生化实验四影响酶活性的因素

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一、实验目的

通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。二、实验原理

唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用的底物是淀粉。

淀粉

I2：蓝色淀粉酶糊精（大分子，小分子）紫红色、暗褐色或红色淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖棕黄色，碘本身颜色

淀粉水解过程中与碘反应，其颜色的变化，可以指示淀粉的水解程度，也可以由此判断淀粉酶活力强弱。

在不同的温度、pH、及添加激活剂和抑制剂的条件下，将唾液淀粉酶加入到淀粉溶液中，作用一定时间以后，取出反应液，加入碘指示剂，比较各种条件下，反应液与碘反应后颜色的差异，由此说明淀粉酶活力的变化。三、实验试剂及器材1.试剂

1%淀粉溶液：1g淀粉和0.3gNaCl，用5ml蒸馏水悬浮，慢慢倒入60ml煮沸的蒸馏水中，煮沸1min，冷却至室温，加水到100ml，冰箱贮存。

碘液：3gKI溶于5ml蒸馏水中，加1gI2，溶解后再加295ml水，混匀贮存于棕色瓶中。

pH4.0、pH6.8、pH8.0磷酸盐缓冲液

1%CuSO4溶液

1%NaCl2.器材

恒温水浴锅

电炉

白瓷板四、实验操作1.唾液淀粉酶的制备取干净的水杯，盛上蒸馏水。用蒸馏水漱口。口含约20ml蒸馏水，1-2分钟后，吐入一干净烧杯中，棉花过滤。2.温度对唾液淀粉酶活力的影响

取3支试管，按下表操作：

各管在相应温度中水浴，每隔1分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2min，各加1滴碘液，混匀。观察并记录各管反应现象，解释之。操作项目管号

1231%淀粉溶液(ml)111pH6.8磷酸缓冲液(ml)0.50.50.5唾液淀粉酶溶液(ml)111温度处理（℃）037沸水3.pH对唾液淀粉酶活性的影响操作管号

123pH4.0磷酸缓冲液(ml)200pH6.8磷酸缓冲液(ml)020pH8.0磷酸缓冲液(ml)0021%淀粉溶液(ml)111唾液淀粉酶溶液(ml)111

摇匀，置37℃水浴中反应，每隔1分钟从第2号管中取出1滴反应液于白瓷板上，加碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色，即可停止反应，取出所有试管。向其中滴加碘液1滴，比较各管中淀粉水解程度。取试管3支，按下表操作4.激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响操作管号

1231%NaCl(ml)1001%CuSO4(ml)010蒸馏水(ml)001唾液淀粉酶溶液(ml)1111%淀粉溶液(ml)111

摇匀，37℃水浴反应1min左右即可用碘液检查1号试管淀粉水解程度，待

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