衡阳显齿蛇葡萄的发生与发展

衡阳显齿蛇葡萄的发生与发展

泽沟是青虾科的一种野生藤本植物。这是典型的茶类。由显齿蛇葡萄的嫩叶经过杀青、揉捻、烘干而成的类茶饮料称为藤茶,亦称“茅岩莓茶”、“甘露茶”等。显齿蛇葡萄全株药用,味甘、淡,性凉,具有清热解毒、祛风湿、强筋骨等功效。用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疱疖等症。显齿蛇葡萄主要分布于广西、广东、云南、贵州、湖南、湖北、江西、福建等省区。集中或散生在海拔为400～1300m山坡的混交林中。野生贮量大,据不全完统计,湖南省年产野生显齿蛇葡萄共450～500t,其中衡阳地区包括衡南、衡东、衡山、常宁等地年产约150t,郴州约20t,湘西约100t,怀化约60t,此外还有零星分布。人们对其分布和生长规律比较了解,为可以直接利用的野生植物资源。藤茶在衡阳市衡东、衡南等地已有一千多年饮用历史,经过近几年的发展,已成为衡阳市特色产业,对发展衡阳市农村经济具有十分重要的意义。随着藤茶内生理活性物质的不断提取及其药理作用的不断深入研究,越来越显现出藤茶具有广阔的开发利用空间,如何利用衡阳市的区域及资源优势,引入现代科研成果,积极转化为生产,实施规模化、产业化、工业化生产,加大对藤茶开发研究的力度和深度,对发展湖南省农村经济有着十分深远的意义。1藤茶中总黄酮类化合物相关营养成分的组成结构及组成测定为了很好地开发显齿蛇葡萄,很多学者对显齿蛇葡萄的化学成分进行祥尽的研究,据张友胜等报道,从显齿蛇葡萄中分离了5种化合物单体,从现阶段的研究成果来看,已从其中分离出了数十种化合物,且各种营养成分基本清楚。在对其所含黄酮类成分的研究中,周天达等从显齿蛇葡萄的幼嫩茎叶混合物中首次分离得到一种双氢黄酮醇的成分,鉴定为3,3′,4′,5,5′,7-六羟基-2,3-双氢黄酮醇,即双氢杨梅素。之后,覃洁萍等对此进行了鉴定。何桂霞测定其总黄酮含量为43.4%～44.0%,RSD1.56%;双氢杨梅素含量为37.4%～38.5%,RSD1.85%～2.65%;杨梅素含量为1.72%～1.78%,RSD2.86%～3.21%;何桂霞对瑶族藤茶Ampelopsiscantoiensis药用成分进行研究,表明其为3,5,7,3′,4′,5′-六羟基黄酮,即杨梅树皮素。何桂霞还采用薄层扫描法测定了藤茶中二氢杨梅素和杨梅素的含量,建立了藤茶的药用品质质控方法,并还以二氢杨梅素为指标,采用分光光度法对藤茶中总黄酮类成分的含量进行了测定,为该药材及其制剂的质量控制提供了标准。袁阿兴等从显齿蛇葡萄的地上部分又分得4个化合物:龙延香醇(ambrein)、β-谷甾醇(β-sitosterol),杨梅素(myricetin)和杨梅苷(myricetrin)。王定勇等还从显齿葡萄的乙酸乙酯提取物中分离得到9种化合物,经波谱分析、化学分析及与已知的化合物对照,分别鉴定为:棕榈酸、β-谷甾醇、大黄素、没食子酸甲酯、槲皮素、槲皮素3−0−aˆ−3-0-a^-葡萄糖花旗松素、洋芹菜素和蛇葡萄素,9个化合物均为首次从该植物中分离得到。王定勇从显齿蛇葡萄的正丁醇提取物中分离得到一种新化合物4′-羟基-3′-甲氧基异黄烷-7-O-á-L-吡喃鼠李糖甙,从显齿蛇葡萄的乙醇提取物中分离得到4′-羟基-3′-甲氧基异黄烷-7-O-á-L-鼠李糖(1→6)-β-D葡萄糖甙。张友胜等对显齿蛇葡萄基本成分进行了研究,结果表明:显齿蛇葡萄粗蛋白含量为13.94%;溶性蛋白质含量为0.55%;氨基酸总量为2.53%,其中,包括人体必需的8种氨基酸总量为0.4539%,非必需的9种氨基酸总量为1.8009%;总多酚18.5%;通过水浸提取总黄酮38.965%,其中二氢杨梅素单体含量达30.598%。张友胜等并从显齿蛇葡萄中分离出五羟基黄酮-3-芸香糖苷(即芦丁)没食子酰−aˆ−D-a^-D葡萄糖,没食子酸乙酯,没食子酸。