中药美白霜的制备及理化性质研究

中药美白霜的制备及理化性质研究

许多美丽的人都追求白人皮肤。特别是对于生活在黄土中的亚洲女性来说，白人皮肤是一个重要的整形主题。有统计显示在中国美白类化妆品销售额5年间增长了10倍,其巨大的市场潜力不容忽视。人类皮肤的颜色由多种因素决定,但主要取决于黑色素的含量及分布。目前,公认的黑色素形成过程为:黑色素细胞组织中的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下,经多巴、多巴醌、多巴色素、二羟基吲哚等中间体逐步转变成黑色素。目前大多数美白化妆品都是以酪氨酸酶为作用靶点,通过美白活性成分抑制酪氨酸酶的活性来减少黑色素的生成,达到美白的效果。早期用于美白化妆品中的美白活性成分有汞类化合物、类激素和氢醌等,这些化合物一般作用迅速,美白效果明显,但其毒性大,易在体内沉积,造成人体内脏衰竭,或对皮肤刺激性大,易导致细胞病变,已被世界各国明令禁止使用。目前化妆品中添加的皮肤美白剂应符合两个标准:一是对酪氨酸酶活性有较高的抑制率,能显著地减少黑色素的生成;二是有较高的安全性,对人体皮肤无毒无刺激性。以中药活性成分作为美白产品添加剂,因其毒副作用小,安全性高,经济有效,倍受人们青睐,已成为美白化妆品行业的一个发展趋势。本文选择美白产品中常用的7种中药,分别进行醇提和水提,将得到的提取物进行酪氨酸酶活性抑制率的比较,筛选3~4种抑制率较高的提取物,并将其以一定比例复配,制得一种中药美白霜。1仪器和检测方法仪器:UV1102紫外可见分光光度计(上海天美科技仪器技术有限公司);FSH-2型可调高速匀浆机(金坛市富华仪器有限公司);TDL80台式离心机(上海安亭科学仪器厂);RE5052旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。试剂:L-酪氨酸(Aladdin试剂有限公司);硬脂酸(成都科龙化工试剂厂);无水羊毛脂(天使百世化工有限公司);单硬脂酸甘油酯(上海润捷化学试剂有限公司);三乙醇胺(天津富宇精细化工有限公司);二甲基硅油(天津永大化学试剂开发中心);吐温-80(广东光华化学试剂厂);白芷、白鲜皮、白蔹、白蒺藜、白芍、白茯苓、白芨(购自广州至信药材有限公司);其它试剂均为分析纯。2方法和结果2.1成分的提取选取白芷、白鲜皮、白蔹、白蒺藜、白芍、白茯苓、白芨药材按水回流和50%乙醇回流两种方法提取其美白有效成分。(1)水回流提取:取中药材5g,加12倍量蒸馏水,室温浸泡0.5h,再加热回流提取2h,过滤,取滤液,10000r/min离心10min,取上清液减压浓缩,真空干燥,得水提物。(2)乙醇回流提取:取中药材5g,加12倍量50%乙醇,室温浸泡0.5h,再加热回流提取2h,过滤,取滤液,10000r/min离心10min,取上清液减压浓缩,真空干燥,得醇提物。2.2中药美白成分的选择2.2.1pbs/hs法酪氨酸酶溶液的配制:称取去皮切碎马铃薯20g,按1:1(m/v)的比例加入磷酸盐缓冲液(pH6.8)20mL,高速匀浆1min,于3000r/min离心15min,倾出上清液。用移液管移取10mL上清液于25mL棕色瓶中加入PBS(pH6.8)溶液定容,冰水浴备用,2h内用完。