植物脱毒与组培快繁技术-马铃薯脱毒与快繁

模块五植物脱毒与组培快繁技术项目四马铃薯脱毒与快繁脱毒苗培育项目四

马铃薯脱毒与快繁123CONTENTS脱毒苗培育马铃薯茎尖培养脱毒马铃薯无病毒苗的鉴定项目四马铃薯脱毒与快繁4马铃薯无病毒株的繁殖和保存5微型薯生产6原种种薯生产一、脱毒苗培育（一）基本知识1.脱毒苗（无病毒苗）：是指不含有该种植物的主要危害病毒，经过检测主要病毒在植物体内表现为阴性反应的苗木。脱毒苗培育（一）基本知识病毒病的危害苗期分株数量减少

萌芽率降低，生长量减少嫁接不亲和种子发芽率降低产量降低果实品质下降

树势衰退，直至死亡脱毒苗培育脱毒苗培育葡萄病毒脱毒苗培育枣疯病脱毒苗培育苹果茎沟病毒苹果茎痘病毒3.病毒抑制剂的局限性（1）对病毒只起到抑制作用（2）不能治愈全株（3）对植株有毒害作用（4）当药效消失时，病毒又恢复4.脱毒苗的优点（1）产量提高（2）品质提高（3）抗病性提高脱毒苗培育5.病毒病的传播途径（1）介体传播（2）机械传播（3）无性繁殖材料和嫁接传播6.受病毒侵染植株外部症状

局部或系统花叶，皱缩，卷叶，黄化，老叶上出现紫色边缘的褪绿斑，一般春秋季明显。脱毒苗培育7.病毒特性及其侵染规律（1）全身侵染，终生带毒，持久危害,一般通过嫁接传染，多数不经过种子传播。（2）病毒在植物体内分布不均一，越接近生长点，病毒浓度越稀。脱毒苗培育（二）脱毒技术热处理脱毒化学治疗脱毒花药培养脱毒茎尖培养脱毒微体嫁接脱毒脱毒苗培育脱毒苗培育脱毒苗培育热处理脱毒原理植物处于高温环境中，体内病毒全部或部分钝化，不能生成或生成病毒很少，病毒含量不断降低，从而达到脱毒目的。方法

温汤浸渍高温空气处理脱毒苗培育温汤浸渍适用材料：休眠期器官方法：将植物材料浸渍在50－55℃温水中，10min至数小时。特点：简单易行，易使植物材料受伤。脱毒苗培育热空气处理适用材料：活跃生长的茎尖方法：将生长的带毒盆栽植物移入温热治疗室内，35－40℃热气处理几十分钟至数月。缺点：不能脱除所有病毒。脱毒苗培育脱毒苗培育脱毒苗培育茎尖培养脱毒原理：茎尖或根尖分生组织（0.1－0.5mm）大多不含病毒。取材：

取新梢顶端3－5cm。消毒

接种：切取0.2－0.5mm的茎尖组织接种于培养基上。脱毒苗培育脱毒苗培育茎尖培养脱毒影响茎尖培养成活的因素1.外植体的大小2.培养条件较高的温度、充足光照利于茎尖培养3.外植体的生理状态选萌动期的芽生长旺盛枝条的顶芽比侧芽培养效果好脱毒苗培育花药培养脱毒消毒与接种采花蕾70%的酒精浸渍数秒剖开花蕾取花药接种在诱愈培养基上（每瓶30－50个花药）脱毒苗培育花药培养脱毒接种后形成愈伤组织分化培养基10－30天分化出再生植株20－30天脱毒苗培育花药培养脱毒培养条件温度：23－28℃光强：2000－4000lx光照时间：每天16h脱毒苗培育微体嫁接脱毒适用植物茎尖培养脱毒生根困难，不能获得完整植株的植物。方法培养砧木：种子去皮后接在MS培养基上，25℃环境下暗箱培养2周，转入光照培养。准备微茎尖：从供体上采集茎尖。脱毒苗培育微体嫁接脱毒嫁接：从试管中取出砧木，切去子叶，留1－2cm长的上胚轴，切去过长的根系，保留4－6cm。茎顶部一侧切U切口，茎尖置于切口上。嫁接苗培养：送入MS液体培养基中，由滤纸桥支撑进行培养。移裁：培养1个月左右，具2－3片叶时移入基质中，套袋、保温，保湿，20天后成活。脱毒苗培育（三）脱毒苗的鉴定指示植物检测血清学鉴定电子显微镜检测分子生物学检测脱毒苗培育指示植物检测优点灵敏、准确、可靠、操作简便。对指示植物的要求根据不同病毒，选择合适的指示植物容易栽培对要鉴别的病毒敏感，易接种，易感染，症状显著。利用病毒在其他植物上产生特定症状作为鉴别病毒存在与否及种类的方法称指示植物法。脱毒苗培育指示植物检测鉴定方法汁液涂抹法嫁接接种法取被鉴定植物幼叶1－3g研钵中研磨，过滤滤液中加少量500－600目金刚砂棉花球醮汁液涂抹叶面2－3次指示植物15－25℃培养脱毒苗培育血清学鉴定含义抗原与抗体发生特异性反应（血清学反应），根据反应的症状可鉴别病毒存在与否和种类，这种方法称为血清学鉴定。原理病毒侵入动物体后，动物血清中会产生抗体，含抗体的血清称为抗血清，病毒即为抗原。脱毒苗培育血清学鉴定优点专一性高，结果准确，快速简便，一般几小时甚至几分钟就可完成。方法病毒的分离、纯化、制备抗血清、测定脱毒苗培育电子显微镜检测用电子显微镜直接观察被鉴定植物组织的提取液有无病毒，并进一步鉴定病毒颗粒大小、形状和结构甚至种类。特点