此外,他还针对春、夏季节不同的显齿蛇葡萄挥发油化学成分进行了分析,初步鉴定出春季样挥发油26种成分,夏季样17种成分。应用色谱峰面积归一法测定各成分相对百分率,春季样和夏季样挥发油化学成分相差较大,但主要成分均为叶绿醇、正十六酸、雪松醇等。2双氢杨梅素a.非随着黄酮类化合物的生理活性作用研究的深入,对藤茶中含有的黄酮类化合物的生理效应也作了深入研究,显齿蛇葡萄总多酚18.5%、通过水浸提取总黄酮38.965%、其中二氢杨梅素单体含量达30.598%,二氢杨梅素在藤茶中具有如此高的含量,因此其药理效应就成影响藤茶药理效应的主要因素。二氢杨梅素(3,5,7,3′,4′,5′,六羟基2,3双氢黄酮醇(ampelopsin/dihydromyricetin)又名双氢杨梅树皮素、福建茶素、白蔹素、蛇葡萄素等,是黄酮类化合物的重要一员。该化合物首次由Kotake和Kubota于1940年从葡萄科蛇葡萄属植物福建茶即楝叶玉葡萄A.Meliaefolia的叶中分离得到,命名为蛇葡萄素。二氢杨梅素大量存在于葡萄科蛇葡萄属植物中,如显齿蛇葡萄、粤蛇葡萄、羽叶蛇葡萄、蛇葡萄、东北蛇葡萄、光叶蛇葡萄等,尤其是在蛇葡萄属植物中更是大量存在,显齿蛇葡萄植物的幼嫩茎叶中含量达27%～28%,最高部位可达40%以上;粤蛇葡萄中幼嫩茎叶中含量可达25%以上。二氢杨梅素作为黄酮类成分中的重要一员,在天然植物中单体含量如此之高,实属罕见。前人对藤茶中的二氢杨梅素及总黄酮进行了临床应用及药理试验,藤茶有如下一些药理功能。2.1藤茶汤提物的抗炎作用林建峰证实显齿蛇葡萄其对小鼠巴豆油性耳廓水肿、大鼠角叉菜胶性、甲醛性足跖肿胀及腹腔毛细血管通透性、急性、亚急性炎症的渗出过程均有抑制作用;对小鼠醛酸性扭体反应和热水反应显示有一定的镇痛作用,能提高小鼠的痛阈水平。钟正贤等在给小鼠做了一系列的实验,结果表明:二氢杨梅素大小剂量组(1.0g·kg-1,0.5g·kg-1)和阳性对照药氯化胺(1.0g·kg-1)的酚红排泌量,与对照组比较均有明显升高,证实二氢杨梅素有明显祛痰作用;同时,二氢杨梅素能明显延长咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数,其中大剂量组(1.0g·kg-1)的止咳作用强度与对照组咳必清相当。索朗等采用足肿胀、耳廓肿胀、腹腔毛细血管通透性、碳粒廓清、小鼠扭体等实验方法,对藤茶水提物的抗炎镇痛作用进行了研究,结果表明:藤茶水提物在所用试剂量范围内[2、4、8g/(kg.d)-1]具有较明显的抗炎作用,但各剂量组对醋酸致小鼠扭体次数,对小鼠网状内皮系统的吞噬功能均无明显影响。通过以上药理实验证实:藤茶具有较明显的抗炎作用,它能显著抑制角叉菜胶致小鼠足肿胀,显著抑制巴豆油所致小鼠耳廓胀,抑制醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性的增高。除对藤茶进行研究外,很多学者针对复方藤茶进行了祛痰试验,表明该药具有较好的祛痰作用。镇痛作用试验提示复方藤茶40g/kg组或20g/kg组对醋酸所致的腹险刺激疼痛具有较好的疗效,效果稍逊于罗通定。对热板致痛的痛阈提高率比较,只有复方藤茶40g/kg组与生理盐求组比有显著差异,复方藤茶20g/kg组虽然可提高痛阈,但复方藤茶是生药,含镇痛物质较少,罗通定则是镇痛的纯生物碱。藤茶民间多用于清热解毒,镇咳化痰、祛凤湿、壮筋骨,现代药理试验证明藤茶能较好地镇痛。藤茶水煎剂有明显发汗作用,防感藤茶乙醇提取液能显著降低致热后家兔体温,促进汗液和唾液的分泌,增强巨噬细胞的吞噬功能和溶血素抗体的形成。水煎剂口服最大耐受量为18g/kg,腹腔注射LD50为(9.65±1.38)g/kg。从广西瑶藤茶中提取的双氢杨梅树皮素以1.0、0.5g/kg剂量给小鼠灌服,能显著增强呼吸道酚红排出量和减少氢氧化胺实验性咳嗽次数,提示其有祛痰止咳作用,作用强度与阳性对照药安妥明相似。