高效液相色谱法同时检测果糖中9种禁限用色素

高效液相色谱法同时检测果糖中9种禁限用色素

近年来，食品安全事件频发，尤其是食品添加剂和违法添加。合成染料具有价格低廉、耐贮藏性强、生产工艺严格等特点。根据研究，合成染料主要是偶氮亚麻酸，在人体中分解形成芳香胺，对人体危害巨大。为了使用方便的冰蛋糕、水果蛋糕、奶甘草、糖、茶、糖果等食品，且这种色素可以引起儿童过度使用。因此，仅在预调酒中添加量以外的原料，最大用量为0.1g/l。对于孟加拉国红、强良绿色、酸性红52、钠、黎明红、酸性绿s、浅色黑色、荧光桃红等18种色素，只有国家标准中禁止添加9种。因此，这些合成染料的检测方法对确保食品安全具有重要的现实意义。糖果色彩缤纷,许多品种添加了人工合成色素.目前,国内外用于糖果中多种合成色素的方法主要有高效液相色谱法、分光光度法、高效液相串联质谱法等[2~8].本研究采用高效液相色谱法同时测定糖果中喹啉黄、孟加拉红、坚牢绿、酸性红52、荧光素钠、曙红、酸性绿S、亮黑、荧光桃红等9种合成色素的含量,为食品安全质量间接提供可靠的技术支持,有助于我国食品安全的科学监测监控,严厉打击不法厂商的违法行为.1实验部分1.1ler-toldo高效液相色谱仪(Agilent1290),配置二极管阵列检测器和自动进样器;万分之一电子天平(瑞士Mettler-Toledo);Milli-Q超纯水器(美国密理博公司);3K18离心机(美国Sigma公司);涡旋混合器(德国Heidolph公司),SW22水浴摇床(德国Julabo公司).甲醇、乙酸铵为色谱纯;水为超纯水;喹啉黄、孟加拉红、坚牢绿、酸性红52、荧光素钠、曙红、酸性绿S、亮黑、荧光桃红对照品购自于上海安谱科学仪器公司.1.2柱温度和流速检测色谱柱:Poroshell120EC-C18(150mm×2.1mm,2.7μm);流动相:甲醇(A)和0.04mol/L乙酸铵(B);梯度洗脱程序:0~2min,30%A;4min,40%A;8min,47%A;13min,90%A;15min,95%A.柱温:25℃;检测波长:420nm,500nm,550nm,630nm;流速:0.4mL/min;进样量:5μL.1.3标准工作溶液的配制分别准确称取喹啉黄、孟加拉红、坚牢绿、酸性红52、荧光素钠、曙红、酸性绿s、亮黑、荧光桃红对照品适量于25mL容量瓶中,用水配成1000mg/L的标准储备液.将标准储备液配制成混合标准溶液后再将其稀释成系列混合标准工作溶液,4℃避光保存.1.4高效液相色谱法测定高效液相色谱准确称取2.5g均匀粉碎的糖果样品(精确至0.001g),于50mL塑料离心管中,加入15mL水涡旋振荡1min后放入水浴摇床,80℃振摇至溶解,混匀后定容至25mL,9500r/min离心5min,取上层清液过0.22μm水相滤膜,滤液上高效液相色谱仪测定.2结果与讨论2.1测定喹啉黄、坚牢绿和酸性红的波长使用DAD检测器分别对喹啉黄、孟加拉红、坚牢绿、酸性红52、荧光素钠、曙红、酸性绿S、亮黑、荧光桃红标准溶液进行光谱扫描.食品添加剂喹啉黄主要为喹啉黄磺酸钠盐,出现4个色谱峰,与文献报道一致.喹啉黄的四个组分在410~420nm有最大吸收;坚牢绿有两个色谱峰,最大吸收波长在630nm;酸性红52有两个色谱峰,最大吸收波长在550nm;酸性绿S最大吸收在630nm;荧光桃红、孟加拉红、亮黑最大吸收波长为550nm;荧光素钠、曙红最大吸收波长为500nm.实验过程中发现使用喹啉黄、坚牢绿和酸性红使用全部色谱峰面积之和定量与使用其最大吸收波长的色谱峰定量结果一致,因此最终选择在420nm下测定喹啉黄;500nm下测定荧光素钠和曙红;550nm下测定亮黑、孟加拉红、荧光桃红和酸性红52;630nm下测定酸性绿S和坚牢绿.2.2标准色谱柱的确定实验考察甲醇-水、甲醇-乙酸铵、乙腈-水和乙腈-乙酸铵等流动相体系对9种禁限用色素的分离洗脱效果(如图1所示),发现甲醇-水、乙腈-水系统出发有拖尾现象,且峰形较差,而乙腈洗脱能力强于甲醇,导致部分峰重叠无法分开,洗脱效果甲醇-乙酸铵较好.为得到良好的分离度、峰形,以甲醇-乙酸铵流动相按1.2中梯度洗脱,乙酸铵浓度调至0.04mol/L.图1为不同波长下9种禁限用色素的标准色谱图.2.3色谱类型的选择喹啉黄、孟加拉红、坚牢绿、酸性红52、荧光素钠、曙红、酸性绿S、亮黑、荧光桃红均为水溶性物质,极性较强,色谱类型应选为反相,考虑到甲醇-乙酸铵作为流动相的通用性,在—C8、—C18、—CN、—NH2中选择—C18键合基团的色谱柱最合适.分离过程中9种色素出现了14个色谱峰,色谱峰较多,为使分离效果好,选用理论塔板数较高的小粒径柱子,本实验采用150mm×2.1mm,2.7μm的C18柱子,分离效果良好.2.4标准曲线方程在优化条件下测定9种混合系列标准溶液,以峰面积Y为纵坐标,浓度X为横坐标,计算标准曲线方程、线性范围和定量限,结果见表1.实验结果表明,9种化合物线性范围均为0.2~50mg/L.在称样量为2.5g,进样量为5μL时,9种化合物最低测定浓度均为5.0mg/kg.2.5加标回收率测定在6份糖果样品中分别加入不同量的9种禁限用色素,使各个色素加标含量分别为5.0mg/kg、10mg/kg、50mg/kg三个浓度水平,按本法处理后测定并计算回收率,结果见表2.2.6实