酶促反应动力学

第10章酶促反响动力学kineticsofenzyme—catalyzedreactions.酶促反响动力学:是研究酶促反响的速率以及影响此速率的各种因素的科学。影响酶速率的各种因素1.底物浓度2.酶的抑制剂3.温度4.pH5.酶的激活剂.第一节

底物浓度对酶反响

速率的影响.底物浓度对速率影响的曲线图当底物浓度较低时，表现为一级反响〔其反响速率与浓度的关系能以单分子反响的动力学方程式表示：v=dc/dt=kc〔线性关系〕随着底物浓度的增加，反响表现为混合级反响。当底物浓度到达相当高时，表现为零级反响〔与底物浓度无关〕。.为解释这一实验结果，Henri和Wurtz提出了酶底物中间络合物学说。该学说认为当酶催化某一化学反响时，酶首先和底物结合生成中间复合物(ES)，然后生成产物(P)，并释放出酶。反响式：

S+EESP+E.二、酶促反响的动力学方程式1．米氏方程式的推导〔假设K4为0〕k1k3k2k4对于ES的形成速度：d[ES]/dt=k1([E]—[ES])*[S]对于ES的分解速度：-d[ES]/dt=k2[ES]+k3[ES]S+EESP+E.二、酶促反响的动力学方程式当酶体系处于动态平衡时，ES的形成速度和分解速度相等k1([E]—[ES])*[S]=k2[ES]+k3[ES]移项([E]—[ES])*[S]/[ES]=(k2+k3)/k1令：Km=(k2+k3)/k1[ES]=[E]*[S]Km+[S]〔1〕.因为当底物浓度很高时，酶反响速率〔v〕与[ES]成正比，即v=k3[ES],代入〔1〕式得：V=k3[E][S]/(Km+[S])〔2〕当底物浓度很高时所有的酶都被底物饱和而转变为ES复合物，即[E]=[ES]，酶促反响到达最大速度Vmax，所以Vmax=k3[ES]=k3[E]〔3〕V=Vmax*[s]Km+[S]米氏方程，Km米氏常数.该方程式说明：当Km及Vmax时，酶反响速率与底物浓度之间的定量关系。假设以[S]作横坐标，v作纵坐标作图，可得到一条双曲线vVmax½VmaxKm[S].

1.Km值的物理意义当反响速率到达最大速率一半时，即υ=1/2Vmax,可以得到[S]=KmKm值的物理意义，即Km值是当酶反响速率到达最大反响速率一半时的底物浓度，单位是mol／l。三、Km值的意义

υ=Vmax*[s]Km+[S].三、Km值的意义2.Km值是酶的一个特征常数：Km值的大小只与酶的性质有关，而与酶的浓度无关。因此，在一定条件下，可以通过Km值来区别不同的酶。Km值随测定的底物、反响的温度、pH及离子强度而改变。各种酶的Km值相差很大，大多数酶的Km值介于10-6~10-1mol/L之间。酶底物Km(mmol/L)脲酶尿素25溶菌酶6-N-乙酰葡萄糖胺0.006葡萄糖-6-磷酸脱氢酶6-磷酸-葡萄糖0.058胰凝乳蛋白酶苯甲酰酪氨酰胺2.5甲酰酪氨酰胺12.0乙酰酪氨酰胺32.0Km=(k2+k3)/k1.三、Km值的意义3.Km值可以判断酶的专一性和天然底物有的酶可作用于几种底物，因此就有几个Km值，其中Km值最小的底物称为该酶的最适底物也就是天然底物。Km愈小，到达最大反响速率一半所需要的底物浓度就愈小，底物最适。.三、Km值的意义4.判断反响速率v和Vmax之间的关系：假设某个酶的Km值，就可以计算出在某一底物浓度时，其反响速率v相当于Vmax的百分率。反之。V=Vmax*[s]Km+[S].三、Km值的意义5.Km值可以帮助推断某一代谢反响的方向和途径，这对了解酶在细胞内的主要催化方向及生理功能有重要意义。催化可逆反响的酶，对正逆两向底物的Km值往往是不同的，测定这些Km值的差异以及细胞内正逆两向底物的浓度，可以大致推测该酶催化正逆两向反响的效率，.四、Vmax的意义

