不同产地蒲公英药材的质量对比研究 中药学专业

不同产地蒲公英药材的质量对比研究目录TOC\o"1-2"\h\u23888摘要 前言蒲公英为菊科植物蒲公英TaraxacummongolicumHand.-Mazz.、碱地蒲公英TarxacumborealisinenseKitam.或同属数种植物的干燥全草[1]。其气微，味微苦，具清热解毒、消痈散结的功效，既可治疗内外痈，通经下乳，治疗乳痈，又能清热解毒、利湿通淋，治疗湿热黄疸[2]。蒲公英是药食同源品[3]，它既是一种常见的野菜，也是自然界中罕见的富硒植物，具有较高的开发价值[4]。近来发现蒲公英具有广谱抗菌、保肝利胆、促进乳汁分泌、提高免疫力、抗老年痴呆、抗氧化和预防癌症等作用[5]，其提取物能诱导乳腺癌细胞凋亡[6]；药理实验表明，蒲公英有抑制菌种、抗氧化、抗血栓、改善血液循环、抗炎和降低血脂血糖的作用及健胃、保肝利胆和免疫促进等作用[7]。在不少方药中，蒲公英可作为使药或佐药使用，如清热解毒类方药、活血祛瘀类方药和利水通淋类方药等。不少公司在进行方药研究时，必须先对药材或饮片进行药材检验，在符合药典标准后才可使用，这才使得在方药的后续研究中能确保方中各味药的安全性和有效性。在方药研究或日常用药中，不同产地蒲公英药材的质量是否符合用药标准及其质量优劣均会影响用药情况，与药效相关。在2015年版《中国药典》中，对蒲公英的质量标准有性状、鉴别、检查和含量测定四方面，内容比较全面，具有权威性，但没有涉及不同产地的质量优劣。目前，在蒲公英的相关文献中，由于蒲公英化学成分较复杂，故较少对蒲公英的某一化学成分进行药理作用研究[8]，多是研究某一类化合物的具体药理作用，如蒲公英多糖成分具有多种活性[9]，具体的化合物药理研究较少，而关于不同产地蒲公英的研究主要集中在：不同产地蒲公英中的绿原酸和咖啡酸的含量测定[10]、不同产地的蒲公英中总黄酮类成分和咖啡酸成分含量比较[11]以及不同地区的蒲公英中咖啡酸和绿原酸含量测定，结果发现东北11区中丹东蒲公英的咖啡酸和绿原酸含量结果最高，而戟片蒲公英的咖啡酸含量结果甚至低于中国药典的规定标准[12]，也有发现家种蒲公英较野生蒲公英所含多糖成分多，单以咖啡酸作为质量标准可能不太适合[13]。由此可知，不同产地的蒲公英中所含成分可能在含量上差异较大，较难通过控制用药量达到相同用药疗效，故对不同产地的蒲公英进行含量测定将对蒲公英的用药量有一定帮助，且2015年版《中国药典》中对蒲公英有较全面的质量标准。因此，本论文依据2015年版《中国药典》对河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批蒲公英药材进行质量研究，包括进行性状、鉴别、检查和含量测定四项，其中鉴别包括显微鉴别和薄层鉴别（TLC），检查包括水分测定和二氧化硫残留量测定，含量测定以咖啡酸含量作为指标，并在符合药材质量标准的前提下对不同产地的蒲公英进行质量分析比较，避免部分药材在水分超标或二氧化硫残留量超标等而含量符合条件的情况下仍被入药，从而影响实际用药效果，此实验在一定程度上可引起大家对药材检验的重视，保障人们用药安全，有助于后续的方药研究。2材料与仪器2.1蒲公英药材采购河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英，其中编号1~4的蒲公英药材产地为河南宜阳县，编号5~8的蒲公英药材产地为河南洛宁，编号9~12的蒲公英药材产地为甘肃平凉华亭，经盈科瑞（横琴）药物研究院有限公司曹晖博士鉴定为菊科植物蒲公英属蒲公英TaraxacummongolicumHand.-Mazz.的干燥全草。2.2仪器与材料数码相机（IXUS-285-HS，SONY）、显微镜(PH50-3A43L-A-01，凤凰光学集团有限公司)、十万分之一天平（CPA225D，广州市授科仪器科技有限公司）、万分之一天平(BSA224S-CW，上海沪粤明科学仪器有限公司)、百分之一天平（JJ1000，常熟市双杰测试仪器厂）、电热恒温水浴锅（HWS-26，上海一恒科学仪器有限公司）、超声清洗仪(KQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司)、暗箱式紫外透射反射仪（WGH-2013，CHITANG）、高效液相色谱仪（1260Ⅱ，Agilent）、色谱柱（Agilent5TC-C18，4.6*250mm，5μm）、电热鼓风干燥箱(DHG-9070A，上海精科实业有限公司)、电子调温电热套（98-1-B，天津市泰斯特仪器有限公司）、磁力加热搅拌器（78-1，金坛市中大仪器厂）、2.0ml注射器、0.45μm微孔滤膜、硅胶G薄层板。