显齿蛇葡萄的遗传毒性及药用价值评价

显齿蛇葡萄的遗传毒性及药用价值评价

泽蛇金属丝（harmaxy）wt旺也被称为藤茶、甘草茶、白茶等。它是属于青扬科的一种野生树木。主要分布于广东、云南、贵州、湖南、湖北、江西、福建等省区。其味甘、淡,性凉,具有清热解毒、祛风湿、强筋骨、消炎、镇痛等功效。数百年前民间将其幼嫩茎叶制成保健茶,用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疱疖等症。与大米、豌豆、大麦粉及乌龙茶、绿茶等相比较,显齿蛇葡萄除含有丰富的常规营养元素膳食纤维、蛋白质、多种维生素以及常量元素钾、钠、钙、镁、磷外,铁、锰、锌、硒、碘等微量元素含量占明显优势。显齿蛇葡萄还富含多种具有生理活性的化合物如:杨梅素、二氢杨梅素、杨梅甙、槲皮素、二氢槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、棕榈酸、龙涎香醇、β-谷甾醇、大黄素、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、没食子酰-β-D-葡萄糖、花旗松素、洋芹苷等。研究表明其嫩茎叶中总黄酮含量可高达43.4%-44.0%,其最主要的黄酮类化合物二氢杨梅素在嫩茎叶中的含量最高可达37.4%-38.5%。近年来研究,显齿蛇葡萄及其提取物具有多种保健作用,包括抗炎镇痛、止咳、祛痰,保肝护肝、减轻乙醇中毒,抗高血压、消脂、抗肿瘤等作用。1藤茶总黄酮的急性毒性试验钟正贤等在藤茶总黄酮的长期毒性试验中将藤茶总黄酮以1.5g/kg和0.3g/kg(相当于人的临床日用量的50倍和10倍)剂量给大鼠连续灌服12周,停药2周后,分别测量大鼠体重,计算脏器系数,测定血液学和血液生化学指标,并作组织病理学检查;与空白组相比较,藤茶总黄酮大小剂量组大鼠的外观行为,体重,脏器系数,血液学和生化学指标,均元明显差异;病理检查未见与药物毒性相关的明显病变,停药后也未见药物延迟性毒性反应;表明藤茶总黄酮毒性很小,临床拟用剂量是安全的。周月婵等以小鼠实验评价藤茶饮用的安全性,结果表明,藤茶对小鼠的急性经口LD50大于21500mg/kg·bw,三项遗传毒性试验结果为阴性;90d喂养试验中藤茶对受试大鼠各项观察指标未见毒副作用,表明显齿蛇葡萄是一种饮用安全的植物。2用牙齿蛇葡萄来品尝食物2.1复合藤茶配方显齿蛇葡萄以茶叶的形式在食品中的应用有着数百年的历史,把显齿蛇葡萄加工成具有高品质的茶叶在显齿蛇葡萄应用于食品行业过程中显得相当的重要。为得到一条能很好的把显齿蛇葡萄加工成茶叶的工艺,易诚根据传统的民间藤茶加工工艺设计出三条加工工艺,对藤茶成品和成品的茶水以感官评定,选取了一条最佳的工艺:原料→分级→清洗→摊放→杀青→揉捻→焖青→晒干→冷却回润→密封保存,并通过实验设定了关键工艺参数:将藤茶进行分级后在150℃-160℃的温度下杀青,经手工揉捻20min-25min,40℃-50℃下焖青6h~12h,太阳光下晒或烘至产品表面呈白霜状物质出现。