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子情境：酶制剂发酵产品检验-

蛋白酶活力测定蛋白质：由20多种天然氨基酸通过肽键（―CO―NH―）连接成为多肽，再由多肽聚合成生物大分子的物质。外源蛋白质—胞外蛋白酶内源蛋白质—溶酶体中的蛋白酶蛋白酶：催化蛋白质类化合物中肽键水解，分解蛋白质生成胨、腙、多肽、氨基酸的一类酶的总称。蛋白酶：催化蛋白质类化合物中肽键水解，分解蛋白质生成胨、月示、多肽、氨基酸的一类酶的总称。存在：动物内脏、

植物茎叶、果实

微生物细胞不同种类的生物，分泌蛋白酶的种类和性质不同，因此，利用外源蛋白质类物质的能力也不同。人体内外源蛋白质的消化过程食物中的大分子蛋白质经胃蛋白酶分解成

较小分子的多肽经十二指肠分泌胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶和氨肽酶等分解成短链的肽和部分游离氨基酸。

短链的肽经羧肽酶和氨肽酶分解成游离氨基酸。外源蛋白质经上述消化器官内各种酶的协同作用，最后全部转变为游离氨基酸。蛋白酶分类：按来源分类（1）动物蛋白酶:如胰蛋白酶、胃蛋白酶、凝乳酶（2）植物蛋白酶：木瓜蛋白酶：最适pH5-7，作用pH范围3-9；最适温度65℃，作用温度范围30-70℃，生成产物：氨基酸。菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶（3）微生物蛋白酶：霉菌蛋白酶、细菌蛋白酶蛋白酶分类：按蛋白酶作用位点分（1）内肽酶(endopeptidase)：从蛋白质或多肽内部水解肽键产生各种短肽的酶。（2）外(端)肽酶(exopeptidase)：从蛋白质或多肽一端水解肽键，每次水解放出一个氨基酸。又分为氨肽酶、羧肽酶。

（3）二肽酶：水解二肽中的肽键，生成单个氨基酸的酶。

蛋白酶活力测定方法：紫外分光光度法原理：酶蛋白在一定温度与pH条件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸中止酶反应，并使未水解的酪蛋白沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度计法测定。步骤一、标准曲线的制作管号1mg/mL酪氨酸标准液（mL）蒸馏水（mL）酪氨酸含量（μg、K）吸光度（A540nm）0010119

228

337

446555

664773862用紫外分光光度计测定其275nm吸光度，绘制标准曲线，酪氨酸微克数（K）。并计算K值。123空白酶2ml1、2、3、空白酪蛋白预热（5min）40℃恒温水浴步骤二、蛋白酶活性测定过程1、2、3加入酪蛋白溶液2ml40℃恒温水浴，计时、保温10min加入三氯乙酸4ml摇匀、静置15min离心分离或滤纸过滤，取上清，测吸光度1、2、31、2、3空白管处理空白酶2ml加三氯乙酸4ml再加酪蛋白溶液2ml静置15min，离心分离或滤纸过滤，取上清，测吸光度空白空白结果计算式中x---样品的酶活力，U/g；A---试样溶液的平均吸光度；K---吸光常数，即为标准曲线中直线斜率的倒数；8---反应试剂的总体积，ml；2---吸取酶液2ml；10--反应时间10min；n---稀释倍数；E---紫外法与福林酚法的换算系数（中性、碱性蛋白酶系数为0.50，

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