中药十八反对大鼠肝细胞色素p450酶含量的影响

中药十八反对大鼠肝细胞色素p450酶含量的影响

18个热是中医理论的重要组成部分，是中医七情“对立”配合的具体体现。目前，这项研究主要集中在对该现象的确认上，而对该机制的解释很少。现代医学理论认为,药物间的“反”应指它们间不良的相互作用,药物经肝脏代谢时,通过影响肝药酶产生相互影响,是药物相互作用的途径之一。因此本实验选择测定大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量,观察乌头、半夏、栝楼、贝母、白蔹和白及各药单药组、配伍组对P450酶及b5含量的影响,通过比较十八反药物中的一组“半楼贝蔹及攻乌”,以探讨其配伍药物在肝药酶途径的相互影响,为今后中药复方配伍研究提供实验依据。1材料表面1.1实验动物中心2级Wistar大鼠,体质量180～220g,雌雄各半,由军事医学科学院实验动物中心提供,常规饲养。实验动物质量合格证号:SCXK-(军)2002-001,动物实验设施使用证号:SYXK-(军)2002-001。1.2实验药物实验药物购自北京市同仁堂药店和安国药市(固定产地),水煎制备,浓缩成1g/mL,置4℃保存备用。1.3血清标准蛋白和试剂连二亚硫酸钠(北京化工厂);一氧化碳(CO)(北京夏天气体厂);牛血清标准蛋白(总后药检所);Folin酚试剂(北京欣经科生物公司);高速冷冻离心机,DU-640核酸蛋白分析仪(BECKMAN公司)。1.4大鼠给药剂量实验大鼠随机分为11个给药组和1个正常对照组,每组18只,灌胃给药,正常对照组给予等量的生理盐水,2次/d,连续3、7、14d。根据《中华人民共和国药典》(2000年版)有关人用各药的剂量范围,取高限用量进行预实验,按体表面积换算成大鼠给药剂量,各组实验给药剂量分别为:乌头组0.25g/(kg·d);半夏组、贝母组、白蔹组1.51g/(kg·d);栝楼组、白及组2.51g/(kg·d)。2实验方法2.1灌流肝脏,灌流肝脏分别于给药3、7、14d后禁食12h以上断头处死动物,迅速打开腹腔,作肝门静脉插管,用预冷的生理盐水灌流至肝脏颜色变为土黄色为止。取出肝脏称质量,按肝脏组织∶缓冲液(1∶4)加pH7.5(TMS)缓冲液制备匀浆,用钙沉淀法制备微粒体悬液。2.2不同指标样品对cod-pcr测定Lowry法测定微粒体蛋白悬液蛋白含量,根据各样品的蛋白含量,用pH7.4的Tris缓冲液稀释微粒体蛋白悬液至0.5mg/mL,共6mL,分成2管。一管作为空白对照管,另一管加20μL连二亚硫酸钠(0.1g/mL)混匀,作为b5样品测定管,400～500nm扫描测定样品b5含量;取出上述空白对照管倒入原管中,加20μL连二亚硫酸钠(0.1g/mL)混匀,冲CO1min,作为P450酶样品测定管,上述b5样品测定管作为空白对照管,400～500nm扫描测定P450酶含量。计算公式:2.3压力值的比较实验数据以均数±标准差()表示,两组间的差异显著性分析用方差分析。表中显著性表示方法:与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与乌头组比较#P<0.05,##P<0.01,###P<0.01;与其相应单药组比较▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.01。3结果3.1两组配伍p450酶含量比较结果表明,乌头、半夏单药组药后14d大鼠肝细胞色素P450酶含量均显著增加,与正常对照组比较统计差别显著(P<0.05或P<0.01);两药配伍后P450酶含量与其相应单药组比较显著降低(P<0.01),与正常对照组比较无统计差别(P>0.05);乌头单药组药后14d大鼠肝细胞色素b5含量显著增加,与正常对照组比较统计差别显著(P<0.01),两药配伍药后7、14db5含量与其相应单药组比较显著降低(P<0.05),与正常对照组比较无统计差别(P>0.05)。3.2胞色素p450酶检测结果表明,栝楼组及乌头与栝楼配伍组药后对大鼠肝细胞色素P450酶含量无影响(P>0.05);两药配伍药后14db5含量与其相应单药组及正常对照组比较显著降低(P<0.05或P<0.01)。3.3组患者的统计差别p/0.05,正常对照组与正常对照组比较结果表明,乌头与贝母两药配伍药后14dP450酶含量与其相应单药组比较显著降低。(P<0.05或P<0.01),与正常对照组比较无统计差别(P>0.05);贝母组药后7、14d大鼠肝细胞色素b5含量显著增加,与正常对照组比较统计差别显著(P<0.05),乌头与贝母两药配伍药后7db5含量显著低于贝母单药组(P<0.05),药后14db5含量与相应单药组及正常对照组比较显著降低(P<0.001)。3.4不同单药组p450酶含量比较结果表明,白蔹单药组药后14d大鼠肝细胞色素P450酶含量显著增加,与正常对照组比较统计差别显著(P<0.01),乌头与白蔹两药配伍后P450酶含量与其相应单药组比较显著降低(P<0.01),与正常对照组比较无统计差别(P>0.05);白蔹单药组药后14d大鼠肝细胞色素b5含量显著增加,与正常对照组比较统计差别显著(P<0.05),乌头与白蔹两药配伍后b5含量与其相应单药组及正常对照组比较显著降低(P<0.05或P<0.01)。3.5酶含量比较结果表明,白及单药组对大鼠肝细胞色素P450酶含量无影响,乌头与白及两药配伍药后14dP450酶含量与乌头组比较显著降低(P<0.01),与正常对照组比较无统计差别(P>0.05);白及单药组药后14d大鼠肝细胞色素b5含量显著高于正常对照组(P<0.05),乌头与白及两药配伍药后14db5含量与其相应单药组和正常对照组比较显著降低(P<0.05或P<0.01)。4不同药物配伍对p450酶活性的影响本实验设3个给药时间点,观察了给药后3、7、14d大鼠P450酶及b5含量变化,结果发现该组药物于药后3、7d对P450酶及b5含量仅个别组有影响,药后14d对P450酶及b5含量影响较大。单药栝楼组、贝母组、白及组对P450酶含量无影响,乌头组、半夏组和白蔹组与正常对照组比较可显著增高P450酶含量(P<0.01或P<0.05),乌头分别与半夏、贝母、白蔹、白及配伍可降低P450酶含量,与其相应单药组比较统计差别显著(P<0.01或P<0.05),与正常对照组无统计差别(P>0.05);单药栝楼组和半夏组对b5含量无影响,乌头组、贝母组、白蔹组和白及组与正常对照组比较可显著增高b5含量(P<0.001或P<0.05);乌头分别与半夏、栝楼、贝母、白蔹、白及配伍可降低b5含量,与其相应单药组及正常对照组比较统计差别显著(P<0.001或P<0.05)。细胞色素P450酶是体内主要参与药物代谢的酶,P450酶活性的高低直接影响到药物的药理作用,当两种以上的药物合用时,就可能诱导或抑制P450酶,从而导致药物药效或毒性的增强或降低。细胞色素P450酶在化学药物相互作用研究中应用广泛,但在中药复方配伍研究中