显齿蛇葡萄可广泛添加于其他物料中制作复合藤茶,在添加(配伍)时一般没有禁忌,可与其它植物普通茶叶(包括各类绿茶、红茶、花茶、黑茶、乌龙茶、黄茶产品)、一些既是食品又是药品的物料(如山楂、甘草、罗汉果、胖大海、桑椹、桔梗、荷叶、酸枣仁、薄荷等)以及添加药品(如人参、人参叶、人参果、芦荟、车前草等)配伍生产各种复合藤茶。其工艺为:在生产藤茶的基础上,选定配方后,可将各物料单独粉碎、过筛,按比例混配,然后打包出产品。2.2在藤茶饮料加工保鲜中的应用生产显齿蛇葡萄饮料的主要流程如下:藤茶原料处理→浸提→过滤→调配→排汽→杀菌装瓶→冷却→成品显齿蛇葡萄提取液中可加入多种舔加剂如蔗糖、甜味剂、食盐、柠檬酸、薄荷、甘草、花椒等,根据不同的需要,可选择不同数量、种类以及不同配比的舔加剂调配成各种以藤茶风味为主的不同风味的藤茶饮料。姚茂君等在无糖型茅岩莓(即显齿蛇葡萄)速溶茶(固体饮料)的加工技术中探讨了茅岩莓茶浸提温度、浸提时间、浸提加水量对产品感官的影响,利用具有低能量、抗龋齿、改善肠道功能的甜味剂低聚果糖和甜味剂阿斯巴甜代替蔗糖,经过护色、调香等处理得到的速溶茶清凉滋味,口味宜人,另外还比较了几种常见的干燥方法对产品质量的影响,选择了真空冷冻干燥法作为速溶茶的干燥方法;由于整个干燥过程是在真空、低温条件下完成,避免了氧化及高温对生物活性物质的破坏,最大限度地保存了制品中的活性成分和风味物质,干燥后的产品呈疏松海绵状多孔结构,是产品更易溶于水,具有极佳的速溶性。张雁等以藤茶浓缩汁、麦芽糖醇、山梨糖醇和低聚异麦芽糖为主要原料,开发了低热量、具有保健功能的藤茶含片,以食品凝胶剂明胶、琼脂为载体,开发了低热量、具有保健功能的显齿蛇葡萄果冻。3提取的代价和二羟杨梅素的性质3.1显齿蛇葡萄的二氢杨梅素显齿蛇葡萄提取物主要是其粗提物或高纯度的黄酮类化合物二氢杨梅素等,其粗提取物的主要成分也主要是黄酮类物质。显齿蛇葡萄中总黄酮或二氢杨梅素含量高且提取工艺简单,常用的有溶剂法、树脂吸附法和高速逆流色谱法:覃洁萍等先以热水提取,经降温结晶、干燥后加丙酮回流提取,浓缩后加水结晶,经重结晶后得到白色细针晶或粉末状结晶,结构鉴定为二氢杨梅素,丙酮不溶残渣加乙醇回流、过滤、浓缩、结晶、结晶呈棕黄色簇状或小颗粒状结晶,结构鉴定为杨梅素。林淑英等把用热水提取得到的显齿蛇葡萄粗品,用索氏抽提器提取粗品,浓缩下层溶液,按质量比1:100加蒸馏水稀释,过滤放置,析出白色结晶体,依此法数次结晶得到白色细针状结晶—二氢杨梅素,经高效液相色谱测定,纯度可达95.5%。赖力等用甲醇回流提取显齿蛇葡萄,浓缩至有固体析出,加适量水,用氯仿萃取,上层液用水浴浓缩至干,所得固体用乙醇—水加活性炭反复结晶得白色固体—二氢杨梅素。张友胜等通过“增温溶解、保温过柱、温水解吸”的方法对显齿蛇葡萄中的二氢杨梅素进行了提纯研究。显齿蛇葡萄提水浸提液增温到60℃,并保持这个温度过D-16大孔吸附树脂,可把二氢杨梅素纯度提纯到90%以上,再利用二氢杨梅素易溶于热水难溶于冷水的特性重结晶,配以活性炭吸附脱色可将二氢杨梅素的纯度提高到96.3%。