园艺2010级食用菌实验指导书

PAGEPAGE1《食用菌加工工艺学》课程实验指导书2006年5月31日目录实验一食用菌菌种分离技术1实验二食用菌的深层发酵技术6实验三食用菌原种和栽培种生产8实验一食用菌菌种分离技术目的和要求掌握食用菌组织分离的方法和实际操作技术，明确食用菌菌种分离在食用菌生产中的重要性。实验内容每班同学分为6个小组，(每4个人一个小组)组织分离接种以小组为单位进行，每个同学接种2支试管母种。每小组每人采用菌盖与菌柄交界处组织进行分离和菌盖带菌褶部分进行组织分离。(各做一支试管)仪器、设备和材料试管斜面PDA培养基、平菇和香菇较成熟的子实体、酒精灯、接种针、75%酒精，火柴以及恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、天平、无菌操作台、解剖刀等。实验原理食用菌菌种分离方法有多种，如组织分离法、孢子分离法、耳木分离法和土中菌丝分离法，本实验采用组织分离法。

在食用菌生产中采用组织分离的方法繁殖母种是大多数菌类普遍采用的方法，而组织分离成功与否是与种菇子实体的选择、分离过程中的操作方法等分不开的。这直接关系到所繁菌种的优劣。因此食用菌组织分离是食用菌生产中的重要环节之一。实验步骤1、选菇平菇选朵大肉厚子实体作种菇。香菇选择菇形圆整、肉厚较成熟未开伞的作种菇。2、种菇消毒将选好的种菇剪去过长的菌柄，放入接种箱内进行消毒。种菇均用75%的酒精擦洗菌盖、菌柄。3、组织分离接种用无菌解剖刀从菌柄中部纵向切开，或把种菇撕开，在菌盖与菌柄交界处或菌盖带菌褶部分挑取一小块组织，移接到试管PDA培养基上。4、菌种培养及保存置28℃左右温度下培养3～5天，组织块上产生白色绒毛状菌丝，并向培养基上生长。菌丝长满斜面后，管口用塑料薄膜或防潮纸包扎，即可放入5℃冰箱中保藏。六、作业根据观察结果同一菌种不同部位组织分离后菌丝生长情况，评价何种部位更适宜该菌种的组织分离繁殖，并对操作的各个环节提出改进建议。实验二食用菌的深层发酵技术一、目的和要求学习掌握食用菌的深层发酵技术。二、实验内容食用菌的深层发酵。三、仪器、设备和材料1、实验材料平菇母种、麸皮。2、试剂葡萄糖、蛋白胨，磷酸二氢钾，硫酸镁。3、仪器高压蒸汽灭菌锅、天平、摇床。四、实验原理人为控制食用菌生长发育所需的条件，液体摇床条件下培养平菇菌丝。五、实验步骤（一）摇瓶培养（1）培养基（每L），0.1mpa灭菌20min。麸皮50g（煮沸后取其滤液），葡萄糖20g，蛋白胨2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，pH值自然。马铃薯200g（去皮，切成薄片，加水1000ml煮沸取汁），葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，pH值自然。（2）接种：培养基冷却后接种平菇菌种块。（3）培养培养温度24～26℃，培养5～7d后培养液中充满浅白色菌球，发酵液放置短时间后呈透明状，pH值为4.5，这表明菌种已长好，可作为二级摇瓶培养种子用，二级摇瓶培养接种量10％。（二）种子罐培养（1）培养基葡萄糖2％，豆饼粉1％（小于20目），酵母膏0.1％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，培养液装量70％，蒸汽压力0.1mpa，20min灭菌。（2）培养一级种子罐60～100L，接种量3％～5％，于24～26℃，通气搅拌下培养，通气量1：1（每分钟体积比），罐压0.5*105pa，培养7d左右，当培养液中充满菌球，培养液变成透明即可作为二级子罐的菌种。二级种子罐体积400～500L，培养基与一级种子罐相同，接种量10％，发酵5d左右，发酵终点与一级种子罐相同。（三）发酵罐培养发酵罐体积一般有5000L、1.5*104L、3*培养基蔗糖3％，黄豆粉或黄豆饼粉1.5％，玉米粉1.5％，蛋白胨0.1％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，pH值5.0～6.5，蒸汽压力0.12mpa，灭菌1.5h。发酵接种量10％，发酵周期5d左右，至发酵液呈黄棕色充满菌球，菌球开始自溶，菌球干重达1％～1.2％，静止后发酵液透明，pH值约为4.5以下，残糖量约为0.2％左右时即可终止发酵。实验三、食用菌原种和栽培种生产一、实验目的和要求：1．掌握原种和栽培种培养基制备技术2．学会原种和栽培接种方法3．掌握菌种培养的环境条件控制方法4．学会菌种质量鉴定方法二、实验内容：1．原种、栽培种培养基制备2.原种、栽培种接种、培养。三、主要仪器设备及配套数：1.仪器或其它用具：超净工作台，高压灭菌锅，接种针，镊子，菌种瓶。2.溶液或试剂：75%乙醇。3.菌种：平菇母种、原种。4.培养基：棉籽壳培养基。四、实验原理：人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体。2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种。3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种。食用菌的制种程序食用菌的制种程序组织分离接种→母种（一级）接种→→原种（二级）种菇孢子分离培养培养栽培种经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。一般1支试管菌种可繁殖4－6瓶原种，每瓶原种又可扩大繁殖60－100瓶栽培种。原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。1）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直接用于生产。（母种→原种）2）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用于生产。（原种→栽培种）（一）、常用培养料的配方和配制方法（1）粪草培养基（适用于蘑菇）配方：稻草或麦杆20kg、粪肥（干）30kg、石膏500g、水适量。制作方法：稻草切成2cm长＋粪肥→混合发酵＋石膏→调水→装瓶→灭菌（2）稻草麸皮培养基（草菇）配方：干稻草78%、麸皮或米糠20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、水适量。制作方法：稻草切成2cm长→发酵→＋蔗糖＋麸皮＋过磷酸钙（3）木屑米糠培养基（香菇、木耳、猴头、平菇等）配方：木屑78%、麸皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、水适量。

