生物制品生产工艺-诊断用生物制品的生产

诊断制剂的制备诊断抗体(血清)标记抗体诊断抗原血清学反应抗原

变态反应抗原荧光素标记抗休酶标记抗体放射性同位素标记抗体诊断制剂

利用微生物、微生物提取物或动物血清等材料制成的，用于传染病、寄生虫病血清学和变态反诊断应用的制品，称为诊断用生物制剂(diagnosticum)，也称为诊断液。主要包括诊断抗原、诊断抗体(血清)和标记抗体等三大类。诊断生物制剂用于诊断的原理，是基于抗原和抗体能特异性结合这一基本特性,故诊断中可以用已知抗原检测未知抗体，或用已知抗体检测未知抗原。对于诊断制剂的最基本要求是特异性、敏感性和实用性。诊断抗体(血清)标记抗体诊断抗原血清学反应抗原

变态反应抗原（一）血清学反应抗原1．凝集反应抗原

凝集反应抗原是颗粒性抗原，如细菌和红细胞等。在有电解质存在条件下，能与特异性抗体结合，形成肉眼可见的凝集现象。如布氏杆菌凝集反应抗原(试管、平板和全乳环状凝集反应抗原)、马流产凝集反应抗原、鸡白痢全血凝集反应抗原等。

血清学反应抗原是用已知微生物或其浸出物、代谢产物、感染动物组织制成，用以检测相应的抗体。可与血清中的相应抗体发生特异性结合，形成可见或可以检测的复合物，以确诊动物是否受微生物感染或接触过某种抗原。常用抗原有凝集反应抗原、沉淀反应抗原和补体结合反应抗原。2．沉淀反应抗原沉淀反应抗原为胶体状态的可溶性抗原，如细菌和寄生虫的浸出液、培养滤液、组织浸出液和动物血清等，与相应抗体相遇，在二者比例合适并有电解质存在时，抗原抗体相互交联形成免疫复合物，出现肉眼可见的沉淀。由于使用方法不同，沉淀反应抗原又分为：①环状反应抗原，如炭疽动物脏器抗原；②絮状反应抗原，如测定抗毒素效价的絮状反应抗原；③琼脂扩散反应抗原和免疫电泳抗原等。

补体结合反应，在补体的参与下可明显地提高抗原、抗体特异性反应的敏感性，可用已知抗原检测未知抗体，并可用已知抗体检测未知抗原。

补体结合反应包括反应系统(检测系统)和指示系统(溶血系统)，反应系统为抗原和抗体，指示系统是绵羊红细胞及溶血素。补体可与反应系统的抗原-抗体复合物结合，也可与绵羊红细胞—溶血素的复合物结合而引起溶血，以观察溶血与否来判定反应的结果。

3．补体结合反应抗原诊断抗体(血清)标记抗体诊断抗原诊断血清

诊断血清是利用血清反应以鉴别微生物或诊断传染病的一种含已知特异性抗体的血清。通常以抗原免疫动物制成，有些则需再经吸收除去非特异性抗体成分后供诊断用。含有多型抗体的血清称为多价诊断血清，只对一个型的称为单价诊断血清或称因子血清。单含鞭毛抗体成分的血清称为H血清；单含菌体成分的血清称为O血清。此外，还有针对菌毛和针对荚膜的称为K血清。(1)制备O因子血清可选择无鞭毛的O型菌变种，或经100

C加温2.5h使H抗原灭能的菌株作抗原。用家兔经耳静脉多次注射，每次间隔4天，剂量为0.5、1、2、3ml等递增，当血清凝集价达到标准后即可采血分离血清制成。若制备特异的单因子抗血清，则需要用相关菌株吸收。(2)制备H因子血清选取运动力良好的沙门氏菌培养物，加甲醛灭活制成抗原。静脉注射家兔，可产生高效价的特异性血清。免疫程序与O因子血清制造相同。为获得单因子血清也需要用相关菌株吸收。(3)制备Vi因子血清任何含有Vi抗原的菌株均可做为抗原。培养菌液经甲醛杀菌后加入0.25%二氯化钙，以保护Vi抗原的稳定性，静脉注射家兔，通常注射4次后试血。抗体效价合格后采血分离血清，再用W型为主的沙门氏菌吸收，制成特异的Vi因子血清。2．沙门氏菌因子血清的制备诊断抗体(血清)标记抗体诊断抗原概述

具有示踪效应的化学物质与抗体结合后，仍保持其示踪活性和与相应抗原特异结合能力，此种结合物称为标记抗体。可以示踪和检测抗原的存在及其含量，多用于鉴定抗原和诊断疾病。常用的标记物有荧光素、酶和放射性同位素。抗原与相应的抗体接触后，立即结合而形成不易分离的抗原抗体复合物。由于抗体与某些显色剂偶联，则形成的抗原抗体复合物由不可见成为可见，从而可以确定组织中是否存在某种抗原，这就是免疫标记技术的基本原理。根据抗体标记物的不同分为免疫荧光技术、免疫酶和放射性同位素标记技术。荧光素标记抗体荧光抗体是将荧光物质标记在抗体上，然后与相应的抗原结合，借荧光显微镜观察抗原抗体复合物中特异性荧光的存在，从而判断抗原的存在、位置、分布和含量。免疫荧光技术是将抗原抗体结合的特异性、荧光检测的高敏感性以及显微镜的精确性三者结合的一种检测技术。现已广泛用于细菌、病毒、原虫的鉴定和传染病的快速诊断。红斑狼疮(DIF)IgM带状沉积

酶标记抗体是用一定方法使抗体与酶共价结合，利用抗体与抗原反应的特异性和酶催化反应的高敏感性，通过酶专一性底物的显色反应来显示样品中抗原的存在与否，从而对疾病做出诊断。酶标记抗体与被检抗原形成酶标记的免疫复合物。结合在免疫复合物上的酶，在遇到相应的底物时，催化无色的底物，使其水解、氧化或还原，生成可溶性或不溶性的有色产物。根据有色产物的有无及浓度，可对抗原作定性，定位和定量检测。（二）酶标记抗体

酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)（三）放射性同位素标记抗体

免疫放射分析(immumoradiometricanalysis，IMRA)是一种用放射性同位素标记抗体的分析技术，具有高度敏感性、精确性和特异性。目前多使用同位素碘作标记，125I半衰期较长(60天)、同位素丰度大、辐射损伤小和计数率较高。检测抗原的免疫测定法(IRMA)有两种：(1)待测抗原与可溶的标记抗体作用。放射性复合物留在溶液中，未用完的