2.2采用二氢虾素合成甲酯为了寻找理想的天然杀菌药物,很多学者进行了显齿蛇葡萄杀菌作用研究。MatsumotoT、TaharaS在进行植物次生代谢物抑制真菌筛选实验中发现,从Salixsochalinensis中提取的二氢杨梅素对Cladosporiumherbarum真菌具极强的抑制作用,但若将二氢杨梅素合成为甲酯,则其甲酯的抑菌能力为其抑菌能力的4倍。熊大胜等用显齿蛇葡萄幼嫩茎叶提取物进行抑菌实验结果表明,其对金黄葡萄球菌、枯草杆菌均有很强的抑制作用,对黑曲霉、黄曲霉、青霉及交链霉均有不同程度的抑制效果。对黑曲霉、黄曲霉最低抑菌浓度分别为0.7%、1.1%,对金黄葡萄球菌、枯草杆菌最低抑菌浓度均小于0.07%。林芹等进行了复方藤茶的抗菌试验,用对倍稀释法观察了复方藤茶煎剂的抑菌试验,证明对8种常见致病菌有较好的抑菌作用,特别是对金黄色葡葡球菌、白色葡萄球菌、奈氏菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌和绿脓杆菌都有较好的抗菌效果。杨书珍等进行了二氢杨梅素对几种食品常见菌的抑制效果的研究表明:二氢杨梅树皮素(DMY)对牛奶酸败菌和青霉菌具有明显的抑制作用,且抑菌效果优于常见的防腐剂苯甲酸,而对酵母菌的抑制效果不显著。因此,DMY可作为食品添加剂应用于乳制品及易染霉菌食品的保藏。2.3双氢杨梅枝条素对肠平滑和主动脉条的收缩为了加大显齿蛇葡萄开发利用研究力度,有些学者进行了显齿蛇葡萄抗高血压研究。周天达等、刘建新等证实了二氢杨梅素能拮抗去甲肾上腺素(NE)和高K+所致的兔胸主动脉条收缩,显示双氢杨梅树皮素对肠平滑肌和主动脉条的α受体具阻断作用。周天达等进一步证实,二氢杨梅素对NE所引起的依赖内Ca2+释放的收缩有明显的抑制作用,对NE依赖细胞外Ca2+性收缩仅在较高浓度时才显示抑制作用,提示双氢杨梅树皮素对电压依赖性钙通道(PDC)有选择性阻滞作用,有望开发为抗高血压药。2.4降脂乳剂的作用有学者进行了显齿蛇葡萄消脂作用研究。钟正贤等采用喂高脂乳剂小鼠高血脂症模型实验证实,模型组血清TC、TG值明显升高,HDLC值下降。与模型组比较,二氢杨梅素大小剂量组均能抑制高脂乳剂引起的血脂升高,具降脂作用,其作用强度与对照药安妥明相似。钟正贤等进行了广西藤茶总黄酮降血糖的实验,观察了GXTF对多种动物模型血糖水平的影响,结果表明:GXTF对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠有较好的治疗作用,对肾上腺素、葡萄糖引起的高血糖小鼠也有明显的降血糖作用,但对正常小鼠血糖无明显影响;急性毒性试验表明,其最大灌胃量为26.0g/kg,说明GXTF对多种动物模型具有较好的降血糖作用,且副作用很小。2.5抗麻黄毒素作用针对黄酮的生理特性,有些学者进行了显齿蛇葡萄保肝护肝作用研究。OshimaY等从AmpelopsisbrevipedumnculataVar.hancei的根中分离了二氢杨梅素F和G(AmpelopsinsF、G),其表现出明显的抗四氯化碳和半乳糖胺所导致的肝损伤,之后又证实了ampelopsinE和反式ampelopsinE表现出抗肝炎毒素作用。郑作文等进行了广西藤茶中双氢杨梅树皮素对小鼠急性肝损伤的保护作用的研究,结果表明:双氢杨梅树皮素有效地抑制四氯化碳和D-半乳糖所致小鼠急性肝损伤的血清ALT和AST的升高,与空白对照组比较有显著性差异。说明双氢杨梅树皮素能有效地保护小鼠急性化学性肝损伤。二氢杨梅素保肝护肝机理已基本明确。主要是其可抑制肝性M细胞胶原纤维的形成,从而达到治疗肝病的目的。在老鼠肝细胞组织培养中,肝细胞移植后很容易产生胶原纤维,但二氢杨梅素则可抑制胶原纤维的形成,已形成的胶原纤维则被分散成小微块。