2.3对照品咖啡酸对照品（批号110885-201703，99.7%，中国食品药品检定研究院）。2.4试剂水合氯醛、丙三醇、苯酚、乙酸丁酯、磷酸二氢钠、95%乙醇、甲基红（国药集团化学试剂有限公司）、甲酸、乙酸乙酯、盐酸（广州化学试剂厂）、甲醇（OCEANPAK）、磷酸（阿拉丁）、0.1mol/L氢氧化钠标准溶液（东莞市树万化工有限公司）、30%双氧水(天津市永大化学试剂有限公司）、纯化水（娃哈哈），除甲醇和磷酸是HPLC外，其他试剂均为AR。3方法与结果本论文根据2015年版《中国药典》对河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个不同产地12批蒲公英药材进行性状、鉴别、检查和含量测定的质量研究，在蒲公英药材符合所有质量标准的前提下对3个不同产地的蒲公英进行咖啡酸含量比较，比较其含量高低。3.1性状鉴别每一批蒲公英药材采用四分法的方式选取适量蒲公英药材，置于白纸上，并进行仔细观察。性状鉴别如下图3-1、3-2和图3-3：图3-1河南宜阳县蒲公英的性状鉴别（编号1~4）图3-2河南洛宁蒲公英的性状鉴别（编号5~8）图3-3甘肃平凉华亭蒲公英的性状鉴别（编号9~12）由图3-1、图3-2和图3-3可以看出，河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材均呈皱缩卷曲状，根呈圆锥状，多弯曲，根头部有棕褐色茸毛，根表面呈棕褐色，叶基生，多皱缩破碎，有绿褐色以及暗灰绿色，有数条花茎，具有头状花序，有多层总苞片，花冠呈黄色，长椭圆形的瘦果具白色冠毛。不同点在于：每一批的根头部长度都不同，具体见下表3-1；部分批次蒲公英叶的颜色稍有不同，第5批和第8批蒲公英药材其叶的颜色较多暗灰绿色而较少绿褐色；第5批次和第6批次的花茎较长；第7批次花茎较多。综上可知：相较于河南宜阳县和甘肃平凉华亭的蒲公英药材，河南洛宁的蒲公英药材根头部长度较短，叶颜色偏暗灰绿色，花茎较长较多。结果：河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材均具有蒲公英的性状，符合2015年版《中国药典》的蒲公英药材质量标准。表3-1不同产地蒲公英药材的根头部长度数据表编号产地平均根头部长度(cm)平均值(cm)1河南宜阳县2.002.522.8231.6043.605河南洛宁2.702.562.3072.0582.759甘肃平凉华亭2.172.7103.50113.45121.853.2显微鉴别3.2.1叶表面观实际操作步骤如下：①配制水合氯醛试液：取水合氯醛50.1g，加水15ml及甘油10ml溶解，即得。②配制甘油试液：取甘油33ml，加水稀释至100ml，滴加1滴苯酚，即得。③显微操作：选取蒲公英叶的薄片置于洁净的载玻片上，滴加2滴水合氯醛试液，于酒精灯上缓缓加热，再滴加1滴水合氯醛试液，在酒精灯上再次加热，至透化后滴加1滴稀甘油，将盖玻片一侧接触液体缓缓放下并排除气泡，用吸水纸吸去多余的液体，将预处理好的一次性装片置于显微镜下进行观察。结果见下图3-4、3-5和3-6。图3-4河南宜阳县的蒲公英药材显微特征图图3-5河南洛宁的蒲公英药材显微特征图图3-6甘肃平凉华亭的蒲公英药材显微特征图由上图3-4、3-5和3-6，可看出，河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材的相同点有：表皮细胞可见垂周壁波状弯曲，上下表皮均具有非腺毛，表皮具气孔，不定式或不等式，有副卫细胞3~6个，有细小的草酸钙结晶，有乳汁管。不同点在于：非腺毛细胞数目不一定相同，气孔的类型不一定相同，有的是不等式，有的是不定式，副卫细胞数目不一定相同。结果：河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材均具有蒲公英的叶表面的特征，符合2015年版《中国药典》的蒲公英药材质量标准。3.2.2根横切面实际操作步骤如下：取蒲公英药材根部，徒手切片，切成薄片，取适宜的根横切薄片置载玻片上，滴加1~2滴水，将盖玻片一侧接触液体缓缓放下并排除气泡，用吸水纸吸去多余的液体，将预处理好的一次性装片置于显微镜下进行观察。结果如上图3-4、3-5和3-6，可以看出，河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材均能观察到木栓细胞数列，显棕色；韧皮部较宽广，乳管群断续排列成轮；导管较大，散列存在，形成层成环，木质部偏小，射线不明显。不同点在于：河南洛阳的蒲公英的导管数量多于河南宜阳县的多于甘肃平凉华亭的。结果：河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材均具有蒲公英的根横切面特征，符合2015年版《中国药典》的蒲公英药材质量标准。