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第四节菌种的扩大培养及保藏菌种的扩大培养：将保藏的菌种，即砂土管，冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化，再经过扁瓶或药瓶和种子罐，逐级扩大培养后达到一定的数量和质量的纯种培养过程。这些纯种的培养物称为种子。一、菌种的扩大培养广义：从斜面菌种开始到发酵罐接种之前的所有生产过程。狭义：仅指生产车间种子罐的培养过程。种子的制备实验室种子制备阶段生产车间种子制备阶段（一）实验室种子的制备1.孢子的制备（1）细菌斜面培养基，碳源限量氮源丰富。培养温度：37℃，时间：1-2d，产芽孢：5-10d。（2）霉菌培养基：大米小麦麸皮等天然培养基。培养温度：25-28℃，时间：4-14d。（3）放线菌培养基：琼脂斜面培养基，包含麸皮，蛋白胨，豌豆浸汁及无机盐。培养温度：28℃，时间：5-14d。2.液体种子制备摇瓶液体培养法。（二）生产车间种子制备砂土管（冷冻干燥管）斜面摇瓶固体斜面种子罐发酵罐种子罐的作用：使孢子发芽，生长繁殖成菌丝体，接入发酵罐能够迅速生长，达到一定的菌体数量，以利于产物的合成。确定种子罐注意事项：种子级数应当尽量少。种子罐技术与生产工艺条件有关。菌体扩大培养过程中的工艺条件接种龄从一个级的种子罐中培养的菌体到移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。接种量接种量指的是移入的种子悬浮液体积和接种后培养液体的体积的比例。二、菌种的衰退、复壮和保存菌种衰退：指生产菌种或筛选出来的较优良的菌株，由于进行接种传代或保藏之后，群体的某些形态特征逐渐减退甚至完全丧失的现象。菌种衰退的后果：1.菌种的发酵能力降低2.繁殖能力降低3.发酵产品的得率降低菌种衰退的原因：基因突变（基因负突变）变异菌株性状分离（多次划线分离纯化）连续传代

（减少传代次数）其他因素（温度、湿度、培养基成分）（二）菌种的提纯与复壮菌种的提纯：从已衰退的菌种中，通过分离纯化，将尚未退化的个体分离出来，以恢复和建立具有原来生产性状的群体。菌种的复壮：狭义：在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离等技术，从已衰退的群体中帅选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。广义：在菌种尚未衰退前就有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的正突变个体。菌种复壮的措施：菌种的提纯（稀释涂平板法等、单细胞分离法）2.通过寄主体进行复壮3.淘汰已衰退的个体（三）菌种的保藏方法名称主要措施适宜菌种保藏期评价冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固体）石蜡油封藏法*沙土保藏法冷冻干燥法低温低温低温、缺氧干燥、无营养干燥、无氧、低温、有保护剂各大类细菌、酵母菌各大类**产孢子微生物

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