（4）木屑、麸皮、黄豆粉培养基（银耳）配方：木屑50kg、麸皮15kg、黄豆粉1kg、蔗糖0.75kg、MgSO40.25kg、水适量。（5）棉籽壳培养基（平菇、猴头、金针菇）配方：棉籽壳99.7%、蔗糖0.1%、石膏0.2%、水适量（二）、培养基（料）配制原则（1）掌握碳氮比例食用菌对碳和氮的需要有一个比例，简称碳氮比（C／Ｎ）。菌丝体生长阶段：C／Ｎ=20∶1；子实体形成阶段：C／Ｎ=30－40∶1。（2）选好培养材料选不含杀菌物质的木屑杉、松、樟等树种，含酚、酯、精油等杀菌物质，会抑制食用菌生长。必须经过处理才能用于制种，如：蒸煮、晒等。（3）注意物理性状培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，以及持水性能等物理性状。（4）调节酸碱度各种食用菌需要的pH值不同，配制培养料时，应选用NaOH、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调节pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的pH值，生产上有时为了控制这类杂菌的发生，往往将pH值适当调高0.5~1。（三）、培养基原料用途的几点说明（1）米糠、麸皮作用作用：补充氮源和维生素。稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料，含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。米糠：含氮量比麸皮少。用量：一般10%~20%，过多易引起污染。（2）加糖的作用①初期补充碳源，用量1%－5%。②诱导胞外酶的产生。纤维素原料，食用菌利用缓慢。加入少量白糖作为食用菌初期补充碳源，促进菌丝快速生长，同时诱导纤维素酶的产生，更好地利用纤维素。（3）Ca2＋作用①提供食用菌钙离子：原料中加石膏、CaCO3或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙离子；②钙不断中和食用菌产生的有机酸；③钙还能中和单宁（四）、培养料的配方棉籽壳92%（9.2斤）、玉米粉2.5%（125g）、黄豆粉2.5%（125g）、石膏（硫酸钙）2.0%（100g）、碳酸钙1.0%（50g）、pH6－6.5、水=65%五、原种、栽培种的制作方法按配方称取原料→拌料→调节含水量65%左右→装袋→灭菌→冷却→接种（接入黄豆大小一块菌种）→培养（25℃－27℃）→菌丝长满瓶（袋）→培养7d－8d→扩大成栽培种。含水量65%左右判断：用手紧握培养料，手指缝中有水珠渗出，但不滴下。六