因此，此12批蒲公英药材均具有蒲公英的显微特征，符合2015年版《中国药典》的质量标准。3.3薄层鉴别实际操作步骤：①咖啡酸对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品10.30mg，精密称定，加甲醇溶解并定容至10ml作为咖啡酸对照品母液，从母液中取0.5ml置印管中，加甲醇至1ml，摇匀，作为咖啡酸对照品溶液（0.515mg/mL）。②配制5%甲酸的甲醇溶液：用量筒量取12.5ml甲酸于250ml量瓶中，加甲醇定容至量瓶刻度线，摇匀即得。③供试品溶液的制备：取蒲公英粉末1g至具塞锥形瓶，加5%甲酸的甲醇溶液约20ml，超声处理20分钟后滤过至蒸发皿于水浴锅上蒸干，残渣加水10ml使溶解，滤过后取续滤液，并用乙酸乙酯萃取两次，每次10ml，合并两次乙酸乙酯液，蒸干，残渣再加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。每一批药材配制一个供试品溶液。④点样与展开：取乙酸丁酯14ml、甲酸5ml和水5ml于分液漏斗中萃取，收集上层溶液作展开剂。分别吸取供试品溶液6μl及对照品溶液6μl，点于同一硅胶G薄层板上，预饱和后展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果如下图3-7。由图3-7可知，在365nm紫外灯光下，12批蒲公英药材的供试品色谱在与对照品色谱的相应位置上，显相同蓝色荧光斑点。结果:说明这12批蒲公英药材中含有咖啡酸，符合2015年版《中国药典》的蒲公英药材质量标准。图3-7紫外灯下十二批蒲公英药材的薄层色谱图(365nm)3.4检查3.4.1水分测定按2015年版《中国药典》（通则0832第二法），水分不得过13.0%。实际操作步骤：①恒重称量瓶：将洗净的扁平称量瓶开启瓶盖后放入逐渐升温的电热鼓风干燥箱中，在105℃下恒重3小时，移至干燥器中，放冷35分钟，精密称定，再在105℃下干燥1小时，放冷35分钟，精密称定，且连续两次称重的差异须不超过0.3mg。恒重结果见下表3-2。②样品的操作：取蒲公英药材粉末（过二号筛）2g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定，开启瓶盖在105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷35分钟，精密称定，再在105℃下干燥1小时，放冷35分钟，精密称定，且连续两次称重的差异须不超过5mg。每一编号蒲公英药材同时制作两个样品。③测定方式：每一编号药材同时测量两次水分，取平均值作为该批次的水分测定结果，称量瓶恒重及样品恒重结果均按两者中的最小值进行计算，以减小误差。详细结果见下表3-3。④计算公式：含水量（%）=（称样量+扁平称量瓶重量-干燥后称重）/称样量表3-2不同产地蒲公英药材的水分测定编号产地称样量（g）称量瓶恒重第一次（g）称量瓶恒重第二次（g）称量瓶恒重差值（g）干燥第一次（g）干燥第二次（g）样品恒重差值（g）1河南宜阳县2.029420.268620.26860.000022.145722.14220.00352.011621.005821.00580.000022.863822.85920.004622.023320.985820.98590.000122.841222.83740.00382.015321.404021.40390.000123.253523.24940.004132.006320.287820.28790.000122.115222.11160.00362.009121.032621.03280.000222.862122.85860.003542.031621.493021.49310.000123.351323.34790.00342.009921.418821.41870.000123.258023.25470.00335河南洛宁2.032517.887617.88730.000319.751619.74760.00402.006217.381017.38070.000319.224519.22070.003862.021417.026317.02630.000018.865318.86160.00372.025618.807518.80750.000020.648120.64400.004172.008621.000321.00010.000222.821022.81770.00332.007216.460716.46070.000018.284018.28050.003