml的盐酸麻黄碱对照品溶液(C=0.2024mg/ml)至分液漏斗中,加蒸馏水至2.0ml,加入8.0ml氯仿,再依次加入10.0ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液和1.0ml溴麝香草酚蓝标准液,充分振摇后,静置15min,分取氯仿层,水层再用氯仿同法萃取2次,每次8.0ml。合并氯仿层,用氯仿定容于25ml容量瓶内,即得。以相应的试剂同法制作空白。按紫外分光光度法(《中国药典》2005年版一部附录VA),在418nm波长处测定吸光度。1.2.6试品溶液的制备精密称取半夏样品粉末1.5g,按供试品溶液制备方法制备。取氯仿8.0ml,同法操作,作为空白对照液。在418nm处测定其吸收度,重复测定5次。1.2.7供试品溶液制备精密称取半夏样品粉末5份,每份1.5g,按供试品溶液制备方法制备。取氯仿8.0ml,同法操作,作为空白对照液。在418nm处测定其吸光度,重复测定5次。1.2.8同法操作时吸光度测定精密称取半夏样品粉末1.5g,按供试品溶液制备方法制备。取氯仿8.0ml,同法操作,作为空白对照液。在0、30、60、90、120、150、180min时间在418nm处测定吸收度。RSD=1.17%,表明供试品溶液在180min内基本稳定。1.2.9盐酸麻黄碱对照品溶液的制备取半夏样品粉末5份,每份0.7g,精密称定,精密加入盐酸麻黄碱对照品溶液(C=0.2024mg/ml)1.2ml,按供试品溶液制备方法制备。取氯仿8.0ml,同法操作,作为空白对照液。在418nm处测定其吸光度。1.2.1样品含量测定按照以上方法测定3批半夏及其硫磺熏制品,并扣除样品中所含水分(参照《中国药典》2005版一部附录IXH第一法测定样品中所含水分)。2结果与分析2.1回归归归方程以吸光度A为纵坐标,对照品浓度C为横坐标,绘制标准曲线得回归方程:A=16.6910C+0.0092,r=0.9985。结果表明,盐酸麻黄碱在0.0081～0.0405mg/ml的范围内线性关系良好(图2)。2.2准确度的研究精密度试验测定结果得出,RSD=0.87%,表明仪器精密度良好。2.3重复试验试验测得半夏样品中总生物碱含量5次测定的平均值为0.346mg/g,RSD=2.89%,表明该方法重复性较好。2.4稳定性试验稳定性试验结果得出,RSD=1.17%,表示供试品溶液在180min内基本稳定。2.5rsd的测定试验测得5份样品的回收率依次为96.99%、100.49%、96.51%、102.02%、103.83%,平均值为99.97%,RSD=3.17%。2.6%不稳定因素,即符合以下情况试验测得半夏(生药材)中3个样本的总生物碱含量分别为0.346、0.292、0.333mg/g,平均值0.324mg/g;硫熏半夏中总生物碱含量分别为0.268、0.261、0.274mg/g,平均值0.268mg/g。3硫易添加量对药材质量的影响通过试验测定半夏硫