流式细胞仪分析技术及应用

流式细胞仪分析技术及应用一、选择题（一）A1型题（原则型）1．流式细胞仪是由下述哪项基本构造构成A．流体系统B．光学系统C．计算机系统D．流体系统、光学系统和信号解决系统E．流体系统、光学与信号转换测试系统和信号解决与放大的计算机系统2．流式细胞仪流动池鞘液孔径普通为A．50μmB．50～100μmC．50～200μmD．50～300μmE．300μm3．有关液流系统的鞘液，下述哪项是对的的A．鞘液是辅助样本作正常检测的基质液B．鞘液是用来与样本作对比的C．鞘液是包裹在样本流周边D．使样本保持处在喷嘴中心位置，确保检测精确性E．避免样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞4．流式细胞仪光学系统的构成为A．激光系统B．激光光源与分光镜C．激光光源、分光镜与光束成形器D．激光光源、分光镜、光束成形器和透镜组E．激光光源、分光镜、光束成形器、透镜组和光电倍增管5．下述哪项有关激光光源的叙述是对的的A．采用气冷式氩离子激光器B．激光波长488nm，15mWC．激光束波长466nm，10mWD．不散焦E．容易聚焦成有高斯能量分布的光斑6．光束成形器的作用是将激光器发射的激光束聚焦成A．高15μm、宽57μm的椭圆形光斑B．高10μm、宽57μm的椭圆形光斑C．高15μm、宽50μm的椭圆形光斑D．高10μm、宽50μm的椭圆形光斑E．高20μm、宽60μm的椭圆形光斑7．反射较长波长的光而通过较短波长的光的是A．气冷氩离子激光器B．分色反光镜C．光束成形器D．透镜组E．光电信增管8．检测荧光和反射光，并将光学信号转换成电脉冲信号的是A．气冷氩离子激光器B．分色反光镜C．光束成形器D．光电倍增管E．透镜组9．流式细胞仪构成部件中对实验分析数据存储、显示与分析的是A．液流系统B．光学系统C．光电倍增管D．软件E．数据解决系统10．一台好的流式细胞仪每秒钟可测量A．25000个细胞B．0个细胞C．15000个细胞D．10000个细胞E．5000个细胞11．一台好的流式细胞仪每秒钟可测定荧光染料粒子A．5000个B．4000个C．3000个D．个E．1000个12．前向散射光（ＦＳ）信号的强弱与下述哪项成正比A．体积大小B．细胞性状C．颗粒多少D．位移速度E．荧光强弱13．前向散射光是用于检测细胞或其它粒子的A．内部属性B．表面属性C．着染属性D．粒子属性E．以上都不是14．侧向检测器与发射激光束的方向A．平行B．在激光前方C．在激光上方D．垂直E．在激光下方15．侧向散射光（ＳＳ）用于检测细胞的A．表面属性B．内部构造属性C．着染属性D．物理属性E．化学属性16．荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受A．荧光激发后产生B．紫外光激发产生C．红外光激发产生D．发光物质激发产生E．激光激发产生17．流式细胞仪检测原理中最重要的一点是A．检测荧光的特定发射波长B．检测激发光的波长C．检测荧光的颜色D．检测前向散射光E．检测侧向散射光18．对数放大器中输入信号放大10倍，输出信号放大A．1倍B．2倍C．3倍D．10倍E．100倍19．对数放大器中输入信号放大10倍，输出信号由A．1转变为2B．2转变为3C．3转变为4D．1转变为3E．1转变为420．线性放大器用于测量的信号A．强度变化范畴较广B．放大倍数较大C．放大倍数较小D．强度变化范畴较少E．以上都不是21．对数放大器用于测量信号是A．强度变化大但信号简朴B．强度变化小但信号复杂C．强度变化大且信号复杂D．强度变化小且信号简朴E．以上都不是22．流式细胞仪中最惯用于单抗标记的荧光染料是A．