582.043518.343418.34310.000320.227420.22410.00332.025317.304017.30370.000319.166019.16330.00279甘肃平凉华亭2.004217.867817.86760.000219.716519.71370.00282.004717.473417.47310.000319.318919.31580.0031102.011617.880417.88010.000319.736419.73370.00272.031319.009119.00910.000020.883820.88120.0026112.001321.517221.51740.000223.356923.35420.00272.021822.347322.34750.000224.197324.19460.0027122.034620.589120.58930.000222.467622.46470.00292.033822.877222.87700.000224.749724.74620.0035由表3-2可知，称量瓶两次恒重之差不超过0.3mg，且样品恒重两次之差不超过5mg，符合药典规定。由表3-3可知，同一编号药材的双样之间相对平均偏差小于3%，符合药典规定。由图3-3可知，12批蒲公英药材水分均不超过13.0%；河南宜阳县产地的4批蒲公英所含水分平均值为8.5%；河南洛宁产地的4批蒲公英所含水分平均值为8.8%；甘肃平凉华亭产地的4批蒲公英所含水分平均值为8.1%。结果：河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材的水分均不超标，符合2015年版《中国药典》的蒲公英药材质量标准。表3-3不同产地蒲公英药材的水分测定结果编号产地水分测定结果水分测定均值相对平均偏差平均值1河南宜阳县7.68%7.8%1.2%8.5%7.86%28.49%8.5%0.4%8.43%39.10%9.1%0.1%9.11%48.70%8.7%0.3%8.65%5河南洛宁8.47%8.4%1.1%8.8%8.28%69.21%9.3%0.7%9.34%79.51%9.4%0.9%9.34%87.95%8.1%1.4%8.18%9甘肃平凉华亭7.89%8.0%1.2%8.1%8.08%107.85%7.8%0.1%7.84%118.21%8.4%2.5%8.63%127.81%8.0%1.8%8.09%注：称量瓶和干燥后称重均采用恒重两次中的最小值进行计算。3.4.2二氧化硫残留量测定按2015年版《中国药典》(通则2331第一法），二氧化硫残留量不得超过150mg/kg。实际操作步骤：①吸收液的准备：取3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液置于100ml锥形瓶中，加入3滴2.5mg/mL甲基红乙醇溶液指示剂，再用0.01mol/L氢氧化钠滴定液滴定至溶液呈黄色。②样品的操作：取蒲公英药材细粉约10g，精密称定，置于两颈圆底烧瓶，加入纯化水400ml。搭建测定装置，连接水管，打开回流冷凝水开关给水，将冷凝管的中端连接一橡胶导气管置于吸收液底部。打开氮气，吸取盐酸溶液（6mol/L）10ml于分液漏斗中，打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L）流入蒸馏瓶中，立即加热两颈圆底烧瓶内的溶液，并调节氮气气泡的冒出速度约为3个/秒，至沸后保持微沸1.5小时，停止加热。每一编号蒲公英药材进行单样处理。③空白实验的操作：加纯化水400ml于干净的两颈圆底烧瓶中，余下步骤同上述②的搭建测定装置后。④酸碱滴定：吸收液放冷后置于磁力搅拌器上不断地搅拌，并用0.01mol/L氢氧化钠滴定液滴定，至溶液变黄色且持续20秒不褪，记录样品消耗NaOH的量，空白实验③结果同本操作，记录空白消耗NaOH的量。计算结果见下表3-4。⑤按下式进行计算：样品中二氧化硫残留量（mg/kg）=（样品消耗NaOH的量-空白消耗NaOH的量）×0.01×0.032×106/样品称样量表3-4不同产地蒲公英药材的二氧化硫残留量测定结果编号产地样品称样量（g）空白消耗NaOH的量（ml）样品消耗NaOH的量（ml）二氧化硫残留量测定结果(mg/kg)平均值1河南宜阳县10.027410.061610.068610.066110.053010.059910.069110.057110.050410.055910.036710.04990.050.3083mg/kg20.05030.15340.0505河南洛宁0.1332mg/kg60.15370.05080.0509甘肃平凉华亭0.25615mg/kg100.122110.205121.5548计算结果见上表3-4，每一批蒲公英药材的二氧化硫残留量测定结果远远小于药典规定的150mg/kg，其中，河南宜阳县产地的4批蒲公英所含二氧化硫残留量平均值为3mg/kg；河南洛宁产地的4批蒲公英所含二氧化硫残留量平均值为2mg/kg；甘肃平凉华亭产地的4批蒲公英所含二氧化硫残留量平均值为15mg/kg；可见此12批蒲公英药材中二氧化硫残留量极少。