张友胜等还用高速逆流色谱(High-speedCountorcurrentChromatographyHSCCC),采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水四元分离系统,先将四种溶剂混合、分层,再用下相(移动相)将二氢杨梅素混合样品充分溶解,将溶剂系统的固定相(上相)用泵灌满色谱分离柱,当系统达到要求时开始以一定的流速泵入流动相(下相),并通过进样阀进样,完成二氢杨梅素分离过程,整个过程可将二氢杨梅素提纯到99%以上。3.2二羟基杨梅的性质3.2.1rityminy蛇葡萄素二氢杨梅素(3,5,7,3,,4,,5,-六羟基-2,3双氢黄酮醇,dihydromyricetinDMY)又名双氢杨梅树皮素、双氢杨梅素、蛇葡萄素,该化合物曾由Kotake和Kubota于1940年从蛇葡萄属植物福建茶,即楝叶玉葡萄Ampelopsis的叶中分离得到并命名为蛇葡萄素。周天达等于1996年首次从显齿蛇葡萄的茎叶中分离得到该化合物。3.2.2紫外分光光谱分析二氢杨梅素常温下为白色细针尖状晶体,熔点245℃左右,溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、热水等,不溶于石油醚等。二氢杨梅素在230℃下表现出良好的稳定性,在231.8℃时开始吸热熔化,熔点为245.34℃,在231.8℃时二氢杨梅素的紫外谱图开始发生变化,为二氢杨梅素热不稳定下限,220℃以下为二氢杨梅素的安全使用范围。二氢杨梅素水溶液100℃下加热30min其紫外可见光谱图未见改变,加热35min后,随加热时间的延长,溶液的紫外可见扫描光谱图发生了很大变化,其在紫外光区的最大吸收峰294nm和324nm左右的峰肩没有发生变化,但峰高比例下降,同时在350nm~400nm之间又出现吸收峰且且随加热时间的延长其峰高有较为明显的增强趋势,溶液也出现了肉眼可见的颜色加深现象。在pH值6.5以下二氢杨梅素比较稳定,在在碱性条件下,二氢杨梅素的构型会发生明显变化,其在294nm处的吸收峰消失,在324nm左右的吸收峰明显增大,同时在可见光区498nm左右出现明显吸收峰,低质量浓度二氢杨梅素溶液的颜色由微黄色变为浅棕色,即随着强碱的加入,其二氢杨梅素上的酚羟基逐渐解离,二氢杨梅素发生了彻底的构型转换,在B环的氧原子处发生解环,生成了A环上的一个羟基,类似于查尔酮结构。pH值对二氢杨梅素的溶解性影响比较小,二氢杨梅素分子中含有6个酚羟基,具有弱酸性,等电点接近pH值5左右,在pH值4~5左右溶解度较小,中性范围内溶解度较高,但是对于结晶纯化产品品质影响较大。金属离子Ca2+、Mg2+、Na1+、NH4+、Ba2+对二氢杨梅素稳定性均无明显的作用,而Al3+、Fe3+、Cu2+则与二氢杨梅素发生鳌合反应引起二氢杨梅素发生变化,在二氢杨梅素提取和应用过程中应该避免此类离子。3.2.3正辛醇在水和正辛醇中的溶解度的变化袁永越等以磷脂对二氢杨梅素进行改性,改性后二氢杨梅素的理化性质发生了一系列的变化,与二氢杨梅素比较,在热分析及X-射线衍射分析图谱中发生明显的变化,晶体特征消失,处理后在水和正辛醇中,溶解度分别提高了12倍和73倍。目前,国内对显齿蛇葡萄提取物的研究主要是其粗提物或纯二氢杨梅素的研究,由于显齿蛇葡萄中二氢杨梅素的含量特别高,即使在显齿蛇葡萄极其粗提物中对人体的各种活性功能二氢杨梅素还是占主导地位,因此在许多时候对显齿蛇葡萄及其粗提物的功能性质的研究实际上也就是对二氢杨梅素的功能性质的研究。