FITC、RB200、TRITCB．FITC、PE、PCC．FITC、RB200、PED．FITC、TRITC、PEE．FITC、PE、ECD或PECY523．消除重叠信号普通采用A．荧光赔偿B．滤光片C．调节荧光染料D．线性转换E．对数转换24．分选细胞时液流柱形成液流的速率约每秒钟A．50000个B．40000个C．30000个D．0个E．10000个25．均匀连串的液滴中大量液滴是A．含有细胞B．含有淋巴细胞C．含被荧光染色的淋巴细胞D．不含细胞的空白液滴E．以上都不是26．待分选细胞形成液滴时会被A．染色B．充电C．酶标记D．抗体捕获E．以上都不是27．带电荷的液滴在落入电极偏转板的高压静电场后会A．聚集B．散开C．继续下落D．停止下落E．向左或右偏转28．普通规定分选速度最少达成A．0个/秒B．10000个/秒C．7000个/秒D．5000个/秒E．3000个/秒29．分选速度与细胞悬液中分选细胞的下述哪项直接有关A．细胞含量B．细胞性质C．细胞大小D．有否胞膜E．单核或多核30．骨髓来源细胞的分选宜选择高速是由于A．细胞太多B．细胞太大C．细胞膜结实D．细胞核结实E．在总细胞群体中所占比例不高31．分选纯度除与仪器的精密度有关外，还与A．被分选细胞的性质有关B．其它细胞的性质有关C．被分选细胞的数量有关D．其它细胞的数量有关E．分选细胞与其它细胞有无互相重叠有关32．要想获得分选高收获率，就应A．提高被分选细胞的纯度B．减少被分选细胞的纯度C．提高被分选细胞的浓度D．减少被分选细胞的浓度E．减少其它细胞的浓度33．现在设立收获率均在A．100%B．99%以上C．98%以上D．95%以上E．90%以上34．分选得率是指A．分选收获率B．通过测量点的分选细胞的比率C．从悬液中分辨出的目的细胞的总量D．通过测量点的细胞与实际收获的分选细胞的比率E．从悬液中分辨出的目的细胞总量，再经分选后获得的实际比率35．分选得率与A．分选速度有关B．分选目的细胞总量有关C．不选细胞总量有关D．分选细胞的生物学性质E．不选细胞的生物学性质36．面积脉冲信号是指A．电压脉冲曲线内外区域的大小B．电压脉冲曲线外区域的大小C．电压脉冲曲线内区域的大小D．电压脉冲的高度E．以上都不是37．流式细胞仪的数据参数中荧光信号反映的是A．颗粒中被染上荧光部分数量的多少B．颗粒的大小C．细胞内部构造复杂程度D．细胞表面的光滑程度E．以上都不是38．单参数直方图反映的是A．不同荧光强度的颗粒数量B．同样荧光强度的颗粒数量C．不同荧光强度的颗粒性质D．同样荧光强度的颗粒性质E．以上都不是39．单参数直方图中A．纵坐标表达被测细胞的数量，横坐标分为1024脉冲信号通道B．纵坐标表达被测细胞的性质，横坐标分为1024测量参数C．纵坐标表达被测细胞的数量，横坐标分为1124测量参数D．纵坐标表达被测细胞的性质，横坐标分为1024脉冲信号通道E．纵坐标表达被测细胞的数量，横坐标分为1024细胞40．双参数直方图涉及A．点图B．点图、二维等高图C．点图、二维等高图、三维等高图D．点图、二维等高图、假三维等高图E．点图、二维、三维和假三维等高图41．等高线图由类似地图上的下述哪种线构成A．实线B．虚线C．连线D．双线E．等高线42．假三维等高图中的一维不是参数，而是A．细胞B．细胞数C．线性D．对数E．峰值43．Regiou设立是根据下述哪项信号强弱划定分析区域A．同一张单参数和三参数直方图B．同一张双参数和三参数直方图C．同一张单参数和双参数直方图D．同一张单参数和多参数直方图E．同一张双参数和多参数直方图44．gate设立是指在某一张选定参数的直方图上根据该图的细胞群分布选定待分析的特定细胞群，并规定该样其它参数组合的直方图只体现A．