结果：河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材的二氧化硫残留量均未超标，符合2015年版《中国药典》的蒲公英药材质量标准。3.5含量测定照高效液相色谱法（通则0512）测定，本品按干燥品计算，含咖啡酸（C9H8O4）不得少于0.020%。实际操作步骤：①配制流动相：取磷酸二氢钠1.56g，加水溶解并定容至1000ml，并用磁力搅拌器不断搅拌，再加1%磷酸溶液调节pH值至3.8~4.0，滤过，超声脱气后即得磷酸盐缓冲液；将甲醇过滤，超声脱气，即得；在安捷伦1260Ⅱ上按甲醇-磷酸盐缓冲液比例为23:77自动混合。②色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为Agilent5TC-C18，4.6*250mm，5μm；流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（23:77）；检测波长为323nm；流速为1.0ml/min；柱温40℃；排完气泡后进行色谱柱的平衡，先以五针咖啡酸对照品作为系统适用性，再进行样品的含量测定。③对照品溶液的制备：精密称取咖啡酸对照品10.30mg于10ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作为母液，精密吸取母液1ml至25ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀即制成每1ml含41.20μg的咖啡酸对照品溶液。④配制5%甲酸的甲醇溶液：精密吸取5ml甲酸于100ml量瓶中，加甲醇定容至刻度线，摇匀即得。⑤供试品溶液的制备：取蒲公英药材粗粉约1g，精密称定，置于50ml具塞锥形瓶，精密加入5%甲酸的甲醇溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟后取出并放冷，再称定重量，用5%甲酸的甲醇溶液进行补重，摇匀，离心，用针头吸取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤至液相小瓶，即得。每一批药材须同法制备两个样品，其相对平均偏差不得超过3%。⑥测定：分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液10μl，注入安捷伦1260Ⅱ液相色谱仪，测定，即得咖啡酸含量。每一批药材的两个样品均进样一次，其样品RSD值小于3%即可，取其平均值作为该批次药材的含量结果。由于实际条件限制，将编号1~6的药材作为一组进行系统适用性并进行样品含量测定，将编号7~12的药材作为另一组进行系统适用性及样品含量测定，故本实验有两个系统适用性。实验结果见下图3-8至图3-11、表3-5至表3-7。图3-8蒲公英药材含量测定的系统适用性1图3-9蒲公英药材含量测定的系统适用性2表3-5蒲公英药材含量测定的对照品测定结果对照品对照品称样量（mg）稀释倍数对照品浓度（μg/mL）系统适用性对照品峰面积理论塔板数咖啡酸10.3025041.20系统适用性12171.172169.232158.842175.522170.2882148292835981778202系统适用性22182.262180.272180.372178.342184.0883858390841084438407表3-6蒲公英药材含量测定的系统适用性结果系统适用性峰面积均值理论塔板数均值RSD(%)是否符合系统适用性编号1~6号蒲公英药材含量测定的系统适用性2169.0182490.3是编号7~12号蒲公英药材含量测定的系统适用性2181.0684070.1是图3-10河南宜阳县蒲公英药材的高效液相色谱图图3-11河南洛宁蒲公英药材的高效液相色谱图图3-12甘肃平凉华亭蒲公英药材的高效液相色谱图表3-7不同产地蒲公英药材的咖啡酸含量测定结果编号产地称样量（g）峰面积咖啡酸含量咖啡酸含量平均值RSD平均值1河南宜阳县1.00251684.660.0346%0.035%0.3%0.039%1.00561699.010.0348%21.00651853.630.0382%0.038%