在一定酶浓度下，酶对特定底物的Vmax也是一个常数。pH、温度和离子强度等因素也影响Vmax的数值，同一种酶对不同底物的Vmax也不同。.转换数的定义当底物浓度很高时，Vmax=k3[ES]=k3[E]，k3表示当酶被底物饱和时，每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，这个常数又叫做转换数(简称TN)，又称为催化常数(catalyticconstant，kcat)。kcat值越大，表示酶的催化效率越高。.五、Km和Vmax值的测定主要利用作图法测定(1)测定不同底物浓度的反响初速率，以v-[S]作图，可以得到Vmax，再从1/2Vmax，可求得相应的[S]，即Km值。Vmax½Vmax[S]vKm.五、Km和Vmax值的测定(2)双倒数作图法将米氏方程式两侧取双倒数，以1/v-1/[s]作图，得出一直线..五、Km和Vmax值的测定(3)Hanes—Woolf作图法将前式两边均乘以[S]得：以[s]/v～[s]作图，得一直线，横轴的截距为-Km，斜率为1/Vmax.第二节酶的抑制作用.抑制与失活之间的关系失活作用(inactivation):使酶蛋白变性而引起酶活力丧失的作用,变性剂对酶的变性作用无选择性.抑制作用(inhibition):酶的必需基团化学性质的改变，但酶未变性，而引起酶活力的降低或丧失一种抑制剂只能使一种酶或一类酶产生抑制作用，因此抑制剂对酶的抑制作用是有选择性的..抑制与失活之间关系的总结失活抑制酶蛋白变性未变性机理酶蛋白结构解体必需基团性质改变变性剂或抑制剂无选择性有选择性.一、抑制程度的表示方法

酶受抑制后活力降低的程度一般用反响速率的变化来表示(vi-参加抑制剂后的速度;v0-不加抑制剂时的速度)(1)相对活力分数(剩余活力分数);a=vi/v0(2)相对活力百分数(剩余活力百分数);a%=vi/v0x100%(3)抑制分数：指被抑制而失去活力的分数;i=1-a(4)抑制百分数;i%=(1-a)x100%通常所谓抑制率是指抑制分数或抑制百分数。.二、抑制作用的类型

根据抑制作用是否可逆:

1．不可逆的抑制作用:抑制剂与酶的必需基团以共价键结合而引起酶活力丧失，不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活的作用.

2．可逆的抑制作用:抑制剂与酶以非共价键结合而引起酶活力降低或丧失，能用物理方法除去抑制剂而使酶复活，抑制作用是可逆的v[E]12.根据可逆抑制剂与底物的关系，可逆抑制作用分为3种类型：(1)竞争性抑制:抑制剂(I)和底物(S)竞争酶的活性部位(一般抑制剂与底物类似)，解除方法:其抑制程度取决于底物及抑制剂的相对浓度，这种抑制作用可以通过增加底物浓度而解除。

.(2)非竞争性抑制:这类抑制作用的特点是底物和抑制剂同时和酶结合，2者没有竞争作用。EI+S—ESI或ES+I—ESI。但三元复合物不能分解为产物，这类抑制剂与酶活性部位以外的基团相结合,其结构与底物无共同之处.(3)反竞争性抑制:酶只有与底物结合后，才能与抑制剂结合，即ES+I-ESI,不能分解为产物。

.三、可逆抑制作用动力学

1．竞争性抑制底物或抑制剂与酶的结合都是可逆的，存在着下面平衡式：

Ki：为抑制剂常数Ki=Ki2/Ki1

.

1．竞争性抑制曲线图

〔1〕V下降，发生抑制〔2〕Vmax不变〔底物浓度增大，抑制剂结合机率减小〕

〔3〕Km增大，亲和力下降.

1．竞争性抑制曲线图

.2．非竞争性抑制

.2．非竞争性抑制曲线

〔1〕V下降，发生抑制〔2〕Vmax减小〔一局部酶始终失活〕〔3〕Km不变，酶与底物亲和力不受影响

.2．非竞争性抑制曲线.3．反竞争性抑制

这类抑制作用的特点是酶先与底物结合，然后才与抑制剂结合，存在以下平衡：

.3．反竞争性抑制的曲线.总结.四、一些重要的抑制剂抑制剂:使酶活性降低的物质。抑制剂作用分可逆抑制剂与不可逆抑制剂可逆的依据：能否用透析、超滤等物理方法除去抑制剂，使酶复活机理：实际上是底物的类似物，专一地作用于某一种酶活性部位的必需基团而导致酶的失活，.第三节温度对酶反响的影响.

温度对酶反响的影响最适温度机理：温度导致酶蛋白变性.温度对酶反响的影响在最适温度之前，一般温度越高，反响速度就越快。Q10〔温度系数〕：反响温度提高10℃，其反响速率与原来反响速率之比，对大多数酶来讲，温度系数Q10多为2，酶的固体状态比在溶液中对温度的耐受力要高。通常酶制剂以固体保存为佳。.第四节

pH对酶反响的影响.pH对酶反响的影响.

pH影响酶活力的原因：

(1)过酸或过碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶构象的改变，酶活性丧失。(2)当pH改变不很剧烈时，酶虽未变性，但活力受到影响。影响了底物的解离状态；影响酶分子活性部位上有关基团的解离；影响到中间络合物ES的解离状态，不利于催化生成产物。.第五节

激活剂对酶反响的影响.1.激活剂(activator)激活剂：但凡能提高酶活性的物质。其中大局部是无机离