该群细胞的分布状况B．ＲBC的分布状况C．ＷBC分布状况D．Pt分布状况E．CD4+细胞分布状况45．进行流式细胞分析第一步是制备A．两个细胞的重叠B．多个细胞的粘连C．细胞碎片D．单细胞悬液E．细胞荧光染色46．制备单细胞悬液时，测定前普通要把哪项从血液中分离出来A．单核细胞或淋巴细胞B．单核细胞或血小板C．淋巴细胞或血小板D．Ｔ淋巴细胞或B淋巴细胞E．红细胞或血小板47．从新鲜实体组织制备单细胞悬液的目的是A．分离细胞B．不损伤细胞C．既分离细胞又不损伤细胞D．破坏组织间的胶原纤维E．分解组织间的蛋白质48．新鲜实体组织单细胞悬液制备的惯用办法有A．机械法B．酶解决法C．化学试剂解决法D．表面活性剂解决法E．以上都不是(二)A2型题(否认型)1．流式细胞仪分析技术不涉及A．激光技术B．计算机技术C．电子显微镜技术D．流体喷射技术E．分子生物学技术2．不是带通滤片允许通过的光波长是A．525nmBPB．575nmBPC．620nmBPD．625nmBPE．675nmBP3．与散射光的强弱无关的是A．细胞的大小B．细胞的形状C．细胞的标记D．细胞的光学同性E．胞内颗粒折射4．荧光染料在488nm激发光下发出荧光颜色错误的是A．绿色B．橙色C．白色D．橙红色E．红色5．对培养细胞的分选不适宜选择高速，是由于A．细胞太多B．细胞太大C．细胞膜脆弱D．细胞核脆弱E．胞浆所占比例大6．不是流式细胞仪数据显示的方式是A．单参数直方图B．双参数直方图C．三参数直方图D．假三维等高图E．前向散射光示意图（三）B1型题（配伍题）问题1～3A．量子产额和消光系数B．吸取C．波长差D．标记染色E．荧光信号1．荧光染料应有较高的：2．发射光波长与激发光波间有较大的：3．荧光染料对488nm激发光波长有强的：问题4～6A．深蓝B．橙红色C．橙色D．红色E．深红色4．FITC的荧光颜色是：5．PE（RD1）的荧光颜色是：6．ＰeCy7的荧光颜色是：问题7～9A．CD3+、CD4+、CD8-B．CD3+、CD4+、CD8+C．CD19、CD20、CD21、CD22D．CD16、CD56、CD11a/CD18E．CD3-、CD16+、CD56+7．临床拟定为ＮＫ细胞的是：8．成熟B细胞重要体现的是：9．Ｔh细胞体现的是：问题10～12A．ＴdＴB．ＰＩC．ＭDＲD．CD4+/CD8+倒置E．ＨＬA－B2710．用流式细胞仪检测的胞质内抗原之一是：11．用于肿瘤耐药基因分析时，可检测到的是：12．AIDS患者免疫诊疗指标之一是：二、填空题1．血液中各类细胞的密度不同，其中____________与Ｆicoll分层液密度1.077相称，离心后位于分层液与血浆层的界面中。2．FITC是免疫荧光技术中最惯用的染料，但其发射荧光的强度受影响较大。3．两种荧光发射信号重叠时，其检测精确性差，普通采用的办法来消除重叠信号。4．细胞仪根据细胞流经光照射区时＿＿＿＿＿＿的强弱来分析和分选细胞。5．式细胞术是对的理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。三、判断题1．流式细胞仪的工作原理借鉴了荧光显微镜技术。2．镜组的作用是将激光和荧光变成平行光。3．荧光染料浓度较稀时，荧光强度与溶液成反比。四、名词解释1．细胞自发荧光2．分选得率3．前向散射光五、简答题1．简述流式细胞仪的工作原理。2．鞘液的重要作用是什么？3．流式细胞仪荧光测量的基本原理是什么？4．简述细胞分选的原理？5．何谓同型对照？六、叙述题1．用流式细胞仪进行细胞分选的技术规定有哪些？2．制备合格的单细胞悬液时应注意些什么？3．请介绍流式细胞仪在血液病检测中的应用。