样品溶液的配制:用PBS(pH6.8)将上述7种中药的水提取和醇提物分别配制成10mg/mL的溶液,过滤,备用。2.2.2lpbs溶液测定前,精密移取A1测试样:2mLPBS+1mLL-酪氨酸溶液;A2测试样:3mLPBS溶液;A3测试样:1mLL-酪氨酸溶液+1mLPBS溶液;A4测试样:2mLPBS溶液,每组平行操作3份。先置37℃水浴中保温10min后立即分别添加土豆酪氨酸酶溶液1mL,分别向A3、A4中加入样品溶液1mL混匀,然后在37℃水浴恒温反应2min立即于475nm处测吸光度,记录数据。酪氨酸酶活性抑制率I(%)=[(A1-A2)-(A3-A4)]/(A1-A2)×100%。A1为未加中药的加酶混合液;A2未加中药和酶的混合液;A3为加中药和酶的混合液;A4加中药而未加酶的混合液。结果可见白芷水提取物、白蔹、白鲜皮的醇提物对酪氨酸酶活性的抑制较强,故选取白芷水提物和白蔹、白鲜皮醇提物来制备中药美白霜。2.3中药美白霜的制备2.3.1酯化学成分将含碳质低效林白芷5g,白蔹5g,白鲜皮5g,单硬脂酸甘油酯1.0~1.5g,二甲基硅油3.0g,无水羊毛脂2.0g,液体石蜡5.0g,硬脂酸4.0~6.0g,十六醇4.0~6.0g,甘油3.0g,丙二醇3.0g,吐温-601.5~3.0g,三乙醇胺0.1~0.5g,尼泊金乙酯0.15g,氮酮1.0g,茉莉香精3滴,去离子水加至100g。2.3.2油相对比的确定白芷水回流提取,白蔹、白鲜皮乙醇回流提取,合并提取液,减压浓缩至1g浸膏。按处方量取单硬脂酸甘油酯、二甲基硅油、无水羊毛脂、液体石蜡、硬脂酸、十六醇、尼泊金乙酯,加热至80℃保温过滤得油相;另取甘油、丙二醇、吐温-60、三乙醇胺、水,加热至80℃保温过滤得水相;在一定转速下将油相缓慢加到水相,高速匀质5min(均质2min时加入中药浸膏),搅拌冷却,待温度降至45℃加入氮酮、香精,搅拌均匀即得中药美白霜。2.3.3乳化剂的hlb值和乳化温度以制得美白霜的外观性状(光泽度、细腻度及粘度)、耐热耐寒性、离心试验为质量评价指标,对基质处方中硬脂酸的量、十六醇的量,乳化剂HLB值和乳化温度作为考察因素对美白霜制备工艺进行优化。影响因素最大的为十六醇的量,四个因素最佳配比水平为A3B1C3D2,即硬脂酸的量为6.0g,十六醇的量为4.0g,乳化剂HLB值为12,乳化温度为75℃。2.4美白霜ph值的测定(1)外观性状本美白霜质地轻盈,呈米黄色膏状,粘稠性较好,涂抹在皮肤上滋润而不油腻,清爽度较好。(2)pH值取本品5g,加水50ml稀释,pH计测定其pH值,测得美白霜的pH值为5.4,符合化妆品的pH范围4.5~6.5的要求。(3)显微观察乳化效果取化妆霜0.01g于载玻片上,用盖玻片轻压膏体,让化妆霜均匀分布于载波片上,用显微镜直接观察,粒径越小,分布越均匀,则乳化效果越好。结果见图1。可见制得的美白霜粒径较小,分布非常均匀规则。3不同底物对酪氨酸酶活性的影响皮肤的美白机制即是黑色素的抑制机制。当前大多数美白化妆品是以酪氨酸酶为作用靶点,通过抑制酪氨酸酶的活性以减少黑色素的生成,从而达到美白皮肤的效果。有人曾分别以L-酪氨酸与L-多巴为底物进行比较,发现L-酪氨酸为底物时,化合物对酪氨酸酶活性呈现较强的抑制作用。故本实验选择以L-酪氨酸为底物,测定中药提取物对酪氨酸酶的抑制作用,该方法简单易行,准确可靠。美白