穗花马先蒿活性成分的研究

穗花马先蒿活性成分的研究

枸杞是一种珍贵的中药和补充剂。作为国家卫生部门的同源药物之一，它在国际市场上很受欢迎。但是枸杞的病虫害不断发生演变,给农民造成巨大的经济损失。枸杞蚜虫(Aphissp.)属同翅目,是枸杞的重要害虫,多年来以化学防治为主,由于药农对防效下降经常采取随意提高药剂浓度和增加施药次数等办法,加速了枸杞蚜虫抗性的发展,不仅增加了生产投入,也污染了环境。因此,寻找和开发新一代高效、低毒、无公害农药势在必行。植物源农药因其来源广、对害虫作用机制独特、不易产生抗性、与环境兼容等优点而倍受全世界农药研究及应用部门的广泛重视,已成为新一代农药研究的热点。穗花马先蒿(PedicularisspicataPall.)是玄参科马先蒿属一年生草本植物。它具有很高的药用价值,性温,味甘微苦,其根可入药,有大补元气,生精安神,强心之功效。目前,对穗花马先蒿的研究主要集中在化学成分和药理活性的研究,而对其杀虫活性的研究未见报道。笔者首次对穗花马先蒿的杀虫活性进行了研究,并采用点滴法测试了穗花马先蒿乙醇提取物及不同溶剂萃取物对枸杞蚜虫的杀虫活性,发现乙醇提取物和石油醚萃取物对枸杞蚜虫均具有较好的杀虫效果。该研究结果对穗花马先蒿活性成分的进一步研究以及将其开发成新型的植物源农药具有参考价值。1材料和方法1.1材料表面1.1.1花和织物的制备穗花马先蒿采自宁夏六盘山大水沟(海拔1300～2800m)。主要利用花和花序部分,将其与其他部位分开,阴干,放入恒温箱烘干(40～45℃)。磨碎,过40目筛,装入保鲜袋密封贮于冰箱中备用。1.1.2试验对象枸杞蚜虫采自没有喷施药剂的活体枸杞树,选择个体大小一致、无翅健康成蚜作供试昆虫。1.1.3仪器、设备和仪器HP400GS型智能人工气候培养箱(武汉瑞华仪器设备有限责任公司);AL204型电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);RE-52AA型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵(郑州长城工贸有限公司);KA-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。1.2方法1.2.1乙醇提取物的制备称取100g穗花马先蒿的花和花序粉末,装入1000ml锥形瓶中,加入10倍量的95%乙醇,浸泡48h后超声提取40min,过滤,滤液减压浓缩后得乙醇提取物(简称PSEE)。称取PSEE15g,加10倍量蒸馏水,热溶,装入分液漏斗中,采用液-液分配萃取,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3～5次,最后分别将各萃取液和水萃取液减压浓缩至浸膏,称取适量,用50%丙酮配成一定浓度进行杀虫活性测试。1.2.2前刺激素类型试虫处理采用点滴法:穗花马先蒿乙醇提取物用50%丙酮稀释成系列浓度,在试虫的前胸背板上点滴1μl,每个浓度处理30头试虫,重复5次,50%丙酮处理作对照。处理后的枸杞蚜虫放入新鲜枸杞叶上,置于智能人工气候培养箱内,分别于24、48h记录试虫的死亡情况,计算死亡率以及校正死亡率。2结果与分析2.1校正死亡率测定由表1可见,乙醇提取物对枸杞蚜虫有较好的杀虫效果。随着浓度的增大和时间的延长,枸杞蚜虫的校正死亡率都在升高;浓度为50.00mg/ml,48h校正死亡率可达96.38%,毒力回归方程为:y=2.220x+2.859,LC50=9.21mg/ml,r=0.9907。2.2不同萃取物的害虫将“1.配成4mg/ml的供试浓度,采用“1.2.2”的方法进行杀虫活性测试,结果见表2。表2表明,各萃取物对枸杞蚜虫的杀虫活性存在显著差异,杀虫活性由大到小依次为:石油醚萃取物>正丁醇萃取物>氯仿萃取物>乙酸乙酯萃取物>水萃取物。其中石油醚萃取物的杀虫效果最高,48h的校正死亡率可达96.38%;而水萃取物的杀虫效果最低,48h的校正死亡率为20.29%这说明穗花马先蒿的杀虫活性部分主要是酯溶性的弱极性物质,具体成分有待进一步研究。3穗花马先蒿的抗菌活性研究(1)该试验采用冷浸和超声提取相结合的方法,以95%的乙醇作提取剂,料液比为1∶10,提取穗花马先蒿杀虫活性成分,得率为15.30%。(2)穗花马先蒿乙醇提取物对枸杞蚜虫具有较好的杀虫活性,LC50为9.21mg/ml。(3)通过比较不同极性萃取物的活性得出,穗花马先蒿的杀虫活性成分主要是酯溶性的弱极性物质,且主要分布在石油醚所在极性范围内,这为穗花马先蒿活性成分的进一步分离纯化研究提供了理论