灵敏度高，并能定量测定病毒，准确率高。但设备昂贵。目前已发展出免疫电镜技术。脱毒苗培育分子生物学鉴定也称酶联免疫吸附测定法，是将酶与抗体（或抗原）结合，制成酶标抗体（抗原），将抗原固定在支持物上，加入待检侧血清，然后加入酶标记的抗体，使待检血清中与对应抗原的特异性抗体结合，最后用特殊分光光度计测定。特点：灵敏度高，特异性强。但费时费力，一次只能检测一种病毒，检测多种病毒时灵敏度低。脱毒苗培育项目四马铃薯脱毒与快繁模块五植物脱毒与组培快繁技术马铃薯脱毒与快繁

项目四马铃薯脱毒与快繁12345CONTENTS脱毒苗培育马铃薯无病毒苗的鉴定微型薯生产原种种薯生产马铃薯茎尖培养脱毒马铃薯无病毒株的繁殖和保存6项目四马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁微型薯马铃薯脱毒与快繁

马铃薯营养繁殖时易受病毒浸染，当条件适合时，病毒就会在植株内增殖，转运和积累，随着世代传递，病毒危害逐年加重，一般造成减产50％以上。研究发现，有30多种病毒易感染马铃薯，并引起品种退化，严重影响马铃薯的生产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。马铃薯脱毒与快繁

1.脱毒种薯生产程序

用微茎尖组织培养法，诱导出苗，联免疫吸附法或指示植物法鉴定马铃薯病毒，经鉴定后无主要病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。二．马铃薯茎尖培养脱毒马铃薯脱毒与快繁

试管基础苗在无菌条件下，采用固体、液体培养基相结合的方法，进行扩繁基础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插，生产出原原种（或称脱毒小薯）。用原原种在一定隔离条件下产生原种1代，以后逐级称为原种2代、良种1代、良种2代。马铃薯脱毒与快繁2.取材和培养

多采用在室内发芽，芽经热处理(38℃)2周。然后取顶芽或侧芽1cm的茎尖，自来水冲洗干净，无菌条件下先用70％酒精浸润30s，再用2％次氯酸钠液浸4-5min，然后用无菌水冲洗3次。马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁

消毒芽在解剖镜下仔细逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可留1-2个叶原基，0.2-0.3mm。接种于液体培养基：MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA30.2mg/L+2%蔗糖，pH值5.8。培养条件：21-25℃、2000-3000lx、12h/d。3-6月长成2-3cm小芽。马铃薯脱毒与快繁

3.继代和生根脱毒苗经ELISA（试剂盒）鉴定后,采用固、液培养基相结合方法扩繁。取试管苗单节切段扦插，每瓶插20个茎段，20d长成5-10cm高小植株，继续切段繁殖，每月可繁5-8倍。试管苗多节接种进行浅层静止液体培养。

马铃薯脱毒与快繁

MS+NAA0.2-0.5mg/L+D-泛酸钙10mg/L+3%蔗糖，20-25℃，3000-4000LX，14-16h/d，每3周继代一次，单芽茎段约1cm，可插也可平放原则试管苗用2年-3年。4.培养基马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁5.驯化移植马铃薯脱毒与快繁

基础苗成活后便可切繁，但切繁量的多少和质量的高低，除与水与温湿度条件有关外，正确的切繁方法和适宜的切繁苗龄也非常重要。脱毒苗切繁主要是剪取顶部芽尖茎段（主茎芽尖和腋芽芽尖）直接扦插。6.脱毒苗切繁马铃薯脱毒与快繁

在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。三、马铃薯无病毒苗的鉴定1.指示植物鉴定马铃薯脱毒与快繁

马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红，茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫网室中培养。

2.鉴定寄主的准备３.接种液制备及接种放置防虫室中，一般5－10d可发病。马铃薯脱毒与快繁鉴定方法取被鉴定植物幼叶1－3g研钵中研磨，过滤滤液中加少量500－600目金刚砂棉花球醮汁液涂抹叶面2－3次指示植物15－25℃培养汁液涂抹法嫁接接种法指示植物检测马铃薯脱毒与快繁

通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株，而生产上需要数以万计的健康种薯。同时无病毒植株并没有对该病毒获得免疫能力，仍会在繁殖中再次侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒再侵染是很关键的一环。四、马铃薯无病毒株的繁殖和保存马铃薯脱毒与快繁(１)直接块茎繁殖(２)扦插繁殖(３)组织培养切段繁殖

A：继代培养

B：低温保存繁殖方法主要有:项目四马铃薯脱毒与快繁模块五植物脱毒与组培快繁技术马铃薯脱毒与快繁

项目四马铃薯脱毒与快繁12345CONTENTS脱毒苗培育马铃薯无病毒苗的鉴定微型薯生产原种种薯生产马铃薯茎尖培养脱毒马铃薯无病毒株的繁殖和保存6项目四马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁微型薯马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁五、微型薯生产

由试管苗生产的重1-30克的微小马铃薯称为微型薯。1.实验室生产微型薯

（1）单茎节扩大繁殖（2）微型薯诱导马铃薯脱毒与快繁

试管苗

茎段培养带1-2个叶片茎段微型薯诱导

微型薯MS+3%蔗糖+0.8%琼脂五、微型薯生产MS+香豆素50-100mg/L马铃薯脱毒与快繁

在温室4-6层育苗架上放育苗盘，基质选用蛭石、珍珠岩等。将脱毒试管苗以单茎段或双芽茎段扦插，在人工调控的温光条件下经2-3个月即可收获微型薯。扦插时用3mg/LGA+5mg/LNAA混合液浸泡茎段，扦插成活率达98%。2.温室生产微型薯马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁马铃薯脱毒与快繁五、微型薯生产