0.0%1.00351848.710.0382%31.00281741.930.0363%0.036%0.1%1.00341747.860.0364%41.00562269.100.0469%0.047%0.4%1.00692292.080.0474%5河南洛宁1.00791872.230.0385%0.038%0.7%0.039%1.00531842.740.0380%61.00232127.610.0445%0.044%0.1%1.00452129.220.0444%71.01431839.420.0380%0.038%0.9%1.00161785.070.0374%81.00941667.000.0341%0.034%0.2%1.00811669.970.0342%9甘肃平凉华亭1.00701547.190.0317%0.032%0.7%0.036%1.00531567.870.0322%101.00061774.650.0365%0.037%0.4%1.00671798.530.0368%111.00721609.110.0331%0.033%0.7%1.00251580.920.0327%121.00472010.150.0413%0.042%1.6%1.01312093.920.0427%注：1.系统适用性1为编号1~6的蒲公英药材的系统适用性；2.系统适用性2为编号7~12的蒲公英药材的系统适用性；3.由于对照品浓度为99.7%，按100%进行计算。由表3-6可知，两次系统适用性的理论塔板数均达到药典要求的3000，RSD均小于2%。从表3-5到表3-7可知，每一批药材的RSD值均小于3%，符合药典规定。河南宜阳县的平均含量为0.039%，河南洛宁的平均含量也达到0.039%，甘肃平凉华亭的咖啡酸含量为0.036%，故河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭的12批蒲公英药材的咖啡酸含量均高于0.020%。结果：河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材的咖啡酸含量均符合2015年版《中国药典》的质量标准。表3-8不同产地蒲公英药材的检查和含量测定结果编号产地水分平均值（%）二氧化硫残留量平均值（mg/kg）咖啡酸含量平均值（%）1~4河南宜阳县8.58.88.132150.0395~8河南洛宁0.0399~12甘肃平凉华亭0.036由薄层色谱图可以看出，12批蒲公英药材均与咖啡酸对照品在同一位置上显相同颜色的斑点，说明均含有咖啡酸成分。由表3-8可知，三个不同产地的蒲公英药材的含水量和二氧化硫残留量相差不大；此12批药材的咖啡酸含量在0.032%~0.047%之间，三个产地间河南宜阳县平均含量最高为0.039%，甘肃平凉华亭的平均含量最低为0.036%，三个不同产地的蒲公英药材的咖啡酸含量相近。综上所述，河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭3个产地共12批次蒲公英药材均符合2015年版《中国药典》的质量标准，且三个产地蒲公英药材质量相近。4讨论蒲公英作为一种药食同源品，常在日常生活和临床上使用，假若不对蒲公英药材进行质量研究，盲目使用，将会导致不良后果。2015年版《中国药典》对蒲公英的水分、二氧化硫残留量和咖啡酸含量进行了规定，水分不超过13.0%，二氧化硫残留量不超过150mg/kg，咖啡酸含量不少于0.020%，水分若超出标准则会降低理想中的药效，二氧化硫残留量过多将会对人体造成一定的损害，咖啡酸含量不达标将直接影响药效。因此，在进行方药研究前，须根据药典进行相关检查，以确保药材安全、有效，保证质量，拒绝使用不符合药用标准的药材。本论文通过对比研究发现，河南宜阳县、河南洛宁、甘肃平凉华亭这三个产地的蒲公英药材质量相近，可相互替代，在性状、鉴别、检查和含量测定四个方面均符合2015年版《中国药典》的蒲公英药材质量标准，说明这12批蒲公英药材均符合药用标准，具有安全性和有效性，且在质量上无明显差别，可用于日常使用、临床治疗或方药研发与生产。有人认为不同产地的蒲公英中所含成分可能在含量上差异较大，较难通过控制用药量达到相同用药疗效，但实际上，不同产地之间可能有明显差异，也有可能是无明显差异，不同产地并不代表一定会由于地域性而产生较大的质量差异，须打破固有思维，具体差异还可进行深入研究。本研究局限于：由于蒲公英成分复杂，只是单独根据药典规定的方法对药材进行质量研究，尤其是在含量测定上，只测定了规定的咖啡酸成分，并未对其它有明确药理作用的有效成分如总黄酮类成分等进行含量测定，以得知这三个产地的蒲公英药材的整体质量是否相近；由于蒲公英广泛分布于我国，若条件允许还可对蒲公英的地域因素进行进一步的研究。