微生物的纯种分离技术-微生物的纯种分离技术

模块七微生物的分离纯化技术Isolationandpurificationofmicroorganisms任务二、微生物的纯种分离技术知识目标：掌握常用的纯种分离技术掌握纯培养概念技能目标：能利用不同的方法进行微生物的分离与纯化任务二、微生物的纯种分离技术内容导入分离(isolation)：从混杂微生物群体中获得只含有某一种微生物的过程称为微生物分离与纯化。任务内容微生物纯种分离的原理微生物纯种分离的方法一、微生物纯种分离的原理和方法微生物样品多种混杂某种方法分散成单个微生物平板培养单菌落每个菌落为纯种（纯培养）单菌落转接培养纯种（纯培养）二、微生物分离纯化的方法（一）利用固体培养基分离原理：微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养二、微生物分离纯化的方法（一）利用固体培养基分离在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到

二、微生物分离纯化的方法先将待分离的材料用无菌水作一系列十倍的稀释（如1:10、1:100、1:1000…）分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，适宜温度培养一定时间即可看出菌落1、稀释倾注平板法（pourplatemethod）二、微生物分离纯化的方法如果稀释度适宜，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养特点：操作较麻烦，染菌几率大，对好氧菌、热敏感菌效果不好1、稀释倾注平板法（pourplatemethod）二、微生物分离纯化的方法倾注平板培养基倒入培养皿二、微生物分离纯化的方法将含菌的样品加入还比较烫的琼脂培养基，再倒平板，易造成某些热敏感菌的死亡某些好氧菌会在琼脂中间缺氧影响生长2、稀释涂布平板法（spreadplatemethod）二、微生物分离纯化的方法涂布vs.倾注二、微生物分离纯化的方法特点：快速、方便分区划线：适用于浓度较大的样品连续划线：适用于浓度较小的样品。3、平板划线分离法（streakplatemethod）二、微生物分离纯化的方法1.斜线法3.方格法2.曲线法4.放射法5.四格法平板划线分离的方法二、微生物分离纯化的方法稀释法原理：连续稀释，使一只试管里分配不到一个微生物如果大多数平行稀释管里没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物就是纯培养物（二）利用液体培养基分离纯培养二、微生物分离纯化的方法梯度稀释借助于显微镜利用显微挑取器从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法特点：对操作技术有比较高的要求，多限于高度专业化的科学研究中。（三）单细胞挑取分离法二、微生物分离纯化的方法利用选择培养基直接分离待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制高温下培养：分离特定的菌株分离固氮菌培养基中不含N：分离抗性菌培养基加抗生素：（四）利用选择培养基分离二、微生物分离纯化的方法特定的环境条件仅适应于该条件的微生物旺盛生长富集培养待分离微生物在群落中的数量大大增加从自然界中分离到所需的特定微生物（四）利用选择培养基分离二、微生物分离纯化的方法思考与讨论、任务1、微生物纯种分离的原理思考与讨论：我学到什么？任务1、如何检验平板