钟正贤等进行了广西藤茶中双氢杨梅树皮素及总黄酮保肝作用的实验研究,结果表明:双氢杨梅树皮素能明显降低四氯化碳、D-半乳糖胺和异硫氰酸萘酯致小鼠急性肝损伤模型血清中ALT、AST活性和T-BIL含量,减轻肝组织的变性和坏死;并提高单核巨噬细胞吞噬功能和溶血素含量。说明双氢杨梅树皮素具有保肝降酶退黄,提高免疫功能作用。2.6藤茶中aps对小鼠免疫调节的影响为了判断显齿蛇葡萄是否具有增强免疫作用,周月婵等进行了藤茶安全性毒理学评价及其免疫调节作用实验研究,结果表明:安全性评价试验中,受试藤茶对小鼠的急性经口毒性试验结果属无毒级、三项遗传毒性试验结果为阴性、90d喂养试验表明受试藤茶对大鼠各项观察指标未产生毒副作用;免疫调节试验中,与对照组比较,受试物组小鼠的DTH肿胀度明显增加,抗体细胞生成数显著增多,吞噬指数明显增加,经统计学检验,差异具有显著性,说明藤茶具有增强小鼠免疫功能的作用,可以安全饮用。曾春晖等进行了藤茶中APS对小鼠淋巴细胞增殖反应的影响研究,结果表明:APS中,大剂量组与阳性对照组比较有显著性差异,增强率分别为15.2%、26.8%、59.6%。说明APS对ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖有增强作用,具有明显的免疫增强作用。钟正贤等进行了广西藤茶总黄酮的长期毒性试验,结果表明:广西藤茶总黄酮大小剂量组动物的外观行为、体重、脏器系数、血液学和生化学指标,与空白对照组比较,均无明显差异;病理检查未见与药物毒性相关的明显病变,停药后也未见药物延迟性毒性反应。说明广西藤茶总黄酮长期用药对大鼠无明显毒性,推论临床拟用剂量应是安全的。2.7氢杨树乙醇急性毒性的毒剂效果为了证明显齿蛇葡萄是否象茶叶一样具有减轻乙醇中毒作用,HaseK等在进行解除酒精中毒剂实验中发现,二氢杨梅素作为解除酒精中毒剂效果最佳;之后,在进行机理研究时发现,二氢杨梅素减轻乙醇中毒的原理主要是保护肝,减轻乙醇对肝的损伤。刘建新等用显齿蛇葡萄植物水煎剂进行了解酒实验,结果显示随其水煎剂浓度的加大,跌倒反应百分率和步态不稳百分率下降,证实其具缓解酒醉反应,促进醒酒的作用,尽管刘建新用的不是二氢杨梅素单体,但显齿蛇葡萄植物水煎剂的主要成分为二氢杨梅素,说明二氢杨梅素具有减轻乙醇中毒的作用。3dmy0.犯罪抑制了+tbhq的脂肪酸过氧化体系为了寻找天然抗氧化剂,张友胜等进行了显齿蛇葡萄中二氢杨梅树皮素的抗氧化作用及其机制研究,结果表明:DMY对稳定自由基DPPH的清除率高达73.3%～91.5%;DMY(0.01%～0.04%)可抑制亚油酸过氧化,其作用效果等同或优于TBHQ。DMY在FeSO4依他酸引发的亚油酸过氧化体系中的抗氧化机制为络合Fe2+,阻止由Fe2+引发的亚油酸过氧化。说明DMY有较好的抗氧化效果,有可能成为一个很好的天然抗氧化剂。林淑英等进行了二氢杨梅素在猪油体系中的抗氧化作用研究,通过测定丙二醛吸光值和过氧化物值来评价抗氧化效果,抗坏血酸和柠檬酸可有效地提高二氢杨梅素的抗氧化性能。4复合性二氢杨梅素的提取工艺为了加快显齿蛇葡萄开发利用进程,覃洁萍等对广西藤茶中黄酮类成分的提取工艺进行了研究,采用新的水提取和溶剂分离的方法,经化学和光谱鉴定确定结构。结果表明:提取产物经确证为双氢杨梅树皮素(dihydromyricetin)和杨梅素(Myricetin),平均收率分别为19.6%和0.51%,该提取法经济、简便,易于操作,并且提取率较高。王岩等采用正交试验法对藤茶蛇葡萄素的优选提取工艺进行了研究,选择80%乙醇,用量为藤茶量的10倍,加热回流2次,每次60min效果理想。张友胜采用“增温溶解,保温过柱,温水解吸”的方法对显齿蛇葡萄中的二氢杨梅素进行提制研究。结果表明:该方法的适宜温度为50～70℃,最好为60℃,该方法能很好地将70%左右的二氢杨梅素提纯到80%;提纯二氢杨梅素时,单位数量的D16大孔吸附树脂处理料液的数量,主要取决于料液中二氢杨梅素的纯度;同时过柱时上柱料液浓度、过柱速度以及解吸时水的流速对二氢杨梅素的提制均有影响