食品中大肠菌群的测定(MPN法)

实验

食品中大肠菌群的测定(MPN法)参考GB4789．3-2010食品安全国家标准大肠菌群MPN计数法xx职业技术学院生物工程学院农产品质量检测教研室xx回顾相关知识

1、什么叫大肠菌群？食品中大肠菌群计数的卫生学意义是什么？2、什么是大肠菌群MPN计数法？大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品卫生质量，具有广泛的卫生学意义。

MPN是对样品中活菌浓度的一种估计数。采用“逐级稀释至无菌”的方法进行。具体做法是对样品做连续系列稀释，接种于装有液体培养基的试管中培养，按照阳性管的管数和稀释度，对原始样品中的被检菌作统计学估计。食品中大肠菌群数以每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。一、实验目的巩固食品中大肠菌群计数的卫生学意义掌握MPN计数法检验食品中大肠菌群的原理和方法MPN计数法包括初发酵试验和复发酵试验。初发酵试验：利用大肠菌群能发酵乳糖产酸产气的原理。复发酵试验：牛胆粉和煌绿抑制非肠杆菌科细菌，再次进行乳糖发酵试验，经48h培养产酸产气的，最终确定为大肠菌群阳性结果。二、实验原理1、培养基：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤、煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤2、仪器或其他用具：电子天平（感量0.1g）、无菌不锈钢勺、无菌称量纸、无菌吸管（1mL和25mL）、试管、三角瓶、无菌生理盐水（9mL/管，225mL/三角瓶内含适量玻璃珠）、无菌1mol/LNaOH、无菌1mol/LHCl、75%酒精棉球、广口瓶、灭菌剪刀、灭菌镊子、酒精灯、精密pH试纸、恒温培养箱、高压灭菌锅、均质器、振荡器、接种环等。四、实验器材

检样稀释月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h不产气产气煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）36±１℃，24~48±2h不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性报告大肠菌群检验程图（新国标MPN法）五、实验步骤1、样品处理：固体和半固体食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225mL生理盐水的三角瓶中，充分振荡，制成1:10样品匀液无菌均质杯或无菌均质袋内，于8000r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液。1、样品处理：液体食品：以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌玻璃瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠）中，以30cm幅度、于7s内振摇25次（或以机械振荡器振摇）,制成1:10的样品匀液。2、样品稀释：1:1025g/ml样品1ml1ml1ml1:1001:10001:10000生理盐水注意：吸管尖端不要触及稀释液面，每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。3、初发酵试验：

记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。LST不产气（-）

小导管里无气泡4、复发酵试验：

注意：以48h±2h为最终观察结果时限。结果也以此时为最终结果。

LST产气（+）将产气的试管内样品接种到BGLB肉汤05、大肠菌群最可能数（MPN）的报告：根据经确证后的大肠菌群LST

阳性管数查MPN表，报告每g（mL）样品中大肠菌群MPN值。1g(mL)检样中最大可能数（MPN）表--420>1100333948.7272124,1001801100233424.5201122,00090460133423.7150121,00042240033424.5202021,00090290323423.61410243040210223381.49.200242037150123424.5160314201893023424.51512142040160313423.61102142037120213383.6111112001775113201.37.4011180943013383.6112011801764203181.37.21011108.738103180.173.6001944.623003383.69.4030948.736132181.26.2020948.729032181.26.1110948.735222110.153.0010948.7281229.60.153.0100424.5210229.5--<3.0000高低0.0010.010.10高低0.0010.010.1095%置信区间MPN阳性管数95%置信区间MPN阳性管数六、实验结果与分析经查MPN表，样品中大肠菌群数为

MPN/g（mL）阳性管数0.100.010.001LST发酵管BGLB证实管分析一些主要食品卫生指标（微生物）

食品种类细菌个数/mL（g）大肠菌群MPN致病菌酱类、醋类＜5000＜30，醋不得检出不得检出腐乳类、豆豉、酱菜类＜30不得检出豆腐干、豆腐、豆腐干＜50000＜70不得检出凉粉＜500＜30不得检出消毒牛乳、甜炼乳＜30000＜40不得检出全脂奶粉＜5000＜40不得检出瓶装汽水、果汁饮料＜100＜5不得检出全啤酒＜1000＜50不得检出发酵酒（熟啤酒、黄酒