参考文献国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：352[2]钟赣生.中药学.[S].中国中医药出版社，2010.[3]石国慧，陈远才，王旭德，等.药食同源品蒲公英抗肿瘤活性及其作用机制的研究进展[J].沈阳药科大学学报，2017，34（09）：858-862.[4]肖玫，杨进，曹玉华.蒲公英的营养价值及其开发利用[J].中国食物与营养，2005，3（04）：47-48.[5]于晓菲，王振月，张迪，等.蒲公英资源的综合开发利用[J].中国林副特产，2015，5：88-91.[6]X.-H.Li，X.-R.He，Y.-Y.Zhou，etal.Taraxacummongolicumextractinducedendoplasmicreticulumstressassociated-apoptosisintriple-negativebreastcancercells[J].JournalofEthnopharmacology，2017，206.[7]蒋喜巧，苗明三.蒲公英现代研究特点及分析[J].中医学报，2015，30（07）：1024-1026.[8]谢沈阳，杨晓源，丁章贵，等.蒲公英的化学成份及其药理作用[J].天然产物研究与开发，2012，24（S1）：141-151.[9]K.Chang，G.-R.Sun，D.-D.Yao.OptimizationofExtractionofBioactiveMaterial-PolysaccharidesfromtheRootsofTaraxacummongolicumbyBox-BehnkenExperimentalDesign[J].AdvancedMaterialsResearch，2013，25(749)：354-358.[10]马杰.不同产地的蒲公英中咖啡酸和绿原酸含量比较[A].中国药学会、河北省人民政府.2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C].中国药学会、河北省人民政府，2008，5（11）.[11]冯倩，穆丽，郑伟，等.不同产地蒲公英药材中总黄酮和咖啡酸含量分析与评价[J].中国现代中药，2013，15（10）：839-841.[12]宁伟，贾庆飞，朱丹，等.东北地区11种蒲公英咖啡酸和绿原酸的含量测定[J].沈阳农业大学学报，2012，14（05）：595-598.[13]杨辉，王建升，郭宝林，等.野生和家种蒲公英质量比较研究[J].中国现代中药，2017，19（10）：1400-1402.综述蒲公英药材质量研究概况1前言蒲公英为菊科植物蒲公英TaraxacummongolicumHand.-Mazz.、碱地蒲公英TarxacumborealisinenseKitam.或同属数种植物的干燥全草。春至秋季花初开时采挖，除去杂质，洗净，晒干[1]。味苦、甘，性寒，入肝胃两经。蒲公英属约有2000余种，中国有70种、1变种。蒲公英在我国各地均有分布，资源丰富，为国家中药保护品种之一，它既是一种常见的野菜，也是自然界中罕见的富硒植物[2]，亦是常用的药食同源之一[3]，具有较高的开发价值，不但有清热解毒、利尿通淋、消肿散结、健胃消炎和保肝利胆的功效，还有清热活血的功能[4]。本综述将对蒲公英的历史记载及现代研究和报导进行整理和综述，主要针对其历史记载、分布、化学成分、含量测定、质量优劣和抗癌作用等方面，为其深入研究提供一定的依据和思路。2历史记载唐代的《新修本草》载:“叶似苦苣，花黄，断有白汁，人皆淡之。”蒲公英和苦菜形状很相似。宋《本草衍义》有“蒲公英今地丁也，四时常有花，花罢飞絮，絮中有子，落地即生，所以庭院间亦有者，盖因风而来也。”还有宋朝的《本草图经》有“蒲公英旧不著所出州土，今处处平泽田园中皆有之。春初生苗，页如苦苣，有细刺，中心抽一茎，茎端出一花，色黄如金钱，断其茎有白汁处，人亦淡之，俗称蒲公草，语讹为蒲公罂是也。水煮汁以疗妇人乳痈，又捣以敷疮，皆佳。”明朝的李时珍在《本草纲目》中也有记载，江之南北颇多，其他地方也有，岭南无，茎、叶、花、絮并似苦苣，幼苗可以食用。在当地《阳高县志》里也有记载蒲公英。作为药用的蒲公英在《本草纲目》载，蒲公英性味甘，寒；入肝、胃两经，具有清热解毒、健胃消炎的功能。还有说蒲公英主治妇人乳痈肿，水煮汁饮及封之立消。解食毒，散滞气，清热毒，化食毒，消恶肿、结核和疔肿。蒲公英作为一种传统的中草药，蒲公英历来都是全草用药的[5]。明《本草经疏》和清《本草正义》亦有记载[6]。