原则答案一、选择题（一）A1型题(原则型)1.E2.D3.B4.E5.C6.A7.B8.D9.E10C11.E12.A13.B14.D15.B16.E17.A18.D19.A20.D21.C22.E23.A24.C25.D26.B27.E28.D29.A30.E31.E32.B33.D34.E35.A36.C37.A38.B39.A40.D41.E42.B43.C44.A45.D46.B47.C48.E(二)A2型题(否认型)1.C2.E3.C4.C5.C6.D(三)B1型题(配伍题)1.A2.C3.B4.A5.C6.E7.E8.C9.A10.A11.C12.D二、填空题1．单核－淋巴细胞2．pＨ3．荧光赔偿4．电压信号5．单个细胞三、判断题1.√2.√3.×四、名词解释1．细胞自发荧光：大部分哺乳动物细胞内的吡啶或黄素类核苷酸都存在自发荧光，用紫外光或蓝光激发可蓝色或绿色荧光。2．分选得率：指从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞总量，再经分选后获得目的细胞的实际得率。3．前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对较小的角度0.5~10°向前方散射的讯号。五、简答题1．流式细胞仪的工作原理：借鉴了荧光显微镜技术，将激发光改为激光，使含有更加好的单色性；运用荧光染料与单克隆抗体技术，提高特异性与敏捷度；将固定的标本台改为流动的单细胞悬液，并用计算机进行信号的数据解决分析，能同时从一种细胞上获得多个参数资料。2．鞘液的重要作用：鞘液是辅助样本流进行正常检测的基质液，其重要作用是包裹在样本流的周边，使其保持处在喷嘴中心位置以确保检测精确性，同时避免样本流中细胞靠近孔壁而堵塞喷嘴。3．流式细胞仪荧光测量的基本原理：荧光测量时，荧光信号由被测细胞上标记的特异性荧光染料受激光激发后产生，每种荧光染料都有特定的激发波长，激发后产生特定波长荧光与颜色，通过波长选择通透性滤光片，将不同波长荧光信号辨别开，送到不同的光电倍增管，通过一系列信号转换、放大、数字解决，可在计算机上显示出来。4．细胞分选的原理：当细胞悬液形成液流柱流经流动室，流动室上方的压电晶体产生机械振动带动流动室以相似频率进行振动，使液流柱断裂成一连串均匀的液滴，其形成速率约每秒３万个，其中仅少数液滴含有细胞，大量为不含细胞的空白液滴。当实验设计中设定了被分选细胞的特性参数时，这类细胞在形成液滴时会充电，带有正或负电荷，未设分选参数的细胞及空白液滴不带电荷。带电液滴在落入电极偏转极的高压静电场，依所带电荷是正或负而发生向右或左道偏转，落入指定收集器中完毕分选。5．同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同，应选用相似来源的未标记单抗作为同型对照来调节及设立电流电压，在此基础上进行样本检测可使荧光标记单抗的信号保持特异性，如不用同型对照，成果的可靠性将受到影响。六、叙述题１．用流式细胞仪进行细胞分选的技术规定有：①分选速度，普通规定分选速度达5000个/秒左右，以确保被分选细胞的生物活性不受影响。分选速度与仪器性能有关，与细胞悬液中被分选细胞含量呈正有关。分选速度应按细胞的特性决定，如培养细胞因其膜脆弱，不适宜选择高速；而骨髓来源的细胞因所占比例不变，宜选高速。②分选纯度，与仪器精密度及被选细胞与其它细胞有无重叠特性有关，也与实验设计的选择亲密有关。③分选收获率，即通过测量点的分选细胞与实际收获的分选细胞的比例，同样与不选细胞有否重叠有关。收获率与纯度有对应关系：规定纯度高，收获率相对低；规定收获率高，则纯度相对减少。实际工作中，应在不影响纯度的状况下，获得最高收获率。④分选得率，是指从一群