4葡萄提取物的理化活性显齿蛇葡萄提取物用于食品上的研究,主要是作为食品添加剂,发挥天然防腐剂或抗氧化剂的作用。显齿蛇葡萄提取物应用到食品中具有安全、健康的特点,其提取物最主要的成分二氢杨梅素具有多种药理活性:消炎、止咳、镇痛、抗高血压、消脂、保肝护肝、减轻乙醇中毒、抗肿瘤等。二氢杨梅素随食品进入体内后,由于体内的弱酸环境使二氢杨梅素性质相对稳定不易发生自身的氧化作用,可在体内充分发挥其药理作用。4.1回2%二氢杨素为大鼠肠道内的主要条件菌—防腐作用研究显齿蛇葡萄茎叶提取物对食品中常见的枯草杆菌、金黄葡萄球菌很强的抑制作用,其最低抑制浓度低于0.07%;对青霉、黄曲霉、黑曲霉也有较弱的抑制作用。0.2%的二氢杨梅素对肠道内的主要条件菌———大肠杆菌的抑菌效果优于0.075%的土霉素(P<O.05);对有害菌———沙门氏菌的抑菌效果与0.075%的土霉素相近。另外,二氢杨梅素对酵母菌的抑制效果不明显,对牛奶中常见的牛奶酸败菌和青霉菌有明显的抑制作用,其抑制效果在同等浓度下优于常见的防腐剂苯甲酸,可作为天然防腐剂应用于乳制品以及易染霉菌、细菌的食品的保藏。4.2氢杨树对脂肪酸过氧化的影响在猪油体系中二氢杨梅素的抗氧化性作用优于同浓度下的TBHQ,且TBHQ在食品中的应用有严格的量的规定,而二氢杨梅素相对来说是安全、健康的。0.2%的显齿蛇葡萄提取物对油脂的抗氧化效果超过同浓度的BHT及生姜提取物,0.7%的显齿蛇葡萄提取物对菜油、猪油的氧化抑制率比0.2%的BHT分别高出分别高出49.8%和9.4%,比0.2%的生姜提取物分别高出46.5%、62.2%。Fe2+离子能引起不饱和脂肪酸过氧化,如:FeSO4-依他酸引发的亚油酸过氧化体系中的抗氧化机制为络合物Fe2+引起发的亚油酸过氧化,二氢杨梅素能络合食品体系中的Fe2+,阻止Fe2+引起的亚油酸等过氧化。在食品生产中二氢杨梅素的添加量以质量浓度0.06%为宜。在酸性介质下二氢杨梅素抗氧化作用可起到增强,pH为4-5时抗氧化活性最大。不同溶剂对抗氧化活性有影响,相对于水溶剂而言,乙醇对二氢杨梅素有增效作用。在二氢杨梅素的抗氧化体系中,添加某些物质如:维生素C、EDTA、柠檬酸等,它们能为体系提供一个弱酸环境,把体系的pH值降到二氢杨梅素稳定的6.5以下,以及能络合Al3+、Fe3+、Cu2+,使二氢杨梅素不与其发生发生鳌合反应引起二氢杨梅素变化,从而为二氢杨梅素的抗氧化作用起到很好的增效作用,这些物质称之为增效剂,在这些增效剂当中又以维生素C增效效果最佳:因为维生素C除了能与金属离子生成螯合物,并提供适宜的酸性环境,对二氢杨梅素结构起到稳定作用外,维生素C自身也有抗氧化作用,实验表明在二氢杨梅素体系中加如入约二氢杨梅素质量一半的维生素C时,二氢杨梅素的抗氧化作用有很大的提高。4.3铁强化食品,强质利用二氢杨梅素能螯合某些金属离子的特性,可把二氢杨梅素制备成为二氢杨梅素—铁的螯合物,作为铁强化食品,起到补充和强化人体铁元素的目的。郭清泉等在螯合物油脂的抗氧化作用实验中