3分布蒲公英在我国分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西、陕西、甘肃、青海、山东、江苏、安徽、浙江、福建北部、台湾、河南、湖北、湖南、广东北部、四川、贵州、云南等省区，广泛生于中、低海拔地区的山坡草地、路边、田野和河滩。适应性很强，即耐寒又耐热，早春地温1-2℃时即可萌发生长，一年春、夏、秋都可采收。国外蒲公英化学成分的研究最早见于1912年，Power等从药用蒲公英(欧蒲公英，T.officinaleWigg.)的根中分离得到对羟基苯乙酸、咖啡酸和胆碱，从不溶于水的树脂中得到蒲公英甾醇(taraxasterol)[7]。此外，蒲公英还有黄酮类、酚酸类、萜类、色素类、植物甾醇类、倍半萜内酯类和香豆素类成分[7]，这些成分均具有实际的药理作用。蒲公英中成分复杂，对蒲公英单一化学成分的研究较少，多是对某类化合物的研究。蒲公英含有多种具有保健功能的化学成分，其全草含有肌醇、天冬酰胺、苦味质、皂苷、树脂、菊糖、果胶、胆矸、蒲公英甾醇等，根部含有蒲公英醇、甾醇、β-香树脂醇、胆矸、果糖、蔗糖及亚油酸，叶含有叶黄素、蝴蝶梅黄素、叶绿醇素等，花中含有毛莨黄素、山金车二醇、叶黄素等，花梗含有β-谷甾醇、β-香树脂醇，花粉中含有β-谷甾醇、5a-豆甾-7-烯-3β-醇及叶酸等，特别是含有人体中稀有的抗肿瘤活性物质硒元素高达14.7，是自然界罕见的高硒植物，蒲公英中绿原酸的含量高达110μg/g，具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调节、降糖等多种作用[8]。关于不同产地的蒲公英药材含量测定方法研究，2015年版《中国药典》规定蒲公英中咖啡酸含量不低于0.020%[1]；冯倩等[9]针对不同产地蒲公英以总黄酮和咖啡酸两者的含量作为质量评价指标，建立了总黄酮的测定方法；马杰等[10]通过高效液相色谱法测定咖啡酸和绿原酸的含量来比较不同产地的优劣；李超等[11]首次建立同时测定咖啡酸、菊苣酸、绿原酸的HPLC方法，为蒲公英药材及其制剂的质量控制提供依据。宁伟等[12]112-4[13]通过指纹图谱郝哲[14]发现不同产地的蒲公英中咖啡酸、绿原酸、阿魏酸的含量差别很大，说明蒲公英有效成分含量与地域、气候等因素有很大关系。吕惠子等[15]发现野生蒲公英与栽培蒲公英虽然在结构上有区别，但在成分上没有区别，可用栽培蒲公英代替野生蒲公英以扩大药源。杨辉等[16]选择了4个产地的野生和家种蒲公英样品，用高效液相色谱法测定其中咖啡酸和绿原酸含量，紫外-可见分光光度法测定其中多糖和总黄酮含量，发现咖啡酸、绿原酸和总黄酮在野生品和家种品之间没有显著差异，野生品的多糖含量显著高于家种品，因为野生品带根，根中多糖含量显著高于其他部位，认为咖啡酸作为蒲公英的质量控制成分可能不适合，建议增加蒲公英有效成分之一多糖的含量测定作为质量控制指标。冯倩等[9]发现安徽亳州人工种植黄酮含量高于野生采收，但咖啡酸含量较低。李喜凤等[13]认为不同采收期以春季花果期最好，且要全草采集。李诗雨等[17]发现8月中旬采摘的蒲公英全草中黄酮含量最高，达12.78mg/g；8月中旬采摘的蒲公英根中皂苷含量最高,达0.78mg/g；7月末采摘的蒲公英根中胆碱含量最高，达5.06mg/g。

10抗癌作用研究近年药理研究发现，蒲公英的提取物有防癌治癌的作用，这一发现为癌症的治疗带来了希望且国外使用蒲公英治疗癌症已经初具模式[18]。Ovadje等[19]发现蒲公英根提取物能有效诱导白血病(CMML)细胞和人T细胞白血病Jurkat细胞的凋亡和自噬，且随着作用时间和作用浓度的增加,细胞活性明显降低，但对外周血非癌单核细胞并无影响。蒲公英提取物对肿瘤有治疗作用的主要成分有多糖、黄酮、酚酸、三萜、植物甾醇等物质，蒲公英是一种天然野菜类中药，含有多种抗肿瘤活性成分，具有良好抗肿瘤效应，能有效杀伤宫颈癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞等[19]。蒲公英中的酚酸类成分，如咖啡酸、绿原酸等可抑制细胞周期，使细胞分化过程中断，从而抑制癌细胞的增殖分化，而且酚酸是良好的氧自由基清除剂，可减少氧自由基对健康细胞的损伤作用，从而保证细胞的正常生长，间接抑制癌细胞的生长[18]。11展望蒲公英是药食兼用的佳品，不仅具有多方面的药用价值，而且是一种营养价值很高的野生蔬菜。同时，蒲公英是开发绿色天然植物型营养保健品的理想宝贵资源，目前其他国家已先后开发了蒲公英饮料、蒲公英酒、咖啡、糕点、糖果以及蒲公英花粉和蒲公英根粉等保健食品，受到各界人士的青睐。一直以来，蒲公英广泛分布于全国各地，资源极其丰富，我们应充分利用这一有利条件，加强蒲公英的生物活性研究，进行深度开发利用，大力发展蒲公英产业，以期创出巨大的